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天然抗癌產(chǎn)物因其副作用小、分布廣的特點(diǎn)而備受關(guān)注。諸多研究[3-6]證實(shí)，綠茶的多酚類物質(zhì)具有預(yù)防和控制癌癥的功效。兒茶素類是綠茶中主要的多酚類物質(zhì)，具有多種生物活性，其中的表沒食子兒茶素沒食子酸酯（epigallocatechin-3-gallate，EGCG）約占綠茶兒茶素總量的50%～80%，并且生物活性最高[7]。EGCG屬于黃烷醇類，其分子結(jié)構(gòu)中含有3個芳香環(huán)（A、B、D），3者由1個吡喃環(huán)（C）連接在一起。EGCG的這種結(jié)構(gòu)使其具有強(qiáng)抗氧化性，這種抗氧化活性源自B和/或D環(huán)上羥基的氫原子或單電子轉(zhuǎn)移[8]。EGCG是1個兩性分子，具有既親水又親脂的特點(diǎn)[9]，此特點(diǎn)使其不僅可在體液環(huán)境中充分溶解并廣泛分布，而且可使其穿過細(xì)胞膜與細(xì)胞內(nèi)的靶點(diǎn)相結(jié)合。EGCG這種特有的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)賦予了其抗癌特性，使其不僅可在癌變起始階段發(fā)揮預(yù)防癌癥的作用，而且在控制癌癥的進(jìn)展和轉(zhuǎn)移過程中也具有重要意義，EGCG可作用于多種癌癥類型如肝癌[10]、肺癌[11]和前列腺癌[12]等。

本文從抗氧化、促氧化、阻滯癌細(xì)胞周期、抑制腫瘤細(xì)胞血管形成、誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡和調(diào)控micro RNA等幾方面綜述了近年來國內(nèi)外EGCG抗癌分子機(jī)制的研究現(xiàn)狀。需著重強(qiáng)調(diào)的是本文歸納總結(jié)了影響EGCG抗氧化和促氧化作用轉(zhuǎn)變的因素。筆者認(rèn)為EGCG兼具抗氧化作用和促氧化作用，而在不同的生理環(huán)境下，這2種作用的著重性有所不同，從而可在不同的癌變階段發(fā)揮不同的功能：在預(yù)防癌變發(fā)生的階段，其增加機(jī)體內(nèi)源性抗氧化能力進(jìn)而清除活性氧起主導(dǎo)作用；而在控制癌癥發(fā)展階段則是促氧化殺傷癌細(xì)胞作用更為重要。另外，為解決EGCG生物利用度低的問題，本文概述了目前改善此問題的3種策略：納米包裝技術(shù)、EGCG的協(xié)同聯(lián)用和分子修飾技術(shù)（例如乙�；疎GCG等等，本公司可以提供EGCG乙�；�，甲基化，糖苷化修飾等服務(wù)，歡迎咨詢）。本文旨在對EGCG抗癌分子機(jī)制及其應(yīng)用改善策略的研究進(jìn)展進(jìn)行綜述和展望，以期為進(jìn)一步探索EGCG抗癌機(jī)制及其應(yīng)用，以及癌癥治療藥物或輔助治療藥物開發(fā)利用的發(fā)展方向提供參考。

1  EGCG的抗癌分子機(jī)制

1.1  調(diào)控氧化應(yīng)激

自由基是人體內(nèi)的一類非�；钴S的基團(tuán)，包括過氧化氫（H2O2）、超氧陰離子自由基和羥基自由基（•OH）等，若自由基的產(chǎn)生和清除失去平衡，活性氧（ROS）系列物將長期存在，進(jìn)而引起細(xì)胞的氧化應(yīng)激反應(yīng)。ROS影響機(jī)體內(nèi)一些蛋白質(zhì)和酶的活性并導(dǎo)致DNA發(fā)生氧化損傷，ROS還可激活核轉(zhuǎn)錄因子-κB（NF-κB），NF-κB調(diào)節(jié)癌癥相關(guān)細(xì)胞因子和相關(guān)酶的表達(dá)，如腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、環(huán)氧合酶（COX）和基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）等，最終引發(fā)細(xì)胞癌變[13]。

EGCG是一種常用的抗氧化劑，可減輕ROS的氧化損傷，在防癌和控癌方面有著重要作用。目前有較多的研究發(fā)現(xiàn)EGCG存在促氧化作用[14-16]，表明EGCG不僅具有較強(qiáng)的抗氧化作用，而且在某些情況下顯示出促氧化的特性。

1.1.1  抗氧化 EGCG的結(jié)構(gòu)中含有多個鄰位或間位酚羥基，這些羥基是其抗氧化和清除自由基的主要活性官能團(tuán)[17]。EGCG減輕ROS脅迫的途徑包括：（1）直接清除過多的ROS[18]；（2）提高抗氧化物酶活性，使相關(guān)酶更高效地清除ROS；（3）螯合金屬離子；（4）調(diào)控細(xì)胞信號傳導(dǎo)通路�？寡趸�功能的基本機(jī)制是抑制氧化還原敏感性轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)，如NF-κB、核內(nèi)激活蛋白1（AP-1）等[19]。高文波等[20]發(fā)現(xiàn)EGCG通過抑制促氧化酶的活性和上調(diào)抗氧化酶 [如谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）等] 的活性達(dá)到抗氧化的目的。EGCG能通過螯合Zn2+、Cu 2+、Fe3+等金屬離子形成非活性化合物，防止金屬離子發(fā)生氧化作用，避免自由基的產(chǎn)生[21]。EGCG可激活大鼠體內(nèi)的核轉(zhuǎn)錄因子E2相關(guān)因子2（Nrf2）/Kelch樣ECH相關(guān)蛋白1（Keap1）通路，進(jìn)而消除氟化物引起的氧化性肺損傷[22]。

