杜仲有效成分分析及杜仲藥理作用簡(jiǎn)介 |
發(fā)布時(shí)間:2020-03-07 信息來源:上禾生物 發(fā)布人:上禾生物 點(diǎn)擊次數(shù):2988 |
杜仲有效成分分析及杜仲藥理作用簡(jiǎn)介
三、杜仲藥理作用 2.對(duì)免疫功能的影響:。 2.1.對(duì)細(xì)胞免疫功能的影響:。 2.1.1.對(duì)DNCB(2,4-二硝基氯苯)所致小鼠遲發(fā)型超敏反應(yīng)的影響:昆明種小鼠,體重18-22g,分成六組,每組25只,藥物組灌胃杜仲液(10ml/kg/d)共10次,對(duì)照組分別灌胃去離子水和間日皮下注射環(huán)磷酰胺(30mg/kg/d)共3次?瞻缀退幬锝M在給藥第3天,環(huán)磷酰胺組在給藥后第2天皮下注射7%DNCB丙酮溶液(0.02ml/只)致敏,間隔2天同劑量再致敏1次,于第一次致敏后第10天,用1%DNCB丙酮液0.02ml,涂布左耳攻擊,右耳作對(duì)照,24小時(shí)后處死動(dòng)物,煎取兩耳稱重,以兩耳重量之差值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理。兩次結(jié)果一致。表明灌胃杜仲皮、葉、枝、再生皮均能抑制DNCB所致小鼠的遲發(fā)型超敏反應(yīng)。 2.1.2.對(duì)小鼠外周血液中T細(xì)胞百分比的影響:動(dòng)物分組,每組10只,藥物組分別按10ml/kg體重灌胃藥物,對(duì)照組給以同體積去離子水,連續(xù)8次,于末次給藥后lh鼠尾取血涂片,孵育、染色、鏡檢,每只動(dòng)物血片標(biāo)本均查100個(gè)淋巴細(xì)胞,計(jì)算T和B淋巴細(xì)胞的百分比。結(jié)果杜仲對(duì)正常小鼠T淋巴細(xì)胞百分比均未見有影響。用同樣方法,除空白組外,其余各組小鼠在給藥的同時(shí)均皮下注射氫化可的松40mg/kg,測(cè)定藥物并用氫化可的松對(duì)外周血中T細(xì)胞百分比的影響。由于氫化可的松抑制細(xì)胞免疫,使T細(xì)胞百分比與空白組比較明顯降低(P<0.001),但服用黃芪和杜仲各組的T細(xì)胞百分比與正常組比較均無明顯差別(P>0.05),而與氫化可的松組比較側(cè)均有非常顯著的差異(P<0.001),表明杜仲同黃芪一樣,能對(duì)抗氫化可的松免疫抑制作用,具有調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫平衡的功能。動(dòng)物分組,每組10只,除空白組外,各組動(dòng)物均分別在前腋下移植民S180細(xì)胞懸液(l:3)0.2ml,4天后開始灌胃藥液(20ml/kg.d),連續(xù)8天,空白和帶瘤對(duì)照組灌胃同體積去離子水,于末次給藥后lh,取血同前法制作血片,鏡檢。荷瘤動(dòng)物的細(xì)胞免疫水平比正常動(dòng)物低下,兩者T細(xì)胞百分比有顯著差別(P<0.05),而服用杜仲各組的荷瘤動(dòng)物的T細(xì)胞百分比明顯回升,與正常動(dòng)物組比較無顯著差異(P>0.05),與未服藥的荷瘤動(dòng)物組比較則有顯著差別(P<0.05),重復(fù)一次實(shí)驗(yàn),結(jié)果一致,表明杜仲葉、皮、枝、再生皮均有增強(qiáng)荷瘤小鼠細(xì)胞免疫功能的作用。但藥物各組的腫瘤重量與帶瘤對(duì)照組比較未見明顯差別(P>0.05)。 2.對(duì)體液免疫功能的影響:。 2.1.