液相色譜法測定抱莖苦荬菜中木樨草素及芹菜素的含量 | 液相色譜法測定抱莖苦荬菜中木樨草素及芹菜素的含量 |
| 發(fā)布時(shí)間:2020-05-31 信息來源:admin 發(fā)布人:admin 點(diǎn)擊次數(shù):756 |
| 建立了同時(shí)測定抱莖苦荬菜中木樨草素和芹菜素含量的高效液相色譜（hplc）方法。方法nucleosil c18（4.6 mm×250 mm, 5 μm）色譜柱，以甲醇-水（56∶44）為流動(dòng)相；流速為1.0 ml·min-1；檢測波長為349 nm；柱溫為25 ℃。結(jié)果木樨草素在0.034 4～0.172 mg/ml范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系，r2=0.999 3，平均回收率為98.23％，rsd為1.17％；芹菜素在0.01～0.16 mg/ml范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系，r2=0.999 3，平均回收率為97.16％，rsd為1.36％。結(jié)論此法簡便快速，結(jié)果準(zhǔn)確可靠、重復(fù)性好，可用于藥材中木樨草素與芹菜素含量的同時(shí)測定。 【關(guān)鍵詞】 高效液相色譜法 抱莖苦荬菜 木樨草素 芹菜素
木樨草素 芹菜素 98% 上禾生物 0731*84213302 抱莖苦荬菜ixeris sonchifolia(bge．)hance為菊科(compositae)苦荬菜屬(ixeris)植物，別名為苦碟子、滿天星等，盛產(chǎn)于我國東北、華北等地。據(jù)《內(nèi)蒙古中草藥》記載，抱莖苦荬菜味苦、辛，具清熱解毒、排毒、止痛之功效［1］。民間主要用于治療闌尾炎、扁桃體炎、無名腫痛等癥［2］。在以往的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中只有測定腺苷的含量，其中重要的有效成分黃酮類卻沒有準(zhǔn)確可靠的含量測定方法［2］。抱莖苦荬菜中富含黃酮類化合物，木樨草素和芹菜素即為其中的代表性成分。據(jù)報(bào)道［3］，木樨草素是一種很具有代表性的天然黃酮，在植物界分布較廣。其具有很強(qiáng)的抗氧化［4］、抗菌、抗病毒及降血壓、降血脂作用［5］。芹菜素可抑制多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，此外，還具有抗炎癥、降血壓、抗動(dòng)脈硬化和血栓癥、抗焦慮、抗菌、抗病毒以及抗氧化等多方面的生物學(xué)活性，而且其致畸變毒性與其他黃酮類化合物相比相對(duì)較低［6］。 木樨草素和芹菜素均為抱莖苦荬菜中的主要成分，含量較高，但目前的研究只有針對(duì)其中某一種成分的含量測定方法。彭纓等［2］采用 rp-hplc 法對(duì)抱莖苦荬菜藥材中木樨草素-7-o-β-d-葡萄糖苷的含量進(jìn)行了測定；程春萍等［7］采用反相高效液相法對(duì)中華苦荬菜中的木樨草素進(jìn)行了含量測定。本文建立了hplc法同時(shí)測定抱莖苦荬菜中木樨草素及芹菜素的含量的條件，以甲醇∶水（56∶44）為流動(dòng)相，其中不加酸，選用的檢測波長為349 nm。并用此條件測定了不同采收期抱莖苦荬菜中木樨草素及芹菜素的含量�，F(xiàn)報(bào)道如下。 1 儀器與藥品 島津lc-2010高效液相色譜儀；spd-10avp紫外檢測器；lc-solution色譜工作站；紫外可見分光光度計(jì)（島津2450）；kq-250db型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。 木樨草素對(duì)照品購買于中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)111520-200201；芹菜素對(duì)照品于實(shí)驗(yàn)室提供（純度為98%以上）。甲醇為色譜純（美國fisher公司），水為純水（經(jīng)upws超純水器純化，杭州永潔達(dá)凈化科技有限公司）。 抱莖苦荬菜由通化華夏藥業(yè)提供，經(jīng)吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)胡全德教授鑒定確認(rèn)為正品。 2 方法與結(jié)果 2.1 色譜條件的選擇 色譜柱為nucleosil c18（4.6 mm×250 mm, 5 μm）；流動(dòng)相為甲醇-水（56∶44）；流速1.0 ml·min-1；檢測波長349 nm；柱溫25℃；進(jìn)樣量20 μl。 2.2 對(duì)照品溶液的制備 2.2.1 木樨草素對(duì)照品溶液的制備精密稱取木樨草素標(biāo)準(zhǔn)品8.6 ㎎，置于10 ml的容量瓶中，加甲醇使溶解，并稀釋至刻度，制成0.86 ㎎/ml木樨草素對(duì)照品溶液。 2.2.2 芹菜素對(duì)照品溶液的制備 精密稱取芹菜素標(biāo)準(zhǔn)品2.0 mg，置于2ml的容量瓶中，加甲醇使溶解，并稀釋至刻度，制成1.00 mg/ml芹菜素對(duì)照品溶液。 2.3 供試品溶液的制備 精密稱取樣品粉末2.00 g，置具塞三角瓶中，加90%乙醇50.0 ml，超聲提取30 min/次，共提取3次，過濾，濃縮，用甲醇定容于10 ml的容量瓶中，備用。 