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芹菜素是一種天然黃酮類物質(zhì)，廣泛存在于蔬菜、水果中。

研究表明，芹菜素具有多種生物學(xué)功能，如抗氧化性、抗炎、抗腫瘤、中樞鎮(zhèn)靜等〔1-3〕。本文旨在建立蔬菜中芹菜素高效液相色譜測定法，并測定哈爾濱市售41種蔬菜中芹菜素含量。現(xiàn)將結(jié)果報(bào)告如下。

1  對(duì)象與方法

1��1  儀器與試劑  waters 高效液相色譜分析儀（waterstm2690分離系統(tǒng)，waters996二極管陣列檢測器，waters色譜工作站，millennium32軟件），旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器re-52a(上海精科實(shí)業(yè)有限公司)，esj180-4型分析天平（沈陽龍騰電子秤量儀器有限公司）；無水乙醇、甲醇、冰醋酸、濃鹽酸等（均為ar級(jí)）；色譜純甲醇；芹菜素標(biāo)準(zhǔn)品（美國sigma公司）；市售41種蔬菜。

1��2  色譜條件  色譜柱為phenomenex c18柱（250 mm×4��60 mm,4u），流動(dòng)相為甲醇：水＝60：40（體積比），三氟乙酸調(diào)節(jié)至ph 2��5，流速1 ml/min，進(jìn)樣量12 μl（自動(dòng)進(jìn)樣），檢測波長338 nm,柱溫為20℃。

1��3  方法  （1）對(duì)照品溶液的制備：精密稱取芹菜素標(biāo)準(zhǔn)品1 mg，置50 ml容量瓶中，加入甲醇約20 ml，微熱溶解，冷卻至室溫，加入少量冰醋酸〔4〕，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，獲得濃度為20 mg/l的對(duì)照品儲(chǔ)備溶液。（2）供試品溶液的制備：將市售蔬菜去枯葉洗凈，于烤箱中40℃烤干，備用。精確稱取蔬菜干品4��00 g，加入80％乙醇/水100 ml（其中每100 ml溶液中含10 ml濃鹽酸），同時(shí)加入0��20 g特丁基對(duì)苯二酚（tbhq），90℃下回流3 h，冷卻至室溫，用布氏漏斗（bücher）過濾，精確回收濾液備用。供試品溶液上柱前離心機(jī)3 000 r/min離心20 min。

2  結(jié)果

2��1  線性關(guān)系校準(zhǔn)曲線  取對(duì)照品儲(chǔ)備溶液，用甲醇稀釋，制成濃度（mg/l）分別為10，8，6，4，2，1的對(duì)照品溶液，依次進(jìn)樣測定，以濃度c（mg/l）為自變量，峰面積響應(yīng)a(μv×s)為應(yīng)變量，線性擬合，得線性方程a=76035��567c+7169��570 (r=0��999)，表明芹菜素標(biāo)準(zhǔn)品在12～120 μg范圍內(nèi)與色譜峰面積響應(yīng)有良好的線性關(guān)系，最低檢出限為0��10 mg/l。

2��2  正交設(shè)計(jì)優(yōu)化樣品提取條件(表1)  本實(shí)驗(yàn)以溶劑、溶劑濃度、提取時(shí)間為考察因素，每個(gè)因素設(shè)3個(gè)水平，采用l9（34）正交設(shè)計(jì)，以芹菜素的提取量為觀察指標(biāo)，優(yōu)化蔬菜中芹菜素的提取條件，得出最佳提取條件為80%乙醇/水提取3 h（內(nèi)含1��2 mol/l鹽酸〔5〕，2 g/l的tbhq）。

2��3  重復(fù)性實(shí)驗(yàn)  平行取5份樣品（芹菜葉）2��00 g,按優(yōu)化條件處理，進(jìn)行測定。計(jì)算得5份樣品中芹菜素的含量（mg/kg）分別為：4 860��14，5 551��19，5 657��40，5 229��27，5 577��29，平均值為5 375��06 mg/kg，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(rsd)為6��16%<10%（n=5）。說明本實(shí)驗(yàn)所確定的蔬菜中芹菜素的提取條件重復(fù)性很好。

表1  l9（34）正交實(shí)驗(yàn)因素水平設(shè)計(jì)（略）

2��4  精密度實(shí)驗(yàn)  選擇10，6，2 mg/l的芹菜素標(biāo)準(zhǔn)品溶液，連續(xù)6次進(jìn)樣，rsd分別1��187%，3��983%，0��149%，均<10％，表明儀器的精密度很好。

2��5  穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)  選擇10，6，2 mg/l的芹菜素標(biāo)準(zhǔn)品溶液連續(xù)5 d同一時(shí)間測定，rsd分別為1��77%，5��59%，4��31%，均<10%，表明芹菜素標(biāo)準(zhǔn)品溶液在5 d內(nèi)穩(wěn)定。

2��6  加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)  精確稱取8個(gè)平行樣品（芹菜莖2��00g）,4個(gè)樣品中加入標(biāo)準(zhǔn)品0��10 mg,按照優(yōu)化條件同時(shí)平行處理，平均回收率為99��80%。

2��7  不同蔬菜干品中芹菜素的含量(表2)

表2  哈爾濱市9～10月份蔬菜干品中芹菜素含量（略）

3  討論

目前對(duì)總黃酮類物質(zhì)的檢測多用鋁顯色法。本文建立的方法穩(wěn)定，最低檢出限為0��10 mg/l，明顯優(yōu)于文獻(xiàn)中報(bào)道的最低檢出限為0��4 mg/l〔6〕。樣品有效成分的提取易受到提取溶劑、提取時(shí)間、提取溫度的影響，本實(shí)驗(yàn)對(duì)此采用正交設(shè)計(jì)摸索條件，得到了本實(shí)驗(yàn)中的最佳提取條件。在本文確定的色譜條件下，芹菜素獲得很好分離，且準(zhǔn)確度和精密度均較高。芹菜素的抗氧化性明顯優(yōu)于維生素c和維生素e，在外界易受到溫度的影響，因此，在本實(shí)驗(yàn)樣品前處理中，分別采用了30℃，40℃，50℃，70℃下干燥箱烘干。結(jié)果顯示，樣品在40℃以下芹菜素的含量無明顯變化，50℃以上芹菜素有降解，與文獻(xiàn)報(bào)道相符〔5〕。在本實(shí)驗(yàn)中測得多種蔬菜中的芹菜素的含量，在當(dāng)?shù)厍鄄巳~莖、小白菜等10種蔬菜中含量均>100 mg/kg，而在蒜苔、蒜黃等11種蔬菜中未測出，其他蔬菜中芹菜素的含量均低于100 mg/kg。而文獻(xiàn)中報(bào)道〔5〕，中國大白菜中芹菜素含量為187��0 mg/kg，大辣椒為272��0 mg/kg,大蒜為217 mg/kg,與本實(shí)驗(yàn)測得結(jié)果中國大白菜為162��86 mg/kg，大辣椒為63��70 mg/kg，大蒜為160��27 mg/kg有一定的差異。說明不同地域、環(huán)境可能對(duì)蔬菜中芹菜素含量有影響。

芹菜素 0.3-98%  上禾生物   0731*84213302

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