對(duì)小鼠血清溶血素形成的影響小鼠依窩別、性別、體重均分于各組,連續(xù)給杜仲水煎劑10ml/kg/d灌胃8天后,眼眶取血測(cè)定HC50,結(jié)果空白組、藥物組的HC50分別為179.91,162.24,兩組間無顯著差別(P>0.05),環(huán)磷酰胺組于致敏當(dāng)天一次肌肉注射(20mg/kg體重)的HC50為96.43,非常顯著的抑制正常小鼠血清溶血素的形成。以環(huán)磷酰胺20mg/kg體重于致敏的前一天、同天和間隔l天共3次頸部皮下注射造成小鼠溶血素形成低下。上述小鼠給予杜仲水煎劑10ml/(kg.d)10天,取血測(cè)定HC50。結(jié)果空白組、環(huán)磷酰胺對(duì)照組和藥物組的HC50分別為242.83、34.04和29.460表明杜仲對(duì)環(huán)磷酰胺所致血清溶血素形成低下小鼠無明顯影響(P>0.05)。 2.2.2.對(duì)天花粉所致小鼠速發(fā)型超敏反應(yīng)的影響以天花粉0.1mg/每鼠和0.2mg/每鼠間日頸部皮下注射致敏共2次。于致敏前一天開始給小鼠灌胃杜仲水煎劑10ml/kg,每天1次,連續(xù)5天后改為間日給藥1次,共給藥10次。另以天花粉50mg/每鼠(溶于5%氫氧化鋁液內(nèi))一次腹腔注射致敏,并同時(shí)按上法給藥,共給藥9次。實(shí)驗(yàn)于致敏后第15天每鼠靜脈注射天花粉0.3mg攻擊,記錄動(dòng)物死亡數(shù)。結(jié)果杜仲對(duì)天花粉可致小鼠速發(fā)型超敏反應(yīng)均未見明顯影響(P>0.05)。 2.2.3.對(duì)蛋清所致豚鼠過敏性休克的影響:按鄧文龍方法,給藥方法同上述天花粉實(shí)驗(yàn)不加致敏后第15天進(jìn)行攻擊。結(jié)果杜仲對(duì)蛋清所致豚鼠過敏性休克無保護(hù)作用(P>0.05)。 2.3.對(duì)非特異性免疫功能的影響:。 2.3.1.對(duì)小鼠血中炭末廊清率的影響小白鼠100只,體重25-28g,雌雄并用。均分為藥物組和對(duì)照組。藥物組按6g/kg,每天口服杜仲水煎劑1次,連續(xù)6天。對(duì)照組分別口服同容積常水和黨參一黃芪煎劑(各3g/kg)。于末次給藥后24小時(shí),各組小鼠分別由尾靜脈注射印度墨汁0.2ml,注射后2分鐘和20分鐘分別從眶靜脈取血25ul,吸洗至0.1%Na2CO2,2ml溶液中,搖勻,用72型分光光度計(jì)測(cè)定650mm的光密度,按公式計(jì)算吞噬指數(shù)K,K=(logC1-logC2)/(T2-T1),式中C1為2分鐘(T1)血樣的光密度,C2為20分鐘(T2)血樣的光密度。K值與小鼠網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬功能成正比?梢姸胖倨ぁ⑷~、枝、再生皮及黨參-黃芪組的吞噬指數(shù)增大,與常水組比較相差顯著,P<0.05或0.001,表明它們能激活單核巨噬細(xì)胞系統(tǒng)的吞噬活血,提高小鼠網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬功能。 2.3.2.對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的影響:小白鼠129只,分兩批進(jìn)行試驗(yàn)。藥物組按12g/kg,每天口服杜仲水煎劑1次,連續(xù)6天,對(duì)照組分別口服同容積生理鹽水和黨參-黃芪煎劑(各6g/kg),各組于給藥6天后分別腹腔注射鮮牛肉湯1ml/只,24小時(shí)后再腹腔注射2%雞紅細(xì)胞生理鹽水懸浮液0.5ml,40分鐘后處死動(dòng)物,取腹腔炎性滲出物涂片,瑞氏染色,鏡檢,計(jì)算吞噬百分率和吞噬指數(shù)(兩批實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致,合并計(jì)算)。