金銀花提取物對蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)、脂質(zhì)代謝及蛋黃膽固醇含量的影響1 | 金銀花提取物對蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)、脂質(zhì)代謝及蛋黃膽固醇含量的影響1 |
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本試驗旨在研究飼糧中添加不同水平的金銀花提取物對蛋雞生產(chǎn)性能、蛋品質(zhì)、脂 質(zhì)代謝及蛋黃膽固醇含量的影響。試驗選用 34 周齡體況健康、產(chǎn)蛋率接近的京粉 2 號蛋雞 600 只，隨機(jī)分成 4 組，每組 5 個重復(fù)，每個重復(fù) 30 只雞。對照組飼喂基礎(chǔ)飼糧，試驗組 分別飼喂在基礎(chǔ)飼糧中添加 100、200 和 300 mg/kg 金銀花提取物的試驗飼糧。試驗期 35 d。 結(jié)果表明：1）與對照組相比，300 mg/kg 組平均蛋重和平均日采食量顯著增加（P<0.05）。2） 與對照組相比，各試驗組的哈氏單位均顯著提高（P<0.05）。3）與對照組相比，各試驗組血 清總膽固醇和甘油三酯含量均顯著降低（P<0.05），200 和 300 mg/kg 組血清高密度脂蛋白膽 固醇含量顯著增加（P<0.05），200 和 300 mg/kg 組蛋黃膽固醇含量顯著降低（P<0.05）。由 此可見，飼糧中添加金銀花提取物可以提高平均蛋重、平均日采食量和雞蛋哈氏單位，改善 蛋雞脂質(zhì)代謝，降低蛋黃膽固醇含量，其中以 300 mg/kg 組效果最為明顯。 關(guān)鍵詞：金銀花提取物；蛋雞；生產(chǎn)性能；蛋品質(zhì)；蛋黃膽固醇 中圖分類號：S831 金銀花是忍冬科忍冬屬多種植物的干燥花蕾，是我國的傳統(tǒng)中藥之一[1]。金銀花主要化 學(xué)成分為酚酸、黃酮、揮發(fā)類油和三萜皂苷類等[2-3]。金銀花提取物主要的活性成分是綠原 酸（chlorogenic acid,CGA）。研究表明，CGA 具有抗氧化、抗菌、抗病毒等功能，可以增強(qiáng) 機(jī)體免疫力[4]；最新研究表明，CGA 在調(diào)控機(jī)體的糖脂代謝方面有顯著作用[5]。目前關(guān)于金 銀花提取物對蛋雞蛋黃膽固醇含量和脂質(zhì)代謝的影響鮮有報道。因此，本研究以 34 周齡京 粉 2 號蛋雞為試驗動物，在飼糧中添加不同水平的金銀花提取物，分別測定蛋雞的生產(chǎn)性能、 蛋品質(zhì)、脂質(zhì)代謝和蛋黃膽固醇含量，并探討通過添加金銀花提取物來降低雞蛋膽固醇含量
*為金銀花提取物在蛋雞生產(chǎn)中的應(yīng)用提供依據(jù)。 1 材料與方法 1.1 試驗材料 金銀花提取物有效成分 CGA 含量為 25%。 1.2 試驗設(shè)計及飼養(yǎng)管理 試驗選用同一雞舍內(nèi)產(chǎn)蛋率相近、體重相近、健康狀態(tài)良好的 34 周齡京粉 2 號蛋雞 600 只，隨機(jī)分成 4 組，每組 5 個重復(fù)，每個重復(fù) 30 只雞。對照組飼喂基礎(chǔ)飼糧（不含金銀花 提取物），試驗組分別飼喂在基礎(chǔ)飼糧中添加 100、200 和 300 mg/kg 金銀花提取物（有效成 分 CGA 含量分別為 25、50 和 75 mg/kg）的試驗飼糧�；A(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平見表 1。 