關(guān)鍵詞：杜仲，亞慢性毒性，杜仲葉提取物綠原酸，綠原酸，杜仲綠原酸
摘要：目的研究不同劑量的杜仲葉提取物綠原酸綠原酸水溶液對(duì)小鼠亞慢性毒性作用，為臨床應(yīng)用提供依據(jù)。方法給實(shí)驗(yàn)小鼠灌服不同劑量的杜仲葉提取物綠原酸水溶液。在實(shí)驗(yàn)中、末期停藥后24 h，分別取血測定血液學(xué)、血液生化和主要臟器指標(biāo)，并作病理切片。結(jié)果灌胃中、低劑量（2.06 g/kg，0.69 g/kg）的杜仲葉提取物綠原酸水溶液，能夠提高小鼠血紅蛋白含量和紅細(xì)胞數(shù)（P＜0.01），對(duì)白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)無影響，同時(shí)能夠提高小鼠體重、總蛋白及白蛋白含量（P＜0.01），對(duì)脾臟、肝臟、心臟、肺臟、腎、性器官指數(shù)及血清酶活性無影響（P＞0.05）。結(jié)論杜仲葉提取物綠原酸對(duì)受試動(dòng)物未見有明顯毒性作用。
我國對(duì)杜仲（Eucommia ulmoides）的利用歷史悠久，近幾年我國學(xué)者在杜仲的生物學(xué)、化學(xué)成分、生理生化等方面做了許多研究，已知杜仲的化學(xué)成分主要有：（1）木脂素類；（2）環(huán)烯醚萜類；（3）酚類化合物等，唐建軍、李家實(shí)等認(rèn)為，杜仲中有效成分對(duì)動(dòng)物血壓有雙向調(diào)節(jié)功能。唐建軍等報(bào)道：杜仲含有豐富的VE和 β-胡蘿卜素，有延緩衰老、增強(qiáng)機(jī)體免疫體力作用。為了更好地開發(fā)利用杜仲，我們探索了杜仲葉提取物綠原酸對(duì)動(dòng)物亞慢性毒性作用，并為臨床應(yīng)用提供一定的理論依據(jù)。
1 材料
1.1 藥品與動(dòng)物杜仲葉提取物綠原酸：
主要成分：80%氯原酸。（附注：現(xiàn)有市場上杜仲提取物綠原酸主要規(guī)格有：5%綠原酸 10%綠原酸 25%綠原酸 50%綠原酸 98%綠原酸 10：1杜仲提取物等，長沙上禾生物科技）昆明種小鼠，雌雄各半，體重（20±2）g，8周齡，購于湖南中醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。
1.2 儀器ES-C300A電子天平，湘儀天平儀器廠。MD-100自動(dòng)生化分析儀器儀。美國 Leyte Drive Torranle化學(xué)儀器公司生產(chǎn)。
2 方法與結(jié)果
2.1 小鼠最大耐受量采用最大給藥量［3］法，在預(yù)試基礎(chǔ)上，取小鼠100只，雌雄各半，體重（20±2）g，隨機(jī)分成5組，分次灌服不同劑量杜仲葉提取物綠原酸水溶液0.5 ml/次，觀察7 d內(nèi)動(dòng)物死亡數(shù)，同時(shí)觀察動(dòng)物一般狀況及活動(dòng)情況。結(jié)果見表1。動(dòng)物在7 d內(nèi)均無異常反應(yīng)，考慮到杜仲的濃度以及小鼠的灌胃容積都已達(dá)到最大，因此，杜仲葉提取物綠原酸的小鼠灌胃最大給藥量應(yīng)大于18.52 g/kg。按小鼠的平均體重為20 g，成人平均體重60 kg，成人每日用量6~9 g［4］計(jì)算，小鼠的最大耐受倍數(shù)=18.52×60/9=124（倍），故認(rèn)為本藥具有較大的安全性。
2.2 杜仲葉提取物綠原酸對(duì)小鼠的亞慢性毒性實(shí)驗(yàn)［5，6］取健康小鼠80只，體重為（20±2） g，雌雄各半，分籠顆粒飼料喂養(yǎng)，將小鼠隨機(jī)分為3個(gè)劑量組6.17，2.06，0.69 g/kg和1個(gè)對(duì)照組（生理鹽水）。各組分別以0.5 ml/次容量灌胃：1次/ d，連續(xù)8周，每周停藥2 d，期間每周稱重，并根據(jù)體重調(diào)整藥量。同時(shí)觀察動(dòng)物的一般體征。實(shí)驗(yàn)中、末期停藥后24 h，測定血液學(xué)指標(biāo) Hb，RBC，WBC和白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)（DC）及血液生化指標(biāo)（TP，ALB，AST，ALT，BUN，ALP和GLu），兩次采血后分兩批處死動(dòng)物，對(duì)（心、肝、脾、肺、腎、性腺）主要臟器計(jì)算臟器重量系數(shù)，并做病理切片檢查。
表1 小鼠灌胃給藥最大耐受量（MTD）的測定(略)
2.2.1 杜仲葉提取物綠原酸對(duì)小鼠體重的影響結(jié)果由表2可看出，各組小鼠在第4，8周時(shí)，中、低劑量組（2.06，0.69 g/kg）與對(duì)照組差異極顯著（P＜0.01），出現(xiàn)明顯的增重。第8周時(shí)，高劑量組與對(duì)照組差異不顯著（P＞0.05）。