杜仲皮、葉、枝、再生皮的吞噬百分率和吞噬指數(shù)顯著增大,表明杜仲具有增強(qiáng)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的作用。小鼠168只,分兩批實(shí)驗(yàn),方法同前,只是從第3天給藥起,除空白組外,各組小鼠每天分別再肌肉注射氫化可的松20mg/kg,連續(xù)給藥3天。兩批實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致,并計(jì)算見表9?梢娪捎跉浠傻乃傻囊种凭奘杉(xì)胞對(duì)抗原的處理和攝取,使氫化可的松組的吞噬百分率和吞噬指數(shù)非常顯著減少、而杜仲皮、葉、枝和再生皮組的吞噬百分率和吞噬指數(shù)比生理鹽水+氫化可的松組非常顯著增高。而且其值比空白生理鹽水組還大。表明杜仲能調(diào)整機(jī)體的免疫功能,對(duì)抗氫化可的松的免疫抑制作用。動(dòng)物分組、每組10只,除空白組外,各組動(dòng)物均分別右前腋下移植S180細(xì)胞懸液(l:3)0.2ml,并分別開始口服杜仲水煎劑(12ml/kg/d),連續(xù)12次,對(duì)照組灌服同體積去離子水,于末次給藥后24小時(shí)按上法測(cè)定腹腔噬細(xì)胞的吞噬百分率和吞噬指數(shù)。荷瘤小鼠腹腔巨噬細(xì)胞功能與正常動(dòng)物組比較明顯降低,其吞噬百分率和吞噬指數(shù)顯著減少(P<0.01)。但服用杜仲的荷瘤小鼠無論是吞噬百分率和吞噬指數(shù)與帶瘤對(duì)照組比較,均明顯升高(P<0.001或0.01),并使之恢復(fù)到正常水平,表明杜仲皮、葉、枝、再生皮有增強(qiáng)荷瘤小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬功能的作用。 3.對(duì)垂體-腎上腺皮質(zhì)系統(tǒng)功能的影響:。 3.1.對(duì)大鼠蛋白性足腫脹的影響:大鼠60只,體重115-170g,按體重和性別均分為藥物組和對(duì)照組。藥物組按6g/kg/d,口服給予醇沉杜仲水煎液,連續(xù)給藥8天,對(duì)照組予生理鹽水。用容積法測(cè)量鼠足腫脹值;結(jié)果致炎3小時(shí)后,服用杜仲皮、葉、再生皮組的鼠足腫脹值減小,與對(duì)照組比較,相差顯著(P<0.05),但杜仲枝的作用則不明顯(P<0.05)。 3.2.對(duì)大鼠外周血液中嗜酸性粒細(xì)胞的影響:大鼠96只,體重為50-80g,按體重和性別均勻分組。藥物組按6g/kg/d,分別口服給予杜仲皮、葉、枝、再生皮水煎劑,連續(xù)給藥6天,另用口服同體積生理鹽水,并于實(shí)驗(yàn)前4小時(shí)肌注醋酸可的松50mg/kg作對(duì)照。用直接計(jì)數(shù)法測(cè)定大鼠外周血中嗜酸性粒細(xì)胞數(shù),分別與各自給藥前測(cè)定2天的平均正常值比較,計(jì)算嗜酸性粒細(xì)胞降低百分率。可見杜仲皮、葉、枝、再生皮和醋酸可的松一樣能使大鼠外周血液中嗜酸性粒細(xì)胞減少。另用95只摘除腎上腺大鼠,同上服藥后,杜仲各組大鼠的外周血液中嗜酸性粒細(xì)胞未見減少,鼠生存期亦未見有延長(zhǎng)。兩相比較說明杜仲的作用依賴于腎上腺的存在。 3.3.對(duì)小鼠外周血液中淋巴細(xì)胞的影響:小鼠170只。體重18-22g,均勻分組,分二批進(jìn)行實(shí)驗(yàn),按10g/kg/d口服給予杜仲皮、葉、枝、再生皮水煎劑,連續(xù)給藥5天,另用口服生理鹽水和肌注氫化可的松(20mg/kg)組作對(duì)照,鼠尾部取血涂片,記錄每100個(gè)白細(xì)胞中的淋巴細(xì)胞數(shù)。