杜仲葉提取物對(duì)大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用 | 杜仲葉提取物對(duì)大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用 |
| 發(fā)布時(shí)間:2020-05-15 信息來源:admin 發(fā)布人:admin 點(diǎn)擊次數(shù):1129 |
探討杜仲葉醇提取物(alcohol extractive of folium eucommiae，aefe)對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化(as)大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用。 方法 復(fù)制實(shí)驗(yàn)性大鼠as模型，aefe(70、140 和420 mg·kg-1·d-1，ig)給藥6 w，實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)測定血漿一氧化氮(no)、內(nèi)皮素1(et1)、血栓素b2(txb2)和6酮前列腺素f1α(6kpgf1α)的含量；取主動(dòng)脈和冠狀動(dòng)脈進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察。 結(jié)果 aefe 140和420 mg·kg-1·d-1可明顯升高as模型大鼠血漿中no、et1和6ketopgf1α濃度(p＜0.01)，而對(duì)txb2無影響；明顯減輕as大鼠主動(dòng)脈和冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞的缺失,但兩組間無顯著差異。 結(jié)論 aefe具有維持no/et和txa2/pgi2平衡、保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的作用。
【關(guān)鍵詞】 動(dòng)脈粥樣硬化；杜仲葉；醇提取物；內(nèi)皮細(xì)胞 上禾生物 杜仲具有降低血脂、平衡調(diào)節(jié)血壓等功效〔1〕,近來的研究顯示杜仲葉醇提取物(alcohol extractive of folium eucommiae，aefe)還可作用于內(nèi)皮細(xì)胞促進(jìn)一氧化氮(no)的釋放〔2〕。本實(shí)驗(yàn)首次觀察aefe對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化(as)大鼠血漿no、內(nèi)皮素(et)1、6酮前列腺素f1α(6ketopgf1α)、血栓素b2(txb2)水平和主動(dòng)脈、冠狀動(dòng)脈形態(tài)的影響，探討aefe對(duì)as大鼠內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用。 1 材料與方法 1.1 動(dòng)物 雄性sd大鼠，體重200～250 g，鼠齡80～120 d。由重慶醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供(醫(yī)學(xué)動(dòng)物合格證：scxk渝20020003)。 1.2 藥品與試劑 aefe：根據(jù)文獻(xiàn)〔3〕制備并濃縮至100％(相當(dāng)于1 ml含生藥1 g)備用，用時(shí)以0.5％羧甲基纖維素稀釋；由重慶醫(yī)科大學(xué)化學(xué)教研室提供并鑒定。洛伐他�。褐貞c大新藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)040501。膽固醇：北京鼎國生物技術(shù)有限責(zé)任公司，批號(hào)dh061；豬膽鹽：北京奧博星生物技術(shù)有限公司，批號(hào)20050308；丙硫氧嘧啶：上海復(fù)星朝暉藥業(yè)有限公司，批號(hào)040708；vitd3注射液：上海通用藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)041108。no測定試劑盒：南京建成生物工程研究所；et1、6ketopgf1α和txb2放射免疫試劑盒：解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心放免所；其余試劑均為國產(chǎn)分析純。 1.3 實(shí)驗(yàn)儀器 3k30型高速低溫離心機(jī)：美國sigma公司；722型分光光度計(jì)：上海菁華科技儀器有限公司；sn695b型放射免疫測定儀：上海核輻光電儀器設(shè)備有限公司。 1.4 方法 1.4.1 大鼠as模型的復(fù)制和實(shí)驗(yàn)分組 參考文獻(xiàn)〔4〕方法建立大鼠as模型，于實(shí)驗(yàn)開始時(shí)給予模型組及各給藥組大鼠腹腔注射vitd3注射液(總劑量60 萬u/kg,分3 d給完)，同時(shí)給予高脂飼料(3％膽固醇，0.5％豬膽鹽，0.2％丙硫氧嘧啶，5％白糖，10％豬油，81.3％基礎(chǔ)飼料)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為6組，每組8只：正常對(duì)照組，普通基礎(chǔ)全價(jià)飼料；as模型組：高脂飼料；aefe高中低劑量組，高脂飼料＋aefe (420，140，70 mg·kg-1·d-1)；洛伐他汀組：高脂飼料＋洛伐他汀(4 mg·kg-1·d-1)。各給藥組在造模2 w后開始灌胃給藥(0.5 ml/100 g濕重)，共給藥6 w。實(shí)驗(yàn)周期為8 w。
1.4.2 血漿no、et1、6ketopgf1α和txb2含量測定 1.4.3 主動(dòng)脈和冠狀動(dòng)脈形態(tài)學(xué)觀察 取主動(dòng)脈和心臟用10％甲醛固定，石蠟包埋切片，he染色光鏡觀察。