表 1 基礎(chǔ)飼糧組成及營養(yǎng)水平（風(fēng)干基礎(chǔ)） Table 1 Composition and nutrient levels of the basal diet （air-dry basis） % 項目 Items 含量 Content 原料 Ingredients 玉米 Corn 63.00 豆粕 Soybean meal 25.68 豆油 Soybean oil 0.70 石粉 Limestone 8.16 磷酸氫鈣 CaHPO4 1.67 DL-蛋氨酸 DL-Met 0.16 食鹽 NaCl 0.30 預(yù)混料 Premix1） 0.33 合計 Total 100.00 營養(yǎng)水平 Nutrient levels2） chinaXiv:201711.02094v1 ChinaXiv合作期刊 代謝能 ME/（MJ/kg） 11.35 粗蛋白質(zhì) CP 16.99 蛋氨酸 Met 0.42 賴氨酸 Lys 0.84 蛋氨酸+半胱氨酸 Met+Cys 0.72 鈣 Ca 3.60 有效磷 AP 0.43 1)每千克預(yù)混料包含 Per kg of premix contained the following: VA 4 000 000 IU，VD3 600 000 IU，VE 20 g，VK3 500 mg，VB1 50 mg，VB2 3 g，煙酸 nicotinic acid 1 500 mg，泛酸 pantothenic acid 70 mg，葉酸 folic acid 500 mg，氯化膽堿 choline chloride 20 g，F(xiàn)e 60 g，Cu 10 g，Mn 50 g，Zn 70 g，Se 25 mg。 2)營養(yǎng)水平為計算值。Nutrient levels were calculated values. 試驗期間，每天 06:30 和 14:30 各喂飼料 1 次。采用 3 層階梯式籠養(yǎng)方式，自由采食、 飲水。每天光照 16 h，并清糞 1 次。試驗分為預(yù)試期 7 d 和正試期 28 d，共 35 d。 1.3 測定指標(biāo)及方法 1.3.1 生產(chǎn)性能 以重復(fù)為單位每天記錄蛋重、產(chǎn)蛋數(shù)、投料量、剩余料量、雞只存欄數(shù)、破軟蛋數(shù)， 并計算平均蛋重、產(chǎn)蛋率、平均日采食量、破軟蛋率、料蛋比。 1.3.2 蛋品質(zhì) 試驗的最后 1 天，分別從每組中隨機(jī)采取 20 個雞蛋（每重復(fù) 4 個）用于測定雞蛋物理 品質(zhì)指標(biāo)，測定指標(biāo)包括蛋形指數(shù)、蛋殼強(qiáng)度、蛋黃顏色、蛋殼厚度、哈夫單位。測定儀器 包括蛋質(zhì)檢測儀（沈陽富士平工業(yè)有限公司）、蛋殼強(qiáng)度測定儀（沈陽富士平工業(yè)有限公司）、 羅氏比色扇（美國羅氏公司）。 chinaXiv:201711.02094v1 ChinaXiv合作期刊 1.3.3 蛋黃膽固醇含量 從每組中隨機(jī)采取 10 個雞蛋（每重復(fù) 2 個）測定蛋黃膽固醇含量。煮熟雞蛋，研磨均 勻，稱取蛋黃 1 g，用甲醇氯-仿溶液（1:3）研磨至無明顯顆粒，混合 8 min，過濾至 10 mL 容量瓶，并補(bǔ)充甲醇-氯仿溶液定容，待用。分別取 0.02 mL 蛋黃濾液、膽固醇標(biāo)準(zhǔn)液、甲 醇-氯仿溶液加入樣品管、標(biāo)準(zhǔn)管和空白管。在上述 3 支試管中加入鄰苯二甲醛試劑 3 mL， 濃硫酸 2 mL，混勻，冷卻。用 T-6 紫外可見分光光度計（北京普析）以空白管調(diào)零，在 560 nm 處比色，計算蛋黃膽固醇含量[6] 。 1.3.4 脂質(zhì)代謝 試驗結(jié)束時，每個重復(fù)中隨機(jī)選取 1 只雞，翅靜脈采血，以 3 000 r/min 離心 10 min， 分離血清，于-20 ℃保存。血清總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C） 和低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）含量均采用南京建成生物工程研究所生產(chǎn)的試劑盒進(jìn)行測 定。 