2.2.2 小鼠血液學(xué)指標(biāo)的變化結(jié)果見表3。由表3可知，實(shí)驗(yàn)第4，8周時(shí)，濃度為2.06，0.69 g/kg杜仲的提取物能夠顯著提高小鼠的Hb含量及RBC（P＜0.01）。在6.17 g/kg的濃度水平下，第4周杜仲葉提取物綠原酸顯著提高小鼠的 Hb含量及RBC（P＜0.05），第8周與對(duì)照組比較無顯著差異（P＞0.05）；實(shí)驗(yàn)組N，L，E，M計(jì)數(shù)與對(duì)照組比較均差異不顯著（P＞0.05）。
2.2.3 杜仲葉提取物綠原酸對(duì)小鼠血液生化指標(biāo)的影響結(jié)果見表4。由表4可知，第4，8周，中、低劑量組TP、ALB含量均極顯著的高于對(duì)照組（P＜0.01）。TP含量高劑量組第4周高于對(duì)照組（P＜0.05），第8周則無差異顯著性（P＞0.05）；ALB含量第4周與對(duì)照組比較差異不顯著（P＞0.05）；第8周低于對(duì)照組（P＜0.05）；G的含量第4周高劑量組和第8周各組高于對(duì)照組（P＜0.05）；BUN含量高劑量組與對(duì)照組相比差異顯著（P＜0.05），中、低劑量組與對(duì)照組無顯著差異（P＞0.05）。
表2 小鼠平均體重變化(略)
每組均與對(duì)照組比較，*表示5%的顯著水平，**表示1%的極顯著水平（下同）
表3 小鼠血液學(xué)指標(biāo)(略)
動(dòng)物數(shù)上排為給藥后4周，下排為第8周停藥后2 d（下同）
表4 小鼠血液生化指標(biāo)(略)
2.2.4 杜仲葉提取物綠原酸對(duì)小鼠主要臟器的影響由表5可知，各實(shí)驗(yàn)組臟器指數(shù)與對(duì)照組比較無顯著性差異（P＞0.05）。
表5 小鼠主要器官指數(shù)(略)
2.2.5 杜仲葉提取物綠原酸對(duì)小鼠病理組織形態(tài)學(xué)的觀察實(shí)驗(yàn)中、末期分別對(duì)小鼠進(jìn)行剖檢，觀察各組織器官未見明顯的眼觀病理變化，對(duì)各組臟器進(jìn)行鏡檢，均未見有意義的病理組織學(xué)改變。
3 討論
通過MTD實(shí)驗(yàn)觀察，小鼠精神狀態(tài)良好，無死亡發(fā)生，給藥后的第8天處死動(dòng)物，肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎等均無異常發(fā)生，說明小鼠對(duì)杜仲葉提取物綠原酸MTD應(yīng)大于18.52 g/kg，相當(dāng)于體重為60 kg的成人用量（6~9 g）的124倍。根椐有關(guān)資料［7］，中藥的安全性以小鼠能耐受人用量的100倍以上為安全，故認(rèn)為本品具有很大的安全性。對(duì)小鼠體重檢測表明：中、低劑量（2.06，0.69 g/kg）的杜仲葉提取物綠原酸水溶液能極顯著提高小鼠的體重（P＜0.01），高濃度的杜仲葉提取物綠原酸長時(shí)間飼喂小鼠無增重作用。王介慶等［8］用杜仲活性成分提取液對(duì)肉雞增重實(shí)驗(yàn)中也有增重，本研究結(jié)果證實(shí)了這一點(diǎn)。血液學(xué)指標(biāo)檢測表明：中、低劑量杜仲葉提取物綠原酸水溶液能極顯著提高小鼠的 Hb含量和RBC（P＜0.01）。高劑量（6.17 g/kg）的杜仲葉提取物綠原酸水溶液在第4周時(shí)顯著提高小鼠的紅細(xì)胞數(shù)、血紅蛋白含量（P＜0.05），第8周時(shí)則無此作用。杜仲葉提取物綠原酸對(duì)小鼠WBC及WBC的分類計(jì)數(shù)無明顯影響。血液生化檢測結(jié)果表明：中、低劑量杜仲葉提取物綠原酸水溶液能極顯著提高TP，ALB的含量，對(duì)血清酶AST，ALT的活性無明顯影響，這說明機(jī)體的新陳代謝加強(qiáng)，對(duì)養(yǎng)分的利用率升高，從而促進(jìn)了小鼠的生長。高劑量杜仲葉提取物綠原酸水溶液在第4周時(shí)能提高TP，ALB含量，第8周時(shí)則無此作用，但卻提高了AST，ALT的活性，結(jié)合有關(guān)資料［9］，推測高劑量的杜仲葉提取物綠原酸有可能影響了肝臟的功能，從而使機(jī)體的養(yǎng)分利用降低。BUN的含量在杜仲葉提取物綠原酸濃度為2.06，0.69 g/kg時(shí)無顯著性差異，在高劑量作用下，明顯升高，推測高劑量時(shí)有可能使腎機(jī)能受到影響。實(shí)驗(yàn)期對(duì)ALP及GLu的含量無明顯影響，說明6.17 g/kg劑量以下的杜仲葉提取物綠原酸對(duì)ALP及GLu無影響。
臟器指數(shù)檢測結(jié)果表明：本品對(duì)脾臟、肺臟、心臟、腎臟、性器官指數(shù)無明顯影響，說明杜仲葉提取物綠原酸在6.17 g/kg劑量水平以下，不損害以上臟器。以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，杜仲葉提取物綠原酸對(duì)受試動(dòng)物無明顯毒性作用。
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［10］ www.csnutilities.com
研究不同劑量的杜仲葉提取物綠原酸水溶液對(duì)小鼠亞慢性毒性作用 