兩批實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致,合并計(jì)算。可見杜仲皮、葉、枝、再生皮均可使小鼠血中淋巴細(xì)胞百分率降低,與生理鹽水組比較相差非常顯著(P<0.001),與氫化可的松組比較相差則不顯著(P<0.05),表明杜仲(皮、葉、枝和再生皮)和氫化可的松一樣均具有使小鼠血中淋巴細(xì)胞減少的作用。 3.4.對(duì)糖代謝的影響:。 3.4.1.對(duì)小鼠肝糖元的影響雄性小鼠122只,體重25-30g,均勻分組,分2批進(jìn)行實(shí)驗(yàn),藥物組按10g/kg給予杜仲皮、葉、枝、再生皮水煎劑,連續(xù)給藥8次,另用口服常水和肌注氫化可的松40mg/kg(末兩天注射)組作對(duì)照。實(shí)驗(yàn)各組小鼠停食14小時(shí)后,每鼠口服葡萄糖(10g/kg),3小時(shí)后處死動(dòng)物,取肝臟測(cè)定肝糖元。兩批實(shí)驗(yàn)結(jié)果趨勢(shì)一致,合并計(jì)算,可見,杜仲皮、葉、枝、再生皮和氫化可的松一樣均使小鼠肝糖元含量增高,與常用組比較,相差非常顯著(P<0.001)。表明杜仲有促進(jìn)肝糖元堆積的作用。 3.4.2.對(duì)小鼠血糖的影響小鼠130只,體重25-27g,均勻分組。分二批進(jìn)行實(shí)驗(yàn),藥物按10g/kg次,每日口服給藥2次,連續(xù)給藥9次。另用口服常水和肌肉注射氫化可的松30mg/kg(實(shí)驗(yàn)前2小時(shí)注射)組作對(duì)照,實(shí)驗(yàn)前24小時(shí)各組動(dòng)物禁食,于末次給藥后2小時(shí)取血漿測(cè)定血糖,兩批實(shí)驗(yàn)趨勢(shì)一致,合并計(jì)算?梢姸胖倨ぁ⑷~、枝、再生皮和氫化可的松一樣均使小鼠血糖含量增高。與常水組比較相差非常顯著(P<0.01或0.001)。表明杜仲皮、葉、枝、再生皮均有使血糖增高的作用。 3.5.對(duì)幼年小鼠胸腺的影響:仿AC-TH生物檢定法,將體重8-l1g斷乳的幼年小鼠,按窩別和體重,隨機(jī)分組。藥物分10g/(kg.d)和20g/(kg.d)兩個(gè)劑量進(jìn)行實(shí)驗(yàn),皮下注射給藥,連續(xù)給藥5天。另用皮下注射同體積生理鹽水和ACTH0.5單位/只鼠(末3次每天注射1次)作對(duì)照,將鼠處死,稱重,取胸腺準(zhǔn)確稱量(I0.5mg),計(jì)算每100g體重的胸腺重量(mg)的平方根值?梢娫趧┝繛10g/kg時(shí),杜仲皮和ACTH組的小鼠胸腺萎縮,與生理鹽水組比較相差顯著(P<0.05),而枝葉則不明顯(P>0.05);但當(dāng)劑量增加為20g/kg,杜仲皮、葉、枝、再生皮,均使小鼠胸腺顯著萎縮(P<0.01或0.001),表明杜仲與ACTH同樣具有使小鼠胸腺萎縮的作用。但枝、葉劑量要大。 3.6.對(duì)大鼠腎上腺中維生素C含量的影響:體重60-90g的雄性大鼠37只,均勻分組,藥理組按10g/(kg·d)口服給藥,連續(xù)給藥8天。另用口服生理鹽水組作對(duì)照。動(dòng)物斷頭處死,取腎上腺測(cè)定其中維生素C含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果杜仲皮、葉、枝組大鼠腎上腺中維生素C含量與生理鹽水組比較,雖有降低,但無顯著差異(P>0.05)。 3.7.對(duì)大鼠血漿皮質(zhì)醇的影響:大鼠69只,均勻分組。藥物組按10g/kg,每日口服給藥2次,連續(xù)給藥8天。