1.1.2  促氧化 EGCG作為一種抗氧化劑，其自身也可發(fā)生氧化。EGCG自氧化機(jī)制是基于EGCG醌、EGCG二聚醌等相關(guān)化合物的形成[23]。EGCG不穩(wěn)定，B環(huán)和D環(huán)都可以發(fā)生氧化，EGCG在自氧化過程中的主要氧化位點(diǎn)是B環(huán)，EGCG的自氧化進(jìn)一步導(dǎo)致ROS的形成[24]。有研究發(fā)現(xiàn)不論培養(yǎng)基中有無細(xì)胞，EGCG都可自動氧化產(chǎn)生H2O2，添加SOD和過氧化氫酶（CAT）可抑制EGCG的自氧化和二聚作用[25]。

EGCG促氧化能夠產(chǎn)生ROS，造成細(xì)胞氧化逆境，對于損傷及殺死癌細(xì)胞具有重要作用。EGCG產(chǎn)生的ROS中至少包括H2O2和超氧陰離子自由基2種自由基[26]。EGCG產(chǎn)生ROS的方式：通過鄰苯三酚部分產(chǎn)生H2O2；激活芬頓（Fenton）反應(yīng)[27]；對Ca2+/鈣調(diào)素依賴性蛋白激酶（CaM kinase）的作用[28]。EGCG的促氧化作用所產(chǎn)生的高濃度的ROS可以誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，并有助于減小腫瘤大小，其促氧化作用所產(chǎn)生的低濃度ROS通過誘導(dǎo)內(nèi)源性抗氧化系統(tǒng)來保護(hù)機(jī)體免受致癌侵?jǐn)_[29]。ROS作為上游分子可觸發(fā)信號通路，如ROS/腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）信號的調(diào)控是EGCG抗腫瘤的機(jī)制之一[30]。N-乙酰半胱氨酸（NAC）具有清除自由基的活性，據(jù)報(bào)道其能保護(hù)H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞毒性，但不能保護(hù)EGCG誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡[27]。因此，EGCG誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞毒性還包括誘導(dǎo)線粒體損傷的腫瘤特異性機(jī)制。

1.1.3  抗氧化和促氧化  EGCG具有抗氧化作用和促氧化作用，這2種作用的性質(zhì)截然相反，EGCG實(shí)際發(fā)揮何種作用取決于細(xì)胞類型、濃度和所處環(huán)境的pH值[31]。

眾多研究表明細(xì)胞類型影響EGCG作用的發(fā)揮，通常EGCG在正常細(xì)胞組織中發(fā)揮抗氧化作用，而在腫瘤細(xì)胞中表現(xiàn)出促氧化特性，即EGCG對不同細(xì)胞存在差異性作用，如EGCG在正常細(xì)胞中具有抗氧化作用，但在口腔癌細(xì)胞中誘導(dǎo)氧化應(yīng)激[15]；EGCG減輕了化療對正常細(xì)胞的毒性，但卻導(dǎo)致了對癌細(xì)胞的毒性[14]；EGCG在正常結(jié)腸上皮細(xì)胞NCM460中發(fā)揮抗氧化作用，而在結(jié)腸癌細(xì)胞中表現(xiàn)出促氧化特性[32]。而EGCG這種差異性的具體機(jī)制仍有待進(jìn)一步研究。研究發(fā)現(xiàn)，與正常細(xì)胞相比，癌細(xì)胞中的ROS水平升高[33]。然而，高水平的ROS也會對癌細(xì)胞造成損傷，因此，它們可能依賴于一個強(qiáng)大的內(nèi)源性抗氧化系統(tǒng)，該系統(tǒng)能夠減輕氧化應(yīng)激，從而促進(jìn)癌細(xì)胞增殖[34]。因此，EGCG對腫瘤細(xì)胞的促氧化特性對于癌癥的治療有著重要意義。

EGCG在低濃度時主要發(fā)揮抗氧化作用，高濃度時主要發(fā)揮促氧化作用。EGCG對不同細(xì)胞存在差異性作用，低濃度的EGCG可發(fā)揮抗氧化作用從而抑制氧化應(yīng)激，使正常組織細(xì)胞免受致癌損傷[16]。研究表明大鼠攝入0.1% EGCG可以降低氧化應(yīng)激，在0.2%或0.5%EGCG則無此作用，表明EGCG的有效濃度是其促氧化或抗氧化的決定因素之一[35]。多項(xiàng)研究表明，高濃度的EGCG可發(fā)揮促氧化作用誘導(dǎo)ROS水平升高，最終致使腫瘤細(xì)胞凋亡[36-38]。另有研究發(fā)現(xiàn)[39]，EGCG較溫和的生物濃度為1～10 μmol/L，此濃度范圍的EGCG可產(chǎn)生低水平的ROS，進(jìn)而刺激多種信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，觸發(fā)正常細(xì)胞的保護(hù)機(jī)制。此外，EGCG所處環(huán)境的pH值也是影響其作用發(fā)揮的一個因素，如EGCG在pH 7時發(fā)揮抗氧化作用，而在酸性條件下表現(xiàn)出促氧化作用[40]。