1.4 統(tǒng)計分析 試驗數(shù)據(jù)差異采用 SPSS 20.0 軟件進(jìn)行單因素方差分析（one-way ANOVA）進(jìn)行，采 用 Duncan 氏法進(jìn)行多重比較，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。 2 結(jié) 果 2.1 金銀花提取物對蛋雞生產(chǎn)性能的影響 由表 2 可知，各試驗組的產(chǎn)蛋率、料蛋比和破軟蛋率與對照組相比無顯著差異（P>0.05）。 平均蛋重隨著金銀花提取物水平的增加呈先降低后升高的趨勢，100 和 200 mg/kg 組的平均 蛋重與對照組相比無顯著差異（P>0.05），300 mg/kg 組的平均蛋重與對照組相比顯著增加 （P<0.05）。300 mg/kg 組的平均日采食量與對照組相比顯著增加（P<0.05）。 表 2 金銀花提取物對蛋雞生產(chǎn)性能的影響 Table 2 Effects of honeysuckle extract on performance of laying hens chinaXiv:201711.02094v1 ChinaXiv合作期刊 項目 金銀花提取物水平 Honeysuckle extract level/（mg/kg） Items 0 100 200 300 產(chǎn)蛋率 LR/% 92.81±1.83 91.62±1.90 92.15±2.15 94.07±1.76 平均蛋重 AEW/g 58.32±0.66b 58.17±0.44b 58.39±0.74b 59.33±0.55a 平均日采食量 ADFI/g 111.62±2.28b 111.22±2.37b 112.76±1.81b 115.26±0.27a 料蛋比 F/E 1.94±0.06 1.98±0.08 1.97±0.05 1.95±0.04 破軟蛋率 Broken egg rate/% 0.40±0.17 0.27±0.18 0.24±0.23 0.47±0.25 同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)相同字母或無字母表示差異不顯著（P>0.05），肩標(biāo)不同字母表示差異顯 著（P<0.05）。下表同。 In the same row, values with the same or no letter superscripts mean no significant difference （P>0.05）, while with the different letter superscripts mean significant difference （P<0.05）. The same as below. 2.2 金銀花提取物對蛋雞蛋品質(zhì)的影響 由表 3 可知，與對照組相比，各試驗組的蛋形指數(shù)、蛋黃顏色、蛋殼厚度、蛋殼強(qiáng)度 均無顯著差異（P>0.05）。與對照組相比，各試驗組的哈氏單位均顯著提高（P<0.05），分別 提高了 8.2%、6.2%和 9.2%。 表 3 金銀花提取物對蛋雞蛋品質(zhì)的影響 Table 3 Effects of honeysuckle extract on egg quality of laying hens 項目 金銀花提取物水平 Honeysuckle extract level/（mg/kg） Items 0 100 200 300 蛋形指數(shù) ESI 1.36±0.03 1.35±0.02 1.37±0.04 1.36±0.02 蛋殼強(qiáng)度 ES/kgf 3.35±0.75ab 3.40±0.50ab 3.15±059b 3.60±0.68a 蛋黃顏色 YC 