藤茶中黃酮二氫楊梅素的提取分離降血脂作用及藤茶安全評價(jià)的研究 | 藤茶中黃酮二氫楊梅素的提取分離降血脂作用及藤茶安全評價(jià)的研究 |
| 發(fā)布時(shí)間:2020-09-20 信息來源:admin 發(fā)布人:admin 點(diǎn)擊次數(shù):969 |
藤茶為我國特有茶用,藥用植物,富含二氫楊梅素等黃酮類物質(zhì).有關(guān)藤茶的研究主要集中在藤茶活性成分的分離鑒定及黃酮抗菌,抗氧化,降血糖作用等方面.
本文在對藤茶飲用的安全性進(jìn)行評價(jià)的基礎(chǔ)上,以活性為跟蹤,采用二次正交旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計(jì)法研究了藤茶主要活性成分黃酮及二氫楊梅素的提取條件,比較了不同藤茶原料黃酮含量及其活性的變化,篩選了利用大孔樹脂純化藤茶黃酮的分離條件,對藤茶水提物,黃酮及二氫楊梅素的降血脂作用及其機(jī)理進(jìn)行系統(tǒng)研究,以期為藤茶的開發(fā)應(yīng)用提供理論基礎(chǔ). 1藤茶黃酮提取條件的研究 在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,采用二次回歸正交旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計(jì)方法研究了溫度,時(shí)間,料液比,乙醇濃度對藤茶黃酮和二氫楊梅素(DHM)提取率,黃酮純度及其對O_2~(·-)自由基清除率的影響.結(jié)果表明,溫度,時(shí)間,料液比極顯著影響藤茶黃酮及二氫楊梅素的提取率,建立的回歸模型顯著性檢驗(yàn)達(dá)極顯著水平,回歸模型的預(yù)測值與實(shí)測值能較好地?cái)M和.結(jié)合黃酮的純度和對O_2~(·-)自由基清除率活性分析,藤茶黃酮的最佳浸提條件:乙醇濃度在-0.8～1水平(67%～85%),浸提溫度在0～1水平(65℃～77.5℃),浸提時(shí)間在-1～0.3水平(60min～100min),料液比在0～1水平(1:30～40).根據(jù)二氫楊梅素的提取率和含量分析,其最佳提取條件為:提取溫度在-0.8～-0.03水平(55℃～65℃),時(shí)間在-0.1～0.1水平(86min～93min),料液比在0～0.5水平(1:30～35),乙醇濃度在0.5～-0.1水平(74%～80%). 2不同藤茶原料黃酮含量及活性的研究 2.1生育期的影響.對藤茶不同嫩度以及新梢不同部位原料的黃酮,二氫楊梅素含量及黃酮清除O_2~(·-)自由基的活性進(jìn)行分析,
表明隨著原料的老化,黃酮含量及其清除O_2~(·-)自由基的能力呈下降趨勢.二氫楊梅素的變化趨勢與黃酮基本相同.與葉片相比,藤茶梗中黃酮和二氫楊梅素的含量最低,但活性卻相對較高.提示一方面藤茶中的活性黃酮主要集中在葉片,尤其是生育旺盛的部位積累最多,另一方面莖梗與葉片黃酮的組成可能存在較大差異. 2.2栽培條件的影響.分別對栽培型,野生型,仿野生型藤茶的黃酮和二氫楊梅素含量以及清除O_2~(·-)自由基的活性進(jìn)行分析.結(jié)果表明,黃酮和二氫楊梅素含量以及清除O_2~(·-)自由基的活性大小依次為野生型>仿野生型>栽培型.提示藤茶生長條件的改變已對體內(nèi)生理生化變化產(chǎn)生了較大影響. 2.3產(chǎn)地的影響.分析了全國主要藤茶產(chǎn)地湖南,湖北,廣東,廣西,江西,福建等地所產(chǎn)藤茶原料中黃酮,二氫楊梅素含量及其活性變化.結(jié)果表明,以廣東連南,福建武平,江西定南所產(chǎn)藤茶的黃酮及二氫楊梅素含量最高,湖南桑植,茶陵,恩施來風(fēng)所產(chǎn)藤茶的黃酮及二氫楊梅素含量相對較低.各地藤茶黃酮清除O_2~(·-)自由基的能力與其含量的相關(guān)性不明顯(r=0.2769),但與二氫楊梅素的含量呈極顯著的正相關(guān)(r=0.8330).由此說明,藤茶黃酮的活性主要與其組成有關(guān),而二氫楊梅素是黃酮活性的主體成分. 2.4葉型的影響.對大,中,小三種不同葉型的藤茶黃酮進(jìn)行分析,表明黃酮和二氫楊梅素含量高低依次為中葉>小葉>大葉,黃酮清除O_2~(·-)自由基的活性大小依次為小葉>中葉>大葉,但小葉和中葉型藤茶黃酮的活性變化差異不顯著.說明在進(jìn)行品種選育時(shí)應(yīng)以中,小葉型藤茶為主. 3藤茶中黃酮的分離純化及結(jié)構(gòu)鑒定 選用11種大孔樹脂對藤茶黃酮進(jìn)行了靜態(tài)吸附與解吸附實(shí)驗(yàn).結(jié)果表明,1號樹脂適宜于藤茶黃酮的分離純化,對黃酮的吸附量可達(dá)41.41mg/g,解析率達(dá)到89.2%.通過動態(tài)吸附實(shí)驗(yàn)對1號樹脂有關(guān)參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化.