EGCG兼具抗氧化和促氧化作用，其可在不同的癌變階段發(fā)揮不同的功能，如增加機(jī)體內(nèi)源性抗氧化能力在預(yù)防癌癥階段更為重要，而在清除體內(nèi)轉(zhuǎn)化細(xì)胞和限制腫瘤生長方面則是促氧化殺傷細(xì)胞作用更為重要。

1.2  阻滯腫瘤細(xì)胞周期

細(xì)胞周期是連續(xù)分裂的細(xì)胞從上一次有絲分裂結(jié)束到下一次有絲分裂完成所經(jīng)歷的整個過程，包含DNA合成前期（firstgap，G1期）、DNA合成期（synthesis，S期）、DNA合成后期（second gap，G2期）和細(xì)胞分裂期（mitosis，M期）。與正常細(xì)胞一樣，腫瘤細(xì)胞具有一定的細(xì)胞周期，而腫瘤細(xì)胞的周期調(diào)控機(jī)制發(fā)生紊亂，引起細(xì)胞無限增殖。因此誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞周期阻滯有望成為腫瘤防治的有效途徑。

在正常的細(xì)胞生理進(jìn)程中，細(xì)胞周期的調(diào)控涉及到周期蛋白（Cyclin）和周期蛋白依賴性激酶（CDKs）結(jié)合形成的復(fù)合物Cyclin D/CDK4、6和Cyclin E/CDK2，它們聯(lián)合驅(qū)動細(xì)胞周期。同時，Cyclin D依賴性CDK將視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白（retinoblastomaprotein，Rb）磷酸化，打破其與轉(zhuǎn)錄因子E2F的結(jié)合，則E2F可誘導(dǎo)表達(dá)調(diào)控細(xì)胞周期的相關(guān)基因[41]。一般情況下，腫瘤細(xì)胞中的Cyclin和CDKs都會過度表達(dá)[42]。Kruppel樣因子4（KLF4）是哺乳動物KLF家族成員之一，是一種DNA結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子，可調(diào)節(jié)多種細(xì)胞過程，包括增殖、分化、凋亡和運(yùn)動等[43]。研究發(fā)現(xiàn)KLF4可通過下調(diào)Cyclin D1以及上調(diào)p21的表達(dá)而顯示出治療癌癥的功能[44]。在多種癌組織中發(fā)現(xiàn)KLF4的抑癌作用，如胃癌[45]、前列腺癌[46]、肺癌[47]和膀胱癌[48]等。在KLF4抑癌作用的研究中，目前僅在胃癌細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)EGCG可通過介導(dǎo)調(diào)控KLF4的表達(dá)而發(fā)揮抑癌作用，將EGCG處理胃癌細(xì)胞系NCI-N87，發(fā)現(xiàn)EGCG可劑量依賴性地上調(diào)KLF4的表達(dá)，從而增加p21并減少CDK4和Cyclin D1的表達(dá)，使癌細(xì)胞阻滯于G0/G1期[45]。此外，張春霞等[49]研究發(fā)現(xiàn)，EGCG可將HT29細(xì)胞阻滯于S期，阻礙其向G2期轉(zhuǎn)化，從而發(fā)揮抗結(jié)腸癌細(xì)胞的作用。張勇等[50]研究發(fā)現(xiàn)，EGCG可通過影響相關(guān)炎癥信號分子的表達(dá)，如上調(diào)TNF-α蛋白、下調(diào)血紅素氧合酶（HO-1）蛋白和白細(xì)胞介素-10（IL-10）水平，從而將細(xì)胞阻滯于G2/M期，最終導(dǎo)致肝癌細(xì)胞凋亡。因此，在癌細(xì)胞周期的4個階段，EGCG均可發(fā)揮阻滯效應(yīng)，以G0/G1期的阻滯作用最為明顯。

1.3  抑制腫瘤血管生成

腫瘤難以治療的原因之一是腫瘤轉(zhuǎn)移，轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的基本特征。血管生成是一個從已有血管中形成新血管網(wǎng)絡(luò)的過程，其為癌細(xì)胞提供養(yǎng)分、氧氣以及處理代謝廢物，對腫瘤的發(fā)生、侵襲和轉(zhuǎn)移產(chǎn)生重要作用[51]。研究表明[52-53]，良性腫瘤血管生成疏少且緩慢；而惡性腫瘤血管生成密集且迅速。因此，抑制腫瘤血管生成是治療腫瘤的重要策略之一。