2.4 線性關(guān)系考察 2.4.1 木樨草素線性關(guān)系精密吸取“2.2.1”項(xiàng)制備的木樨草素對(duì)照品溶液0.20，0.40，0.60，0.80，1.00 ml于5 ml的容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，各進(jìn)樣20 μl，按“2.1”項(xiàng)色譜條件測定峰面積。以木樨草素進(jìn)樣量x為橫坐標(biāo)，峰面積y為縱坐標(biāo)制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得回歸方程為y=3.00×107x-52 458, r2=0.999 3。結(jié)果表明木樨草素在0.034 4～0.172 mg/ml范圍內(nèi)與峰面積具有良好的線性關(guān)系。 2.4.2 芹菜素線性關(guān)系精密吸取“2.2.2”項(xiàng)制備的芹菜素對(duì)照品溶液50 ，100 ，200，400，800 μl于5 ml的容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，各進(jìn)樣20 μl，按“2.1”項(xiàng)色譜條件測定峰面積。以芹菜素進(jìn)樣量x為橫坐標(biāo)，峰面積y為縱坐標(biāo)制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得回歸方程為y=2.01×107x-32 617, r2=0.999 3。結(jié)果表明芹菜素在0.01～0.16 mg/ml范圍內(nèi)與峰面積具有良好的線性關(guān)系。 2.5 精密度實(shí)驗(yàn)在相同的“2.1”項(xiàng)色譜條件下，取同一采收期同一部位的抱莖苦荬菜藥材粉末(30目)2 g，按“2.3”項(xiàng)操作，制備樣品溶液。分別精密吸取20 μl，連續(xù)進(jìn)樣5次，測定色譜峰面積。結(jié)果表明測定方法具有良好的重復(fù)性，木樨草素 rsd=2.87%（n=5）；芹菜素 rsd=0.57%（n=5）。 2.6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)將供試品溶液在0，2，4，6，8，12，24 h連續(xù)取樣7次，木樨草素重復(fù)性 rsd=0.13%（n=6）；芹菜素重復(fù)性 rsd=3.51%（n=6）。結(jié)果表明，測定方法具有良好的重復(fù)性。 2.7 加樣回收率實(shí)驗(yàn)精密稱取2.5 g已知含量（含木樨草素為0.022 65 ％，芹菜素為0.003 482 ％）的抱莖苦荬菜樣品，6份，分別精密加入一定量的木樨草素對(duì)照品溶液（含0.56 mg）和芹菜素對(duì)照品溶液（含0.08 mg）。按“2.3”項(xiàng)制備供試品溶液，進(jìn)行加樣回收率考察測定。木樨草素加樣平均回收率為98.23%, rsd=1.17%（n=6）；芹菜素加樣平均回收率為97.16%, rsd=1.36%（n=6）。 2.8 樣品的測定采用上述hplc法測定了不同采收期抱莖苦荬菜全草中木樨草素及芹菜素的含量。結(jié)果見表1。 表1 不同采收期抱莖苦荬菜全草中木樨草素及芹菜素的含量 3 討論 3.1 檢測波長的選擇本實(shí)驗(yàn)采用紫外分光光度計(jì)（島津2450）在200～400 nm波長范圍內(nèi)測定了木樨草素、芹菜素甲醇溶液的紫外吸收光譜，結(jié)果顯示，兩者在260 nm和349 nm均有最大吸收。因349 nm處吸收較強(qiáng)，本實(shí)驗(yàn)采用349 nm作為檢測波長。 3.2 色譜條件的選擇木樨草素和芹菜素均屬于黃酮類化合物，因此應(yīng)加入酸類物質(zhì)，可以有效改善拖尾的現(xiàn)象。但考慮到酸類物質(zhì)對(duì)色譜柱的影響，且流動(dòng)相的配置較為繁瑣，本文在分析過程中，未加入酸類物質(zhì)，經(jīng)過條件篩選，分離效果也很好，兩者與其他物質(zhì)都達(dá)到了相互的基本分離，峰形雖然稍微有點(diǎn)拖尾，但不影響分析，測定結(jié)果穩(wěn)定。見圖1～3。 本實(shí)驗(yàn)采用hplc法對(duì)不同采收期的抱莖苦荬菜中木樨草素及芹菜素的含量同時(shí)進(jìn)行了測定，從結(jié)果可以看出，抱莖苦荬菜全草中的兩種黃酮含量均在6月14日達(dá)到最高點(diǎn)。此結(jié)果的出現(xiàn)應(yīng)該與不同生育期抱莖苦荬菜體內(nèi)的生理活動(dòng)狀態(tài)有關(guān)。 本實(shí)驗(yàn)的方法與以往只是針對(duì)抱莖苦荬菜中的單一成分進(jìn)行考察的測定方法相比，更具有科學(xué)性。同時(shí)檢測兩個(gè)主要黃酮成分含量更科學(xué)地衡量抱莖苦荬菜的質(zhì)量，方法簡便、快速、準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可以為抱莖苦荬菜的質(zhì)量控制和合理采收提供科學(xué)依據(jù)，也適用于其他藥材中此兩種黃酮成分含量的同時(shí)測定。
木樨草素 芹菜素 98% 上禾生物 0731*84213302
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