液相色譜法測定小春花口服液木犀草素含量 | 液相色譜法測定小春花口服液木犀草素含量 |
| 發(fā)布時間:2020-05-31 信息來源:admin 發(fā)布人:admin 點(diǎn)擊次數(shù):2090 |
| 小春花為陰地蕨科植物陰地蕨sceptridium ternatum(thunb.)lyon的帶根全草,為福建民間習(xí)用草藥,性味甘平,味淡,具有平肝、清熱、鎮(zhèn)咳和清火、明目、解毒祛風(fēng)的功效。小春花口服液(小伏口服液)是依據(jù)民間經(jīng)驗(yàn)由小春花等藥物組成的復(fù)方制劑,具有清肝解熱、散風(fēng)解毒的功效,實(shí)驗(yàn)表明該制劑有抗炎、免疫調(diào)節(jié)等作用,臨床用于治療呼吸系統(tǒng)疾病。筆者對小春花口服液主要有效成分木犀草素進(jìn)行定性及含量測定,建立該制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。 1材料與方法 1.1材料 1.1.1儀器高效液相色譜色譜儀(focus型,美國光譜物理公司),紫外可見分光光度計(jì)(tu1221型,北京普析通用儀器有限公司),離心機(jī)(abbott,美國雅培儀器公司),電子天平[(ae240型,mettler儀器(上海)有限公司],電熱恒溫干燥箱(gzxdh4045s,上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠),三用紫外分析儀(zfi型,上海顧村電光儀器廠),硅膠板(100 mm×200 mm,青島海洋化工廠分廠)。 1.1.2試藥小春花及小春花口服液由福建省立醫(yī)院藥劑科提供。水為重蒸餾水;乙酸乙酯、苯、甲酸、磷酸、甲醇、石油醚、無水乙醇均為分析純。對照品為木犀草素標(biāo)準(zhǔn)品(中國藥品生物制品檢定所,批號111520200201)。 1.2方法 1.2.1樣品制備(1)稱取干燥粉碎小春花5 g于索氏提取器中,加石油醚(60~90 ℃)100 ml,回流提取至石油醚無色,取出晾干。加無水乙醇100 ml,回流提取7 h,提取液加無水乙醇定容至50 ml作為供試品。(2)取木犀草素標(biāo)準(zhǔn)品適量,精密稱定,加乙醇溶解,配成1 mg/ml木犀草素對照品。 1.2.2有效成分薄層色譜鑒別硅膠g0.5%cmcna板10 cm×20 cm,105 ℃活化1 h,展開劑:苯乙酸乙酯甲酸(8∶2∶0.5)。將供試品與對照品點(diǎn)于同一薄層板上,展開,晾干,三用紫外分析儀下(254 nm)觀察供試品與對照品。對應(yīng)位置均呈較明顯的暗斑,表明供試品中含木犀草素(圖1)。 1.2.3木犀草素含量測定(反相高效液相色譜法) 1.2.3.1色譜條件色譜柱為ywg c18ods柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流動相由0.4%磷酸緩沖液(ph 3)甲醇(50∶50)組成,流速1 ml/min,柱溫25 ℃,進(jìn)樣量10 μl,紫外檢測波長355 nm 。木犀草素峰保留時間約15 min。精密稱取木犀草素標(biāo)準(zhǔn)品適量,配制成濃度為35 μg/ml甲醇溶液,分別取1.0,1.5,2.0,2.5,3.0 ml,用甲醇定容至25 ml,進(jìn)樣(10 μl)得色譜圖,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(圖2)。 1.2.3.2色譜和光譜鑒別取供試品2 ml,10 000 r/min離心10 min,上清液用微孔濾膜(0.45 μm)濾過,取續(xù)濾液10 μl進(jìn)樣,供試品色譜圖保留時間約15 min處可見木犀草素峰,并與供試品中其他成分色譜峰較好分離。分別取5批次本院生產(chǎn)的小春花口服液2 ml,10 000 r/min離心20 min;上清液用微孔濾膜(0.45 μm)加壓濾過,續(xù)濾液10 μl進(jìn)樣,依上述色譜條件作色譜圖(圖3)。 2結(jié)果 2.1木犀草素標(biāo)準(zhǔn)曲線以木犀草素濃度(x)作為橫坐標(biāo),其色譜峰面積(y)作為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。結(jié)果回歸方程為:y＝35 771.18x2 214.22,r=0.999 3。木犀草素在14.32~43.42 μg/ml范圍內(nèi)符合比耳定律,線性關(guān)系良好。 2.2測定方法的精密度與回收率日間分別配制5批次濃度為14.32 μg/ml和35.80 μg/ml木犀草素樣品,依上法測定,日間變異為2.68%和2.09%,樣品回收率為99.83%和98.66%(表1)。 2.3小春花口服液木犀草素含量測定5批次本院生產(chǎn)的小春花口服液含木犀草素的濃度分別為16.38,17.39,17.43,17.05和16.13 μg/ml,平均為(16.88±0.53)μg/ml。表1木犀草素樣品的日間變異和回收率 2.4木犀草素標(biāo)準(zhǔn)品及小春花口服液樣品分別放置1,3,5,7 d后測定峰面積值,基本無變化,說明標(biāo)準(zhǔn)品及樣品相當(dāng)穩(wěn)定。 3討論 3.1小春花的主要化學(xué)分為黃酮類、陰地蕨素、槲皮素等。葉的浸出成分水解后含木犀草素[1]。小春花口服液(小伏口服液)是由小春花等藥物以60%乙醇水加熱提取數(shù)小時后濃縮去乙醇而進(jìn)一步配制成的復(fù)方制劑。小春花口服液保留約15 min處色譜峰的紫外光譜,與木犀草素對照品在同一保留時間處色譜峰的紫外光譜均在200~400 nm,并與文獻(xiàn)[5]的光譜峰位置一致。通過對小春花口服液進(jìn)行薄層層析及高效液相色譜和光譜特征分析,筆者證實(shí)小春花口服液含木犀草素,后者含量可作為該制劑提取制備工藝的客觀指標(biāo)。 3.2小春花口服液中木犀草素在上述色譜分離條件下,與其他成分色譜峰基本分離。以木犀草素計(jì)理論塔板數(shù)不低于6 000，口服液中其他成分在上述色譜分離條件下不干擾測定結(jié)果。運(yùn)用高效液相色譜法測定小春花口服液中木犀草素含量,分離度好,快速準(zhǔn)確,為全面客觀地建立小春花口服液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了依據(jù)。
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