在血管生成過程中，血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子（VEGF）發(fā)揮著關(guān)鍵作用，VEGF促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂，對于刺激血管的形成具有較強(qiáng)的作用[54]。因此VEGF有望成為治療癌癥的靶點(diǎn)，EGCG對VEGF顯示出顯著作用：抑制VEGF的形成，包括抑制細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)激酶-1（ERK-1）和ERK-2的激活及抑制轉(zhuǎn)錄活化因子（State 3）等；抑制VEGF與其受體結(jié)合；抑制VEGF的受體磷酸化。ERK-1/2具有抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)細(xì)胞生長的功能，ERK-1/2的激活這一過程可通過信號傳導(dǎo)引起VEGF mRNA的過度表達(dá)，而ERK-1和ERK-2受體酶的激活需要二價(jià)金屬離子。EGCG可鰲合二價(jià)金屬陽離子阻滯ERK-1和ERK-2的激活，進(jìn)而抑制VEGF的表達(dá)，最終抑制血管的生成[55]。EGCG可明顯抑制轉(zhuǎn)錄活化因子（Stat3）的活性，使VEGF的mRNA和蛋白表達(dá)受到影響，并且呈現(xiàn)出劑量依賴性關(guān)系[56]。此外，VEGF的信號傳導(dǎo)過程可形成多元復(fù)合物，引起蛋白激酶B（PKB，又稱Akt）通路的激活，進(jìn)而誘導(dǎo)細(xì)胞因子IL-8表達(dá)，促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖。若PKB通路失活，則會嚴(yán)重抑制其磷酸化，進(jìn)而抑制VEGF mRNA的轉(zhuǎn)錄[57]。Rodriguez等[58]研究發(fā)現(xiàn)，EGCG能抑制VEGF與其受體結(jié)合，影響多元復(fù)合物的形成，實(shí)現(xiàn)對PKB通路的抑制，并且會下調(diào)IL-8基因的表達(dá)，綜合作用抑制血管生成進(jìn)而控制腫瘤的轉(zhuǎn)移。

研究表明，表皮生長因子受體（EGFR）是VEGF的上游調(diào)節(jié)器，表皮生長因子（EGF）激活EGFR信號通路后，下游因子磷酸化，導(dǎo)致核轉(zhuǎn)錄因子激活蛋白-1（AP-1）過表達(dá)，進(jìn)而結(jié)合VEGF并使其被激活[59]。因此，EGCG靶向EGFR信號通路對于抑制血管生成、預(yù)防和治療癌癥具有重要意義。研究顯示EGCG可通過調(diào)節(jié)Wnt/Hh信號通路下調(diào)CyclinD1、c-myc、EGFR的表達(dá)，抑制肝癌的發(fā)生[60]。上述研究表明，EGCG可能會通過下調(diào)EGFR的表達(dá)而發(fā)揮抑制VEGF的作用，最終抑制癌組織的血管生成。

1.4  誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡

細(xì)胞凋亡被認(rèn)為是一種正常的生物學(xué)現(xiàn)象，凋亡是維持機(jī)體正常生理平衡的重要過程，在特定內(nèi)源、外源信號的誘導(dǎo)下被激活，是一種由細(xì)胞內(nèi)凋亡系統(tǒng)精細(xì)調(diào)控而發(fā)生的程序性死亡，能夠有效清除不必要或受損的細(xì)胞，在機(jī)體的發(fā)育過程中扮演著重要角色。引起惡性腫瘤的原因之一是腫瘤細(xì)胞喪失自發(fā)凋亡能力，所以最有效的抗癌途徑之一可能是誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡，目前大多數(shù)化療藥物都是通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡達(dá)到清除腫瘤細(xì)胞的作用。EGCG的抗腫瘤作用與其誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡有關(guān)，其誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的具體途徑與細(xì)胞類型、狀態(tài)、信號途徑中效應(yīng)器活性及功能等有關(guān)。

1.4.1  線粒體途徑  線粒體途徑在細(xì)胞凋亡中發(fā)揮著非同尋常的作用，眾所周知線粒體是真核細(xì)胞的能量代謝中心，也是ROS的主要代謝部位[61]，因此若線粒體受損，最直接的結(jié)果是細(xì)胞正常功能的喪失。過多的ROS會改變線粒體的通透性，導(dǎo)致具有水溶性的細(xì)胞色素C（CYC）釋放到細(xì)胞質(zhì)，同時線粒體正常的跨膜電位（Δψm）也將受到破壞，最終活化caspase級聯(lián)造成細(xì)胞凋亡[62]。Li等[63]研究發(fā)現(xiàn)，體外用EGCG處理肝癌SMMC 7721細(xì)胞后，CYC從線粒體被釋放到細(xì)胞質(zhì)，Δψm衰減，Bcl-2家族蛋白發(fā)生改變，caspase-3和caspase-9蛋白活化，最終誘導(dǎo)SMMC-7721細(xì)胞凋亡。EGCG在癌細(xì)胞中存在促氧化性，EGCG可通過促進(jìn)ROS的生成，引起氧化應(yīng)激導(dǎo)致線粒體釋放CYC，并激活caspase-3，最終誘導(dǎo)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞凋亡[64]。

1.4.2  Bcl-2途徑 Bcl-2是一種常見的凋亡抑制基因（凋亡抑制基因家族有Bcl-2、c-myc等，促進(jìn)細(xì)胞凋亡的基因有Fas、Bax、Bak、p53等），在生長旺盛的細(xì)胞及多數(shù)腫瘤細(xì)胞中均有表達(dá)或異常表達(dá)，其過度表達(dá)可使正常的細(xì)胞凋亡受到抑制從而延長細(xì)胞壽命[65]，使本應(yīng)死亡的細(xì)胞繼續(xù)生存，最終導(dǎo)致細(xì)胞過度增殖而引發(fā)癌變。細(xì)胞內(nèi)Bcl-2和Bax的表達(dá)比率決定細(xì)胞是否存活，兩者比率升高，細(xì)胞不易發(fā)生凋亡，若比率降低則引起細(xì)胞凋亡。在EGCG對宮頸癌HeLa細(xì)胞凋亡的研究中發(fā)現(xiàn)，EGCG可以通過調(diào)節(jié)Bcl-2家族蛋白的表達(dá)激活capsase的活性，使Bax蛋白表達(dá)量升高，并下調(diào)Bcl-2蛋白的表達(dá)，使得Bcl-2/Bax值減小，并呈劑量依賴性，提高capsase-3的表達(dá)水平，最終誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[66]。