1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 2 結(jié) 果 2.1 aefe對(duì)血漿no和et1含量的影響 as模型組血漿no和et1濃度與正常對(duì)照組相比均明顯降低(p＜0.01)；與as模型組相比，aefe低劑量組兩指標(biāo)改變無明顯差異，aefe中、高劑量組和洛伐他汀組no和et1濃度明顯升高(p＜0.01)。aefe中、高劑量組no水平高于洛伐他汀組，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表1)。 2.2 aefe對(duì)血漿6ketopgf1α和txb2含量的影響 as模型組與正常對(duì)照組相比血漿6ketopgf1α濃度明顯降低而txb2濃度顯著升高(p＜0.01)；與as模型組相比，aefe低劑量組兩指標(biāo)改變無明顯差異，aefe中、高劑量組和洛伐他汀組6ketopgf1α濃度明顯升高(p＜0.01)，洛伐他汀組達(dá)到正常水平，但各組txb2濃度無差異(表1)。表1 各組大鼠血漿no、et1、6ketopgf1α和txb2濃度的變化(略) 2.3 aefe對(duì)主動(dòng)脈和冠狀動(dòng)脈形態(tài)的影響 正常對(duì)照組大鼠主動(dòng)脈和冠狀動(dòng)脈結(jié)構(gòu)完整，層次清晰，內(nèi)膜內(nèi)皮細(xì)胞連續(xù)完整。as模型組主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞呈連續(xù)性缺失，底層膠原纖維暴露，內(nèi)皮下間隙增寬，內(nèi)彈力板分離斷裂；aefe低劑量組病理改變基本同as模型組；aefe中、高劑量組和洛伐他汀組動(dòng)脈結(jié)構(gòu)完整，層次清晰,內(nèi)膜較光滑，偶見局部少量內(nèi)皮細(xì)胞缺失。as模型組冠狀動(dòng)脈可見連續(xù)性內(nèi)皮細(xì)胞缺失、數(shù)目不一的泡沫細(xì)胞和鈣質(zhì)沉著；aefe低劑量組冠脈改變基本同as模型組，而中、高劑量組和洛伐他汀組內(nèi)皮基本完整，其下偶見泡沫細(xì)胞，管壁可見輕度增厚和少量鈣質(zhì)沉著，其病變程度明顯好于as模型組,但三組間無顯著差異(圖1和圖2)。 3 討 論 血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷被認(rèn)為是as最重要的始動(dòng)環(huán)節(jié)，繼發(fā)于它的內(nèi)皮通透性、黏附性、血液凝固性改變及所釋放的大量細(xì)胞因子及生長因子將導(dǎo)致as發(fā)生的一系列連鎖反應(yīng)〔5〕。血管內(nèi)皮的正常功能是通過內(nèi)皮分泌血管活性物質(zhì)(如no，et1及pgi2等)來實(shí)現(xiàn)的，因此內(nèi)皮損傷后首先表現(xiàn)為血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌功能的失調(diào)。有研究表明高血脂癥可引起et1含量升高、no水平下降〔6，7〕；然而部分學(xué)者認(rèn)為高血脂癥對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞有毒性作用，損壞細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能，引起et1、no水平均降低〔8，9〕。孫金明等〔10〕研究高血脂癥對(duì)內(nèi)皮血管活性物質(zhì)合成和釋放的動(dòng)態(tài)影響，結(jié)果顯示高血脂癥對(duì)etl基因表達(dá)及etl含量的影響呈波動(dòng)性變化，高血脂癥初中期et1基因的表達(dá)升高，隨后呈下降趨勢。pgi2和txa2維持平衡對(duì)預(yù)防as的發(fā)生，防止血栓形成有著重要的調(diào)節(jié)作用。由于兩者的不穩(wěn)定性，故目前均以測定6ketopgf1α和txb2作為判斷其濃度的指標(biāo)。在as發(fā)病過程中，oxldl增加，細(xì)胞過氧化脂質(zhì)的升高，可以抑制血管壁pgi2合酶的活性，使pgi2合成減少，而血小板txa2生成增加。 在本實(shí)驗(yàn)中，高膽固醇飲食造模8 w后，as模型組大鼠血漿no、et1和6ketopgf1α含量較正常組明顯降低，txb2濃度明顯升高，同時(shí)血管內(nèi)皮細(xì)胞有連續(xù)性缺失，血管結(jié)構(gòu)紊亂，說明模型組血管內(nèi)皮功能和結(jié)構(gòu)受到明顯的損傷,動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生；aefe中、高劑量和洛伐他汀能明顯增加血漿no、et1和6ketopgf1α水平，使主動(dòng)脈和冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷減輕、血管結(jié)構(gòu)基本正常，但對(duì)txb2無影響，提示aefe具有維持no/et和txa2/pgi2平衡、保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能，防治as的作用。此時(shí)的no、et1和pgi2水平升高是內(nèi)皮功能修復(fù)的一種表現(xiàn)，對(duì)txa2無影響提示aefe的作用靶點(diǎn)不在血小板。aefe升高no的作用較洛伐他汀明顯，而對(duì)pgi2水平的影響不及洛伐他汀，說明兩藥對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞功能的修復(fù)影響環(huán)節(jié)不相同。aefe中、高劑量兩組療效無明顯差異可能是aefe 140 mg·kg-1·d-1已接近最大效應(yīng)，故增加劑量藥物效應(yīng)無顯著增加。
杜仲提取物 綠原酸 5-98% 上禾生物 073184213302
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