另用口服常水和肌肉注射醋酸可的松(實(shí)驗(yàn)前4小時(shí)肌注50mg/kg)和皮下注射ACTH組(實(shí)驗(yàn)前3小時(shí)皮下注射2單位/100g)對(duì)照。于末次給藥后1小時(shí)將鼠斷頭處死,收集血液,離心取血漿測(cè)定皮質(zhì)醇含量?梢姸胖倨、葉、枝、再生皮和ACTH一樣,能使大鼠血漿皮質(zhì)醇含量增加,與常水組比較,差異非常顯著(P<0.01或(0.001)。表明杜仲使皮質(zhì)醇分泌增加,并釋放入血液中。 4.抗腫瘤作用:制備紅杜仲的水提醇沉液A及注射液B,按照篩選規(guī)程對(duì)此兩制劑進(jìn)行體內(nèi)抗腫瘤試驗(yàn)。制劑A對(duì)小鼠S180實(shí)體瘤的生長(zhǎng)有明顯抑制,經(jīng)3次實(shí)驗(yàn)重復(fù)有效,抑制率31-52%。對(duì)小鼠U14實(shí)體瘤的生長(zhǎng)也有抑制作用。制劑B對(duì)民S180實(shí)體瘤的作用不穩(wěn)定,三次實(shí)驗(yàn)僅一次抑制率為45%,制劑B為制劑A除去鞣質(zhì)后所得制劑,因此可推測(cè)制劑A的抗腫瘤作用可能為鞣質(zhì)或與明膠一起結(jié)合或沉淀的物質(zhì)所致。 5.抗炎作用:給大鼠灌胃或皮下注射紅杜仲注射液400g(原生藥)/kg后,能減輕蛋清所致的足腫脹。皮下注射給藥作用強(qiáng)于灌胃給藥。在前2小時(shí)的作用比25mg/kg的氫化考的松的作用強(qiáng),以后作用相當(dāng),均能維持6小時(shí)以上。皮下注射200g(原生藥)/kg紅社仲注射液也能抑制醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高,腹腔沖洗液的光密度為0.116±0.055,與對(duì)照組0.212±0.047相比顯著為低(P<0.01)。 6.降壓作用:實(shí)驗(yàn)動(dòng)物兔(2.5-3.2kg)7只,狗(15kg)2只,雌雄兼用。動(dòng)物麻醉后,按常規(guī)方法分離頸總動(dòng)脈及氣管并插管,聯(lián)接于水銀檢壓計(jì),用JL-3三道生理記錄儀記錄其血壓及呼吸。以100%生杜仲、炒杜仲和砂燙杜仲的水煎劑分別由頸靜脈給藥,劑量為1ml/kg。3種杜仲水煎劑對(duì)家兔和狗都有明顯的降壓作用,但生杜仲降壓作用較弱,炒杜仲炭和砂燙杜仲的作用幾乎完全相同,其降壓的絕對(duì)值數(shù)相當(dāng)于生杜仲的兩倍。 7.對(duì)子宮的抑制作用:將150-220g的雌性大白鼠猛擊頭部致死后,立即取出子宮分叉處外的一段,洗去血液,懸掛于YSD-離體器官測(cè)定儀上、營(yíng)養(yǎng)液為洛氏液,調(diào)節(jié)恒溫至31℃±0.2℃,通入空氣,在10ml營(yíng)養(yǎng)液中加入100%杜仲水煎液0.5ml,保證給藥、記錄時(shí)間的一致性,記錄3種不同杜仲樣品對(duì)子宮的影響和對(duì)抗垂體后葉素的作用。結(jié)果見表20,可見3種杜仲均能顯著抑制大白鼠離體子宮的自發(fā)活動(dòng),降低其頻率。同時(shí),還可見到其收縮強(qiáng)度降低。另外,3種杜仲均能對(duì)抗垂體后葉素對(duì)離體子宮的作用。另鹽炙杜仲對(duì)中孕小白鼠離體子宮自主收縮的抑制作用增強(qiáng)。 8.強(qiáng)壯作用:。 8.1.對(duì)動(dòng)物活動(dòng)能力的影響:取體重22±2g的小白鼠,雌雄不拘,隨機(jī)分成給藥組和對(duì)照組,按小白鼠游泳法進(jìn)行抗疲勞試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)時(shí),置小白鼠于水溫28℃±1℃、容積為64×34×40cm的游泳槽內(nèi),測(cè)試鼠沉入水面下7秒所需時(shí)間。