1.4.3  溶酶體途徑  溶酶體具有大量的酸性水解酶，可將大分子和非功能細(xì)胞器分解成小顆粒，并將其作為新材料加以利用。正常情況下，溶酶體蛋白酶保存于溶酶體中。然而，溶酶體膜損傷會導(dǎo)致溶酶體膜浸透性（LMP）增強(qiáng)，導(dǎo)致酸性物質(zhì)和蛋白酶釋放，過度的溶酶體膜損傷可導(dǎo)致細(xì)胞死亡。LMP介導(dǎo)的細(xì)胞死亡是依賴于組織蛋白酶而不是caspase[67]。EGCG可通過組織蛋白酶-D胞質(zhì)轉(zhuǎn)位（cathepsin-D cytosolictranslocation）和胞質(zhì)酸化（cytosolicacidulation）等方式觸發(fā)LMP，然后將溶酶體蛋白酶釋放到胞質(zhì)中，誘導(dǎo)人宮頸癌HeLa細(xì)胞死亡[68]。ROS是LMP的主要誘導(dǎo)因子，EGCG的促氧化特性導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)ROS形成，進(jìn)而觸發(fā)LMP和胞質(zhì)酸化，最終促進(jìn)細(xì)胞凋亡[68]。

1.4.4  其他 EGCG也可通過一些細(xì)胞信號傳導(dǎo)通路發(fā)揮其誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡的作用。①p53信號通路：在正常的細(xì)胞周期中，p53蛋白通過阻止細(xì)胞從G1期進(jìn)入S期而使得受損的DNA或染色體得以修復(fù)；而當(dāng)DNA或染色體的損傷過于嚴(yán)重時，p53可觸發(fā)凋亡機(jī)制清除受損細(xì)胞，最終發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。EGCG通過誘導(dǎo)p53的活性并調(diào)節(jié)p53下游靶點(diǎn)如Bax蛋白等，誘導(dǎo)p53介導(dǎo)的細(xì)胞死亡，大多數(shù)研究都將此歸因于p53的絲氨酸殘基的磷酸化[18]。②死亡受體途徑：死亡受體是一組細(xì)胞表面標(biāo)記，屬于腫瘤壞死因子受體超家族（TNFR），其與相應(yīng)的配體結(jié)合后，可將凋亡信號向細(xì)胞內(nèi)部傳遞，導(dǎo)致活化的caspase蛋白酶酶解相應(yīng)底物，最終引起細(xì)胞凋亡，F(xiàn)as是腫瘤壞死因子受體（TNFR）中的一員，F(xiàn)as-Fas配體系統(tǒng)是細(xì)胞凋亡過程中的主要途徑之一[69]。研究表明EGCG通過死亡受體通路和線粒體通路，上調(diào)Fas和Bax表達(dá)，下調(diào)Bcl-2表達(dá)，激活caspase-8、9，誘導(dǎo)淋巴瘤細(xì)胞凋亡[70]。此外，EGCG還可以調(diào)節(jié)絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路[71]、磷脂酰肌醇-3-羥激酶（PI3K）/Akt通路[72]、核因子E2相關(guān)因子2（Nrf2）/抗氧化反應(yīng)元件（ARE）信號通路[73]、Wnt通路[74]和Notch通路[75]等其他信號傳導(dǎo)通路，通過影響基因表達(dá)或蛋白質(zhì)磷酸化等影響細(xì)胞功能，最終誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。

1.5  調(diào)節(jié)microRNA的表達(dá)水平

MicroRNA是一類長度為22～23個核苷酸組成的內(nèi)源性非編碼單鏈RNA分子，可通過與靶基因3’非編碼區(qū)的不完全互補(bǔ)配對，從而調(diào)控基因的表達(dá)，導(dǎo)致mRNA降解或蛋白質(zhì)翻譯受到抑制。目前，已知有超過2 000種microRNA控制著約1/3的人類基因[76]。MicroRNA在生物體內(nèi)保守，參與多種病理、生理過程，研究發(fā)現(xiàn)其與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)[77]。在人類的許多癌癥類型中發(fā)現(xiàn)，一些抑癌或致癌的相關(guān)基因發(fā)生失調(diào)，microRNA可以靶向作用于這些基因[78]。眾多microRNA可對一些癌變進(jìn)程產(chǎn)生影響，如細(xì)胞增殖和分化、細(xì)胞凋亡和轉(zhuǎn)移、細(xì)胞耐藥性的產(chǎn)生等，因此，microRNA成為腫瘤治療的重要靶標(biāo)，藥物調(diào)控microRNA已成為癌癥研究的一個新興熱門領(lǐng)域。MicroRNA可發(fā)揮抑癌或致癌活性，即microRNA可分為抑癌性microRNA和致癌性microRNA。