13.45±1.15 13.25±0.79 13.20±0.95 12.90±0.92 chinaXiv:201711.02094v1 ChinaXiv合作期刊 蛋殼厚度 ET/mm 0.38±0.03 0.39±0.03 0.38±0.04 0.38±0.03 哈氏單位 HU 85.72±4.42b 93.42±6.20a 91.10±4.62a 93.60±5.28a 2.3 金銀花提取物對蛋雞脂質(zhì)代謝和蛋黃膽固醇含量的影響 由表 4 可知，與對照組相比，各試驗組的血清 TG 含量顯著降低（P<0.05）；各試驗組 的血清 TC 含量顯著降低（P<0.05），300 mg/kg 組下降最明顯為 27.56%。血清 HDL-C 含量 隨金銀花提取物水平升高而升高，200、300 mg/kg 組的血清 HDL-C 含量顯著高于對照組 （P<0.05）。與對照組相比，各試驗組血清 LDL-C 含量無顯著差異（P>0.05）。與對照組相 比，200 和 300 mg/kg 組的蛋黃膽固醇含量顯著降低（P<0.05），分別下降了 8.17%和 18.64%。 表 4 金銀花提取物對蛋雞脂質(zhì)代謝和蛋黃膽固醇含量的影響 Table 4 Effects of honeysuckle extract on lipid metabolism and yolk cholesterol content of laying hens （mmol/L） 項目 金銀花提取物水平 Honeysuckle extract level/（mg/kg） Items 0 100 200 300 血清 Serum/（mmol/L） 甘油三酯 TG 18.78±1.12a 15.97±0.64b 15.55±0.59b 16.20±1.47b 總膽固醇 TC 3.58±0.66a 3.07±0.30b 3.01±0.22b 2.59±0.20b 高密度脂蛋白膽固醇 HDL-C 1.01±0.06b 1.14±0.14ab 1.25±0.10a 1.26±0.13a 低密度脂蛋白膽固醇 LDL-C 1.23±0.13 1.14±0.14 1.13±0.12 1.15±0.15 蛋黃 Egg yolk/（mg/g） 膽固醇 Cholesterol 13.95±0.51a 14.00±0.81a 12.81±1.06b 11.43±1.02c 3 討 論 3.1 金銀花提取物對蛋雞生產(chǎn)性能的影響 本試驗結(jié)果表明，飼糧中添加 300 mg/kg 的金銀花提取物可以顯著提高蛋雞平均日采 chinaXiv:201711.02094v1 ChinaXiv合作期刊 食量和平均蛋重。金銀花提取物中的主要活性成分是 CGA，CGA 具有抗氧化性、抗菌、抗 毒、提高免疫力等多種功能[7]。張瑞仙[8]研究顯示，在羅曼粉蛋雞飼糧中分別添加 0.5%、1.0%、 1.5%和 2.0%金銀花，蛋雞的平均日采食量均分別提高了 5.46%、8.20%、9.53%和 9.63%， 1.0%、1.5%和 2.0%的添加量均顯著提高了產(chǎn)蛋率。黃濤等[9]在愛拔益加（AA）肉雞飼糧中 添加 0（對照）、0.05%、0.10%、0.15%和 0.20%的杜仲葉 CGA，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，0.15%試驗組與 對照組相比可以顯著提高 7~14 日齡和 28~35 日齡肉雞的平均日增重，0.05%和 0.15%試驗組 可分別降低 28~35 日齡肉雞料重比 21.15%和 19.34%。上述研究表明，CGA 在改善動物生產(chǎn) 性能方面具有積極作用。CGA 改善動物生產(chǎn)性能可能是由于其具有較強(qiáng)的抗氧化能力，對 脂質(zhì)過氧化抑制有積極作用[10]。關(guān)炳烽等[11]試驗表明，金銀花提取物抗氧化能力與 CGA 含 量相關(guān)，且其清除羥基自由基的能力優(yōu)于維生素 C。