厚樸抗氧化活性成分的提取分離及其抗氧化活性測(cè)試研究 | 厚樸抗氧化活性成分的提取分離及其抗氧化活性測(cè)試研究 |
| 發(fā)布時(shí)間:2020-06-27 信息來(lái)源:admin 發(fā)布人:admin 點(diǎn)擊次數(shù):748 |
| 厚樸藥材是木蘭科植物厚樸或凹葉厚樸的干燥干皮、根皮及枝皮,屬重慶道地藥材。厚樸中主要含有揮發(fā)油、木脂素類(lèi)、生物堿類(lèi)、多糖類(lèi)等化學(xué)成分,具有抗菌、抗炎等藥理作用,具有一定的研究?jī)r(jià)值。目前,對(duì)厚樸的研究主要集中在木脂素類(lèi)成分厚樸酚、和厚樸酚的提取工藝及抗菌等藥理作用,對(duì)厚樸中其他活性成分及生物活性研究甚少。 因此,本論文主要針對(duì)厚樸藥材中的活性成分木脂素類(lèi)、生物堿類(lèi)、多糖類(lèi)成分進(jìn)行提取分離,并對(duì)分離制備的厚樸提取物、厚樸活性成分及其有效成分的抗氧化活性進(jìn)行評(píng)價(jià),為厚樸藥材的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù);利用耗樣量低、集成化的微流控技術(shù),結(jié)合化學(xué)發(fā)光抗氧化體系反應(yīng)過(guò)程及原理,搭建微流控化學(xué)發(fā)光檢測(cè)系統(tǒng),用以藥物的抗氧化性評(píng)價(jià),實(shí)現(xiàn)天然產(chǎn)物抗氧化成分的快速篩選。 本文的主要研究工作及結(jié)果包括: 1.以厚樸藥材具有抗氧化活性的成分及化合物為目標(biāo),采用不同溶劑體系提取制備得到厚樸水提物、60％乙醇提取物、80％乙醇提取物,采用HPLC法及Folin-Ciocalteu法測(cè)定其厚樸酚、和厚樸酚含量及總酚含量,初步了解提取物中物質(zhì)組成情況及其抗氧化活性,其中,80％乙醇提取物中厚樸酚、和厚樸酚含量最高,分別為209.4 mg/g、159.8 mg/g,總酚含量為228.3mg GAE/g。進(jìn)而,從提取物中分離得到厚樸中木脂素、生物堿、多糖三類(lèi)活性成分作為后續(xù)抗氧化活性測(cè)試樣本。采用水提醇沉法制備厚樸粗多糖,苯酚-硫酸法測(cè)定其含量為50.8％;采用有機(jī)溶劑提取法制備厚樸總生物堿,酸性染料比色法檢測(cè)其含量為63.8％;采用大孔樹(shù)脂吸附技術(shù)分離制備厚樸木脂素,顯色法測(cè)定其含量為87.2％。采用紫外分光光度法,實(shí)現(xiàn)對(duì)厚樸藥材中厚樸酚、和厚樸酚的含量進(jìn)行同時(shí)測(cè)定,檢測(cè)結(jié)果略低于HPLC法測(cè)定結(jié)果,可用于厚樸藥材有效成分的初步判斷。以80％乙醇為溶劑對(duì)厚樸進(jìn)行提取后,采用有機(jī)相萃取,并利用硅膠柱層析、薄層色譜法、重結(jié)晶等技術(shù)對(duì)乙酸乙酯萃取部分進(jìn)一步分離純化,制備得到厚樸中的有效成分厚樸酚、和厚樸酚,并采用紫外、高效液相、核磁共振等技術(shù)對(duì)其純度、結(jié)構(gòu)做鑒定,純度分別達(dá)到97.14％、92.93％。將制備所得的厚樸的水提取、60％乙醇提取物、80％乙醇提取物三種提取物,厚樸中粗多糖、總生物堿及木脂素三種活性成分,以及厚樸中的有效成分厚樸酚、和厚樸酚兩種單體化合物作為后續(xù)抗氧化活性測(cè)定的樣本,為厚樸抗氧化活性成分的確定奠定物質(zhì)基礎(chǔ)。 2.采用鄰苯三酚-魯米諾體系、過(guò)氧化氫-魯米諾體系、Fe2+-過(guò)氧化氫-魯米諾體系三種化學(xué)發(fā)光體系對(duì)制備的厚樸水提物、60％乙醇提取物、80％乙醇提取物、厚樸粗多糖、厚樸總生物堿、厚樸木脂素、厚樸酚、和厚樸酚七種樣本對(duì)超氧陰離子(O2-?)自由基、過(guò)氧化氫(H2O2)、羥自由基(?OH)的清除能力進(jìn)行測(cè)定,并以抗壞血酸作為陽(yáng)性對(duì)照物,計(jì)算得到不同樣本對(duì)不同自由基的半數(shù)抑制濃度IC50值,用以評(píng)價(jià)各成分抗氧化活性。結(jié)果表明:厚樸各成分均對(duì)三種自由基有一定的清除作用,其中,對(duì)過(guò)氧化氫(H2O2)自由基的清除能力最強(qiáng),且強(qiáng)于陽(yáng)性對(duì)照物。另外,厚樸水提物、60％乙醇提取物、80％乙醇提取物抗氧化活性大小依次為:80％乙醇提取物>60％乙醇提取物>水提物;厚樸粗多糖、總生物堿、木脂素抗氧化活性依次為:總生物堿>木脂素>粗多糖;就厚樸中兩種有效成分而言,和厚樸酚對(duì)三種自由基的清除能力遠(yuǎn)遠(yuǎn)強(qiáng)于厚樸酚,也強(qiáng)于陽(yáng)性對(duì)照物。結(jié)果表明,厚樸中成分大多具有良好的抗氧化活性,具有一定的研究及利用價(jià)值。 3.根據(jù)化學(xué)發(fā)光反應(yīng)原理及反應(yīng)過(guò)程,設(shè)計(jì)并制作了集成八個(gè)檢測(cè)通道于一體的微流控化學(xué)發(fā)光芯片,該芯片具有結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、耗樣量小、檢測(cè)快速等優(yōu)點(diǎn)。在微流控化學(xué)發(fā)光芯片上實(shí)現(xiàn)對(duì)厚樸酚、和厚樸酚清除過(guò)氧化氫自由基(H2O2)的能力進(jìn)行在線測(cè)定,測(cè)定結(jié)果與微孔板化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)結(jié)果基本一致,證明了該芯片體系的可行性,在抗氧化活性檢測(cè)及篩選上具有明顯的優(yōu)勢(shì)和潛在的實(shí)用價(jià)值。
厚樸提取物 上禾生物 0731*84213302
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