EGCG可調(diào)節(jié)多種microRNA從而發(fā)揮其抗癌活性。目前的多數(shù)研究是利用EGCG上調(diào)抑癌性microRNA的表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)在非小細(xì)胞肺癌A549/CDDP細(xì)胞中，抑癌性miR-485的表達(dá)顯著降低，而過表達(dá)的miR-485可降低A549/CDDP干細(xì)胞特性，EGCG可上調(diào)miR-485的表達(dá)，從而抑制A549/CDDP干細(xì)胞特性[79]。胰島素樣生長因子-2結(jié)合蛋白（IGF2BPs）是一種致癌的RNA結(jié)合蛋白，研究發(fā)現(xiàn)IGF2BPs在肝癌細(xì)胞中過表達(dá)，最近證實(shí)IGF2BPs是抑癌性miR-1275的直接靶點(diǎn)。EGCG處理肝癌細(xì)胞可顯著上調(diào)miR-1275表達(dá)，從而抑制IGF2BPs mRNA表達(dá)[80]。EGCG通過上調(diào)抑癌性miR-1的表達(dá)抑制骨肉瘤細(xì)胞的生長，還可通過上調(diào)抑癌性miR-126的表達(dá)誘導(dǎo)骨肉瘤細(xì)胞凋亡[81-82]。EGCG處理前列腺癌細(xì)胞后，致癌性miR-21和AR（雄激素受體）信號被抑制，而抑癌性miR-330表達(dá)被上調(diào)，最終抑制前列腺腫瘤生長[83]。EGCG還可下調(diào)致癌性microRNA的表達(dá)從而發(fā)揮抗癌作用，如EGCG可下調(diào)肝癌HepG2細(xì)胞中的致癌性microRNA（miR-30、miR-453）等[84]。EGCG還可下調(diào)非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞中的致癌性miR-98-5p，引起順鉑對這些腫瘤細(xì)胞的敏感性，起到輔助增敏作用[85]。EGCG和維甲酰酚胺聯(lián)合作用于人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞，可下調(diào)一些致癌性micro RNA（miR-92、miR-93、miR-106b）的表達(dá)[86]。

2  改善EGCG生物利用度的策略

EGCG在癌癥的預(yù)防及治療方面均具有巨大的潛力，但其生物利用度低、生理環(huán)境下易分解、體內(nèi)吸收緩慢的特點(diǎn)限制了其在臨床中的作用。EGCG的口服生物利用度受多因素影響，如pH、生物代謝轉(zhuǎn)化、金屬離子、溫度和氧濃度等[84]。因此，急需采取措施來提高EGCG的口服生物利用度、穩(wěn)定性和治療效果。目前采取的策略主要包括：（1）設(shè)計(jì)和開發(fā)有效的遞送系統(tǒng)，如納米顆粒，此方法有助于提高EGCG的生物有效性及利用度；（2）EGCG與其他藥物和治療方法的聯(lián)合使用，相比于單獨(dú)使用藥物，這種聯(lián)合作用產(chǎn)生更有效的治療效果；（3）結(jié)構(gòu)修飾，合成更多基于EGCG的類似物或前體藥物，以找到更有效、穩(wěn)定、特異的活性分子。

2.1  納米粒子

近些年來，納米材料技術(shù)的發(fā)展為充分利用發(fā)揮EGCG 的抗癌活性提供了新的研究方向。經(jīng)納米封裝后，納米級EGCG微粒較普通EGCG具有更大的優(yōu)勢，其不僅可改善其脂溶性、穩(wěn)定性及抗氧化性等，還具備靶向性輸送、緩釋藥物、延長半衰期及降低毒副作用等優(yōu)點(diǎn)。目前研究開發(fā)出的納米級EGCG主要有以金屬為載體的納米粒、以聚合物為載體的納米粒、以脂質(zhì)體為載體的納米粒和其他載體的納米粒。

2.1.1  金屬納米粒子  納米金粒子是研究最多的金屬納米粒子，具有體積小，能穿透組織并聚集在腫瘤部位及具有光學(xué)性質(zhì)，可用于光熱抗癌治療等諸多特點(diǎn)[87]。納米金粒子與EGCG結(jié)合治療癌癥效果明顯。此外，EGCG-納米銀粒子[88]和EGCG-納米鎘粒子[89]也得到了開發(fā)。

2.1.2  聚合物納米粒子  聚合物納米粒是由高聚物組成的實(shí)體結(jié)構(gòu)，特別適合于水溶性差的藥物。聚合物EGCG納米粒應(yīng)用研究也較多。聚合物納米�？赏ㄟ^淋巴細(xì)胞釋放治療藥物以此免受肝代謝，還可在腸道高pH值和酶的環(huán)境中保護(hù)藥物使其產(chǎn)生穩(wěn)定藥效，還具有高滲透性的特點(diǎn)。常見的封裝材料有殼聚糖、聚乳酸（PLA）、聚乙二醇、聚乳酸羥基乙酸共聚物（PLGA）和明膠等。

2.1.3  脂質(zhì)體納米粒子  脂質(zhì)體是磷脂雙分子層分散在水中自然形成的多層囊泡，這種結(jié)構(gòu)特性使得親脂性和親水性藥物得以包封。脂質(zhì)體具有生物可降解性、低毒性、靶向性和緩釋性的特點(diǎn)。研究顯示EGCG脂質(zhì)體的抗癌效果明顯好于EGCG。