Zang 等[12]研究發(fā)現(xiàn)，CGA 清除羥基的 清除速率常數(shù)為 7.73×109 ，認(rèn)為 CGA 的抗氧化性可能與直接清除羥基自由基有關(guān)。李文娜 等[13] 研究發(fā)現(xiàn)，CGA 對超氧陰離子、羥基自由基、烷過氧自由基及 1,1-二苯基-2-苦肼基等 自由基有較強(qiáng)的清除作用，對烷過氧自由基、超氧陰離子的清除能力超過了維生素 C。此外， CGA 具有抗菌、抗病毒的能力，有助于提高家禽免疫力，從而改善生產(chǎn)性能。研究表明， CGA 可以增強(qiáng)流感病毒抗原引發(fā)的 T 細(xì)胞增殖[14]，并且在大鼠的研究中發(fā)現(xiàn) CGA 可以顯 著提高其體內(nèi)免疫球蛋白 E（IgE）、免疫球蛋白 G（IgG）和白細(xì)胞介素-4（IL-4）含量[15]。 馬力等[16] 研究表明，CGA 可顯著提高大鼠腸道固有層淋巴細(xì)胞中 γ 腫瘤壞死因子和α干擾 素含量。 3.2 金銀花提取物對蛋雞蛋品質(zhì)的影響 本試驗結(jié)果表明，試驗組蛋形指數(shù)、蛋黃顏色、蛋殼厚度、蛋殼強(qiáng)度與對照組相比均無 顯著差異。各試驗組均顯著提高了雞蛋哈氏單位，說明金銀花提取物能夠提高蛋白高度，一 定程度上有助于增強(qiáng)蛋白分泌。張瑞仙[8]研究發(fā)現(xiàn)，在飼糧中添加 0.5%和 1.5%的金銀花粉 可適當(dāng)提高雞蛋哈氏單位，但差異并不顯著。雞蛋蛋白的分泌主要是在輸卵管的膨大部分， chinaXiv:201711.02094v1 ChinaXiv合作期刊 金銀花提取物可能在此對分泌產(chǎn)生影響，由于其活性物質(zhì) CGA 具有很好的抗氧化能力，有 助于維持細(xì)胞膜的正常生理功能，這對分泌部位細(xì)胞膜可能具有積極作用，但其具體機(jī)制尚 不完全清楚。邵洪等[17]認(rèn)為，自由基會對氨基酸、多肽、蛋白質(zhì)等進(jìn)行修飾，促進(jìn)蛋白質(zhì) 的降解，而金銀花提取物中含有的 CGA 對自由基有良好的清除作用。 3.3 金銀花提取物對蛋雞脂質(zhì)代謝和蛋黃膽固醇含量的影響 蛋雞體內(nèi)的膽固醇來源主要有 2 個途徑，第 1 個途徑是外源性的膽固醇（飼糧中的膽固 醇），由于蛋雞飼糧中通常不含膽固醇，所以這一途徑可忽略不計；第 2 個途徑是蛋雞自身 合成，合成的主要部位是肝臟，在肝臟中合成蛋黃膽固醇的前體物質(zhì)是極低密度脂蛋白和卵 黃蛋白原，合成的蛋黃膽固醇通過血液循環(huán)進(jìn)入卵巢沉積于蛋黃中[18]。蛋雞體內(nèi)的膽固醇 主要通過 3 種方式排出，其一是通過雞蛋排出，這是最主要的方式，大概占膽固醇的 2/3； 其二是由肝臟和腸道產(chǎn)生中性固醇以糞便形式排出體外；其三是在肝臟中氧化的膽固醇形成 膽汁酸通過糞便排出[19]。本試驗研究發(fā)現(xiàn)，200 和 300 mg/kg 組蛋黃膽固醇含量與對照組相 比分別下降了 8.17%和 18.64%。金銀花提取物中主要活性物質(zhì) CGA 影響蛋雞脂肪代謝的原 因可能有：1）通過影響膽固醇合成和分解的相關(guān)酶活性及相關(guān)基因表達(dá)來影響膽固醇水平。 李文娜等[20]研究發(fā)現(xiàn)，杜仲葉 CGA 提取物抑制豬肝臟 3-羥基-3-甲基戊二酸單酰輔酶 A （HMG-CoA）還原酶的效價強(qiáng)于辛伐他丁。HMG-CoA 還原酶是膽固醇合成過程中的限速 酶。Ong 等[21]給口服葡萄糖耐量試驗后的 db/db 小鼠飼喂含 250 mg/kg CGA 的飼糧，發(fā)現(xiàn) CGA 可以通過激活腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)來改善葡萄糖和脂質(zhì)代謝，從而影響 AMPK-羥甲基戊二酸單酰輔酶 A 還原酶(HMGR)通路。