結(jié)果自飲組:7天組(n=22)和14天組(n=18),自飲100%杜仲皮和150%杜仲葉煎劑,并與對(duì)照組比較,游泳時(shí)間差異無顯著意義(P>0.05)。給藥組:21天組給予杜仲皮煎劑15g/kg,杜仲葉煎劑20g/kg灌胃,并與常水對(duì)照組相比,皮煎劑組差異有顯著意義(P<0.05),葉煎劑組差異無顯著性意義(P>0.05)。 8.2.對(duì)動(dòng)物抵抗能力的影響:。 8.2.1.小白鼠抗凍實(shí)驗(yàn):取體重22±2g的小白鼠,雌雄不拘,隨機(jī)分成給藥組和對(duì)照組,實(shí)驗(yàn)前禁食10小時(shí),分別給以杜仲皮、葉煎劑及葉沖劑,以常水對(duì)照,按性別將體重相近的小白鼠,每2只置于同一鐵籠中,放入-3℃的冰箱中,測(cè)試動(dòng)物生存時(shí)間(X±SD)。結(jié)果:自飲30天:10%杜仲皮煎劑組小白鼠生存時(shí)間為242.0±74.0分鐘(n=14);10%杜仲葉煎劑組為249.0±59.0分鐘(n=20);常水對(duì)照組為175.0±58分鐘(n=17)。用藥組和對(duì)照組之間有顯著差異(P<0.01)。自飲28天,20%杜仲葉沖劑組生存時(shí)間為261.0±41.0分鐘(n=7),常水對(duì)照組為174.0±53分鐘(n=14),兩組差異有顯著意義(P<0.05)。 8.2.2.小白鼠耐缺氧實(shí)驗(yàn)小白鼠分別給予杜仲皮煎劑和杜仲時(shí)沖劑,以生理鹽水或常水對(duì)照,受試鼠以只為單位,放入容量為250ml的廣口瓶?jī)?nèi),瓶口涂凡士林密封,測(cè)試動(dòng)物在瓶?jī)?nèi)的成活時(shí)間(X±SD)。結(jié)果:100%杜仲皮煎劑10g/kg灌胃組,小白鼠成活時(shí)間為46.0±12.0分鐘(n=7),生理鹽水0.1ml/kg組為32.0±12.0分鐘(n=9),兩組差異有顯著意義(P<0.05);20%杜仲葉沖劑自飲28天組,小白鼠成活時(shí)間為34.0±6.0分鐘(n=7),常水對(duì)照組為27.0±5.0分鐘(n=11),兩組差異有顯著意義(P<0.05)。 9.對(duì)血漿cAMP和cGMP含量的影響:昆明種小鼠,按窩別、性別和體重,每2只為1對(duì),均分對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組,每給10對(duì)。按10ml/kg體重灌胃杜仲醇沉水煎液,對(duì)照組予等量去離子水,每天組藥1次,連續(xù)5天,于末次給藥后1h,斷頭取血,以每一對(duì)2只動(dòng)物血樣合為1個(gè)樣本,用放射免疫法測(cè)定血漿中cAMP和cGMP含量、結(jié)果對(duì)照組cAMP含量為70.88±4.53(X±SE下同),杜仲皮組cAMP含量為100.39±15.45(P<0.05);cGMP含量,對(duì)照組為54.50±16.42,杜仲皮組137·84±25.08(P<0.05),表明杜仲可同時(shí)使血漿中cAMP和cGMP含量升高,顯示杜仲對(duì)環(huán)核苷酸代謝有調(diào)節(jié)作用。同時(shí)實(shí)驗(yàn)證明杜仲葉、枝、再生皮亦可引起血漿中cAMP和cGMP含量升高。杜仲有效成分分析及杜仲藥理作用簡(jiǎn)介杜仲有效成分分析及杜仲藥理作用簡(jiǎn)介
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