2.1.4  其他納米粒子  目前一些其他類型的材料也用于EGCG納米顆粒的設(shè)計(jì)，如碳水化合物和蛋白等。

不同類型的納米級EGCG的抗癌活性見表1。

2.2  與其他物質(zhì)聯(lián)合作用

目前最重要的癌癥治療方法是化療，但是某些化療藥物的副作用極大降低了人們的生活質(zhì)量。因此，急需開發(fā)低副作用的化療藥物，而另一種有效的方法是尋找具有協(xié)同作用的藥物以減少化療藥物的副作用。EGCG具有安全性高、易獲取、多靶點(diǎn)和多通路的優(yōu)點(diǎn)，這種特性使其成為輔助治療癌癥的較佳選擇。EGCG與其他抗癌藥物或癌癥治療方法聯(lián)合使用，可產(chǎn)生協(xié)同增效、減少毒副作用和降低耐藥性等效果。

EGCG可作為一種輔助劑與多種抗癌藥物或治療手段產(chǎn)生協(xié)同增效的作用，如芳香維甲酸類藥物Am80、阿霉素、紫杉醇、多西他賽、無創(chuàng)低強(qiáng)度脈沖電場（PEF）和放療等�；�療常引起胃腸毒性、腎毒性、心臟毒性和肺纖維化等不良反應(yīng)，EGCG聯(lián)合化療可減輕抗癌藥物的副作用，如順鉑、喃氟啶和阿霉素等。耐藥性是癌癥治療的典型的障礙，EGCG在藥物聯(lián)合使用中的另一重要作用是降低癌細(xì)胞對藥物的耐藥性，如三苯氧胺和奧沙利鉑等。然而，EGCG與抗癌藥物結(jié)合使用還可能產(chǎn)生降低抗癌療效的作用（表2），表明在這些藥物治療期間應(yīng)禁用綠茶產(chǎn)品。

EGCG在改善患者臨床癥狀和化療后生活質(zhì)量方面發(fā)揮了不容忽視的作用。EGCG 與其他物質(zhì)或治療手段的協(xié)同作用也是通過干擾腫瘤細(xì)胞的生長、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和作用于信號途徑等重要機(jī)制實(shí)現(xiàn)的，而不同作用方式的協(xié)同作用為癌癥的治療提供了新的思路和理論基礎(chǔ)。

2.3  結(jié)構(gòu)修飾

EGCG分子結(jié)構(gòu)中含有多個活性酚羥基，這些酚羥基在中性或堿性介質(zhì)中易發(fā)生去質(zhì)子化反應(yīng)而迅速分解[115]，這使得其存在脂溶性差、生物利用度低、生理環(huán)境下易分解、體內(nèi)吸收緩慢等缺點(diǎn)，從而嚴(yán)重降低了其生物活性及利用率，這都嚴(yán)重限制了EGCG的應(yīng)用和開發(fā)。隨著研究的不斷深入，研究者發(fā)現(xiàn)經(jīng)過一定的結(jié)構(gòu)修飾所獲得的EGCG衍生物具有更好的穩(wěn)定性，生物利用度也顯著改善，新基團(tuán)的引入賦予新的生理功能，從而擴(kuò)充了EGCG的適用范圍。目前EGCG的分子結(jié)構(gòu)修飾方法主要分為2類：一是脂溶性衍生化修飾，主要包括乙�；�和甲基化；二是水溶性衍生化修飾，主要有糖苷化。

EGCG分子中富含親水性的羥基，因此表現(xiàn)較差的脂溶性，使其較難滲透細(xì)胞膜的雙脂層結(jié)構(gòu)，從而降低了EGCG的生理活性[116]。脂溶性衍生化修飾主要是將親脂性基團(tuán)接至EGCG，改善其脂溶性。乙�；�是利用乙�；�進(jìn)行EGCG的分子修飾，從而改善EGCG的脂溶性、穩(wěn)定性及生物利用度。全乙�；�表沒食子兒茶素沒食子酸酯（乙�；疎GCG，AcEGCG），在HeLa細(xì)胞中的測定發(fā)現(xiàn)AcEGCG的抗癌活性大于EGCG，并且AcEGCG與阿霉素聯(lián)用可以明顯提高阿霉素對癌細(xì)胞的抑制作用[117]。甲基化修飾是將EGCG的酚羥基部分或全部轉(zhuǎn)化成甲基醚而生成一系列衍生物。研究表明EGCG的羥基被更穩(wěn)定的甲氧基取代后，其穩(wěn)定性及脂溶性得到提升，進(jìn)而提高衍生物的生物利用度并改善生物活性[118]。

EGCG分子中含有多個疏水性的苯環(huán)影響其水溶性，目前通用的方法是采用糖苷化修飾將親水性的單糖分子接至EGCG分子上，以此提高EGCG的水溶性及其在人體內(nèi)的代謝活性。EGCG經(jīng)糖苷化修飾后，其水溶性提高了50～100倍，葡萄糖苷元的甜味可減輕EGCG的澀味，其抗氧化能力未受影響并提升了穩(wěn)定性，這為EGCG的口服利用研究提供了理論基礎(chǔ)[119]。此外，前體藥物EGCG（peracetate-protectedEGCG，pro-EGCG）通過醋酸乙酯基團(tuán)對EGCG的活性羥基進(jìn)行修飾，合成了過醋酸乙酯保護(hù)的EGCG[120]。模擬體液環(huán)境發(fā)現(xiàn)在pH值8左右的培養(yǎng)基（RMPI）中，pro-EGCG的穩(wěn)定性是EGCG的6倍[120]。研究顯示，在作用于乳腺癌MDA-MB-231細(xì)胞時，pro-EGCG比EGCG具有更顯著抑制作用[121]。