AMPK 作用于 HMGR 肽鏈中 Ser-871 位點(diǎn)[22]。研究不同濃度 5-氨基-4-咪唑羧基酰胺核苷（AICAR）對肝細(xì)胞 HMGR 活性影響時 發(fā)現(xiàn)，隨著 AICAR 濃度增加，AMPK 呈劑量依賴性活化的同時，HMGR 呈劑量依賴性失活 [23-24]。所以 CGA 可能通過激活 AMPK，導(dǎo)致 HMGR 磷酸化失活，使膽固醇合成受到顯著 抑制。膽固醇 7α-羥化酶（CYP7A1）是肝臟合成并促使膽固醇轉(zhuǎn)化為膽汁酸的限速酶[25] 。 chinaXiv:201711.02094v1 ChinaXiv合作期刊 Wan 等[26] 通過對大鼠飼喂正常飼糧、高膽固醇飼糧以及在高膽固醇飼糧的基礎(chǔ)上添加 CGA （1 和 10 mg/kg）的飼糧的研究，發(fā)現(xiàn)與正常飼糧組相比，飼糧添加 CGA 后，CYP7A1 表 達(dá)有所增加，促使膽固醇轉(zhuǎn)化為膽汁酸。2）通過調(diào)節(jié)膽固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白（SREBPs） 影響膽固醇合成。Murase 等[27]發(fā)現(xiàn)，在 Hepal-6 細(xì)胞中添加 5 μmol/L CGA 可以下調(diào)乙酰輔 酶 A 羧化酶、脂肪酸合成酶和 SREBP-1c 等 mRNA 表達(dá)。3）通過增強(qiáng)過氧化物酶體增殖物 激活受體（PPARs）來提高內(nèi)源膽固醇的逆向轉(zhuǎn)運(yùn)，增強(qiáng)膽汁酸排泄。Li 等[28]給雄性黃金倉 鼠飼喂高脂飼糧（含脂肪 15%），之后對試驗組每天按每千克體重 80 mg 的劑量在腹腔注射 含 CGA 的溶劑，8 周后 CGA 顯著提高了倉鼠肝臟 PPAR-α mRNA 和蛋白質(zhì)的表達(dá)水平。 Fruchart 等[29]認(rèn)為，PPARs 的活化作用于與高密度脂蛋白（HDL）相關(guān)的 5 種基因，包括載 脂蛋白 A（apo-A）、載脂蛋白 B（apo-B）、脂蛋白酯酶（LPL）、B 族Ⅰ型清道夫受體(SR-B Ⅰ)和 ATP 結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 A1（ABCAl），從而促進(jìn) HDL 形成，提高血清中 HDL 含量，促 進(jìn)膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)的過程。本研究結(jié)果表明，金銀花提取物能顯著降低血清中 TC 和 TG 含 量，且 300 mg/kg 組效果最好。200 和 300 mg/kg 組均能提高血清 HDL-C 含量，促進(jìn)膽固醇 的逆向轉(zhuǎn)運(yùn)過程。 4 結(jié) 論 ① 飼糧中添加 300 mg/kg 金銀花提取物可以顯著提高蛋雞平均蛋重和平均日采食量，且對 蛋雞生產(chǎn)性能無不良影響。 ② 飼糧中添加金銀花提取物可以顯著提高雞蛋哈氏單位。 ③ 飼糧中添加金銀花提取物可通過提高血清 HDL-C 含量，促進(jìn)膽固醇逆向轉(zhuǎn)運(yùn)，降低蛋黃 膽固醇含量。 參考文獻(xiàn)： [1] 康延國.中藥鑒定學(xué)[M].3 版.北京:中國中醫(yī)藥出版社,2012:280–283. chinaXiv:201711.02094v1 ChinaXiv合作期刊 [2] 王林青,崔保安,張紅英.金銀花藥理作用研究進(jìn)展[J].中國畜牧獸醫(yī),2007,34(11):91–95. 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