結(jié)果表明,黃酮上樣濃度6-7mg/ml,上樣體積為柱體積的1/3,流速1.8ml/min,用95%的乙醇進(jìn)行洗脫,可達(dá)到較好的洗脫與純化效果,黃酮的洗脫率可達(dá)90%左右,洗脫出的黃酮純度達(dá)65%左右.進(jìn)一步利用重結(jié)晶方法得到純度為98.7%的純品,經(jīng)紫外可見光譜,紅外光譜,LC-Ms分析表明,黃酮中的主要成分為二氫楊梅素. 4藤茶安全性毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)研究 根據(jù)保健食品檢驗(yàn)與評價(jià)技術(shù)規(guī)范對藤茶安全性進(jìn)行了評價(jià).急性毒性試驗(yàn)結(jié)果表明,受試藤茶屬無毒級;3項(xiàng)致突變試驗(yàn)結(jié)果均為陰性.大鼠90天喂養(yǎng)試驗(yàn)中,藤茶各劑量組動物生長發(fā)育良好,對體重,食物利用率無不良影響.各劑量組血常規(guī),白細(xì)胞分類結(jié)果與對照組無顯著差異.大鼠血清ALT,AST,BUN,TC,TG,CRE,GLU,ALB,TP測定結(jié)果與對照組比較無顯著差異.臟器系數(shù)與對照差異不明顯.肝,心,脾,腎,胃腸,睪丸,卵巢等器官外觀和組織切片與對照相比均未發(fā)現(xiàn)實(shí)質(zhì)性病理改變.說明飲用藤茶安全無毒. 5藤茶提取物降大鼠及人體血脂作用研究 用大鼠脂質(zhì)代謝紊亂模型法研究藤茶提取液對大鼠的降血脂作用.結(jié)果表明,與高脂模型組比較,藤茶高劑量組(4.5g/Kg.bw)大鼠血清TC顯著降低,高,中劑量組(3.0g/Kg.bw)血清TC下降>10%;高,中劑量組TG顯著降低,其中,高劑量組TG下降>15%;高,中,低劑量組(1.5g/Kg.bw)HDL-C顯著升高,其中,高劑量組HDL-C升高值>0.12mmol/L.人體臨床試驗(yàn)表明,服用藤茶組降TC有效率為42.0%,降TG有效率為72.0%,降血脂有效率為28.0%,極顯著高于對照組.服用藤茶組血清TC,TG明顯降低,與試用前及對照組比較差異極顯著.試驗(yàn)組實(shí)驗(yàn)前后血液學(xué)指標(biāo)及血生化指標(biāo)檢驗(yàn)結(jié)果無顯著變化.提示藤茶提取物對大鼠及人體都有輔助降血脂的作用. 6藤茶中黃酮及二氫楊梅素降血脂作用研究 對藤茶中主要活性成分黃酮及二氫楊梅素對高血脂癥小鼠的降血脂效果進(jìn)行了研究.結(jié)果表明,與高脂模型組比較,0.5g/kg.bw灌胃(ig)劑量的二氫楊梅素能明顯減輕小鼠體重;各劑量黃酮都能顯著降低小鼠血清TG含量;0.3g/kg.bw ig劑量二氫楊梅素能顯著降低小鼠血清TC,TG,LDL-C含量,0.5g/kg.bw ig劑量二氫楊梅素能極顯著提高血清HDL-C含量;黃酮及二氫楊梅素都能明顯提高小鼠血清SOD活性,降低血清MDA含量及肝系數(shù).肝臟病理學(xué)觀察表明,藤茶黃酮及二氫楊梅素能降低肝細(xì)胞變性,腫脹的程度.說明藤茶黃酮及二氫楊梅素能降低小鼠血脂,增強(qiáng)機(jī)體抗氧化能力,減輕高脂對肝細(xì)胞的損傷作用. 7二氫楊梅素發(fā)揮生理活性的機(jī)理研究 結(jié)合藥代動力學(xué)原理,應(yīng)用紫外吸收光譜,熒光光譜等方法對二氫楊梅素與牛血清白蛋白(BSA)相互作用機(jī)理進(jìn)行了研究.結(jié)果表明,在弱堿性條件下,二氫楊梅素易解離成為陰離子,紫外吸收峰發(fā)生明顯紅移;在生理pH(7.4)下,BSA中加入不同濃度的二氫楊梅素后,吸收峰發(fā)生了紅移.二氫楊梅素對BSA的內(nèi)源熒光強(qiáng)度有較強(qiáng)的猝滅作用,屬靜態(tài)猝滅類型,猝滅速率常數(shù)Kq=3.97×10~(12);二氫楊梅素與BSA之間結(jié)合位點(diǎn)數(shù)n=1.97,結(jié)合常數(shù)K_A=5.04×10~9.Ca~(2+),Zn~(2+),Mn~(2+),Cu~(2+)金屬離子的存在會使二氫楊梅素與BSA的速率猝滅常數(shù)增大,結(jié)合常數(shù)和結(jié)合位點(diǎn)數(shù)降低,減小了二氫楊梅素與BSA的結(jié)合,而Fe~(3+)使二氫楊梅素與BSA的結(jié)合位點(diǎn)數(shù)和結(jié)合常數(shù)都增加,提高了二氫楊梅素與BSA的 結(jié)合.說明二氫楊梅素在機(jī)體內(nèi)易與生物大分子結(jié)合而發(fā)揮其活性功能,金屬離子的存在直接影響二者的結(jié)合,從而影響其活性的發(fā)揮.
關(guān)鍵詞：藤茶 安全評價(jià) 黃酮 二氫楊梅素 提取純化 降血脂
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