3  展望

過多化學(xué)品的使用給人類健康生存帶來的負(fù)面影響逐步擴(kuò)大，造成當(dāng)代社會癌癥的發(fā)病率日益上升，各類癌癥已成為人類健康的頭號殺手，傳統(tǒng)治療手段不僅價(jià)格昂貴而且造成不同程度的副作用，影響患者的生活質(zhì)量[122-123]。天然產(chǎn)物EGCG因其副作用小和抗癌活性良好而受到關(guān)注。隨著研究的深入，EGCG的抗癌活性逐漸被發(fā)現(xiàn)，如圖1所示，其可從抗氧化、促氧化、阻滯腫瘤細(xì)胞周期、抑制腫瘤血管生成、誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡及調(diào)控microRNA等方面多途徑、多靶點(diǎn)地發(fā)揮防癌抑癌作用。

目前利用氧化應(yīng)激應(yīng)對癌癥的策略主要包括：在預(yù)防癌癥發(fā)生的階段增強(qiáng)內(nèi)源性抗氧化能力，在癌癥治療的階段提高ROS水平致使癌細(xì)胞死亡，具有抗氧化性及促氧化性的EGCG較好地適配了此策略。高濃度的EGCG治療癌癥是目前存在的一種趨勢，然而由于細(xì)胞類型和細(xì)胞情況的不同，依賴EGCG濃度抗癌的數(shù)據(jù)很難進(jìn)行分類，因此還需在代表不同癌變階段的動物模型中進(jìn)行細(xì)致的劑量反應(yīng)及機(jī)制研究。此外，EGCG從促生存到促凋亡的機(jī)制尚不清楚，有研究指出這可能與快速的細(xì)胞代謝和不受調(diào)控的信號通路有關(guān)，這些通路為EGCG誘導(dǎo)產(chǎn)生ROS提供了一個特殊的微環(huán)境[31]，而這種假設(shè)仍需進(jìn)一步研究論證。EGCG抗癌作用具有多通路和多靶點(diǎn)的特性，在每個通路中都有EGCG可作用的靶點(diǎn)，而EGCG作用于某些通路的具體機(jī)制仍不清楚，未來需要構(gòu)造更加完善的模擬環(huán)境來深入研究其在人體中的系統(tǒng)作用機(jī)制，還應(yīng)探索發(fā)現(xiàn)可被EGCG調(diào)控的新通路，進(jìn)而繪制更完善的EGCG介導(dǎo)的抗癌細(xì)胞信號通路圖譜，為靶向治療提供更多的可能性。此外，EGCG具有細(xì)胞類型和環(huán)境特異性反應(yīng)，因此，未來需要確定更多的對EGCG生理濃度有反應(yīng)的分子靶點(diǎn)或生物標(biāo)記物。

EGCG分子機(jī)制的研究為其實(shí)際抗癌應(yīng)用提供了理論基礎(chǔ)，然而EGCG在應(yīng)用中存在生物利用度低的問題，為解決此問題，相關(guān)研究已取得了一定進(jìn)展，其中一部分歸功于納米粒載體系統(tǒng)的發(fā)展，更重要的是以納米粒為基礎(chǔ)的靶向治療是克服傳統(tǒng)化療藥物特異性差的具有前景的治療策略。通過在納米粒上加入一種特定的配體來進(jìn)行主動靶向治療有望成為最有效的治療方法。就生物學(xué)靶點(diǎn)而言，腫瘤相關(guān)抗原似乎是進(jìn)行治療干預(yù)的較佳靶點(diǎn)。這些生物偶聯(lián)物的臨床應(yīng)用有望很快實(shí)現(xiàn)。盡管這些藥物載體系統(tǒng)為靶向抗癌治療提供了更多的選擇，但理解這些載體的內(nèi)在特征是一個亟需解決的問題，因此，研究人員在未來應(yīng)投入更多的精力來開發(fā)新型的EGCG載體，以探究載體藥物的藥物動力學(xué)和治療效果及其靶向性。此外，納米技術(shù)支持的封裝系統(tǒng)存在局部過量效應(yīng)及相關(guān)的安全問題，因此，應(yīng)深入探究確定納米粒中EGCG的實(shí)際劑量與其實(shí)際的藥理作用之間的關(guān)系�；�療和放療治療癌癥具有時間依賴性及各種副作用，甚至導(dǎo)致患者終止治療，克服這一缺陷的一個策略是開發(fā)更多的可與EGCG聯(lián)合的新組合療法，以減少常規(guī)抗癌藥物或方法的副作用。此外，使用EGCG前藥如pro-EGCG可有助于解決的生物利用度低問題，但還需要進(jìn)一步的研究。分子修飾雖然能夠獲得既定的目標(biāo)產(chǎn)物，但是空間結(jié)構(gòu)的改變與功效的內(nèi)在關(guān)系仍需進(jìn)行深入研究。未來的研究不僅需要充分闡明EGCG的分子機(jī)制，還需要設(shè)計(jì)更多的策略來開發(fā)應(yīng)用EGCG，使其成為更好的癌癥預(yù)防和治療藥物。