金銀花提取物綠原酸檢測方法探討 | 金銀花提取物綠原酸檢測方法探討 |
| 發(fā)布時(shí)間:2020-10-11 信息來源:admin 發(fā)布人:admin 點(diǎn)擊次數(shù):797 |
| 金銀花FlosLonicerae又名忍冬、雙花，為臨床常用中藥,具有清熱解毒、涼散風(fēng)熱之成效，主治癰腫疔瘡、喉痹、丹毒、熱毒血痢、風(fēng)熱傷風(fēng)、溫病發(fā)熱等。在中成藥中，金銀花或以細(xì)粉直接入藥，或以提取物的方式入藥，但大部分制劑以后者的方式入藥。 意圖樹立金銀花提取物中綠原酸含量的HPLC測定辦法。辦法國產(chǎn)C18柱(4.6mm×250mm,7μm);活動相為乙腈：0.4%磷酸(12∶88);檢測波長為327nm;流速1ml·min-1;進(jìn)樣量10μl;柱溫25℃。成果綠原酸在0.0716～0.6444μg范圍內(nèi)線性關(guān)系杰出，r=0.9996;均勻回收率99.99%，RSD=1.61%(n=6)。定論該辦法簡潔、快速、******，可用于金銀花提取物的含量測定及質(zhì)量操控。 金銀花入藥有兩種方式，一是以全草直接投料,煎煮入藥，即以煎煮液(即藥材的提取液)作為半成品(中間體);另一種是先提取有用部位，而后以提取物投料，即以提取物作為中間體(原料)為了有用操控金銀花提取物(中間體)的內(nèi)涵質(zhì)量，本試驗(yàn)參考了有關(guān)文獻(xiàn)[2，3]及2005版《我國藥典》[4]辦法，選用高效液相色譜法測定金銀花提取物中綠原酸含量。 1儀器與試藥 Agilent1100series高效液相色譜儀(G1322A排氣閥，G1311A泵，G1316A柱溫箱，G1314A紫外檢測器)，chemistation色譜工作站，KromasilC18色譜柱，超聲提取器，綠原酸對照品(我國藥品生物制品判定所，批號110753-200212)，金銀花提取物(本試驗(yàn)室克己)，乙腈，磷酸均為剖析純;水為雙蒸水。 2辦法與成果[5] 2.1剖析辦法的樹立——別離及檢測條件的選擇 2.1.1色譜條件色譜柱為國產(chǎn)KromasilC18柱(250mm×4.6mm，7μm);柱溫25℃;活動相為乙腈-0.4%磷酸(12∶88);流速為1ml·min-1;檢測波長327nm。 2.1.2pH值對峰形的影響綠原酸歸于有機(jī)酸類物質(zhì)，在HPLC測定時(shí)易發(fā)作前沿或拖尾峰，活動相參加酸能夠改進(jìn)這種現(xiàn)象。本試驗(yàn)比較了水、乙酸、磷酸對峰形的影響，當(dāng)選用0.4%磷酸時(shí)，可得到較好的色譜峰形。 2.1.3色譜體系適應(yīng)性試驗(yàn)在選定條件下，綠原酸和樣品中其他組分可基線別離，綠原酸與其相鄰色譜峰的別離度大于1.5，理論塔板數(shù)(N)為5000以上。 a-對照品b-供試品 2.2對照品溶液的制備精細(xì)稱取綠原酸對照品適量，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每毫升含35.8μg的溶液，即得。2.3供試品溶液的制備精細(xì)稱取本提取物10mg，置100ml容量瓶中，雙蒸水溶解，超聲2min后，再用雙蒸水定容至刻度，搖勻，過0.45μg微孔濾膜，取續(xù)濾液即得。 2.4線性范圍的考察及其規(guī)范曲線的制作精細(xì)汲取對照品溶液2，4，6，10，14，18μl，別離注入液相色譜儀。按上述色譜條件測定峰面積。以峰面積積分值(A)對進(jìn)樣量進(jìn)行回歸，得回歸曲線方程：Y=2468.4X-16.205，r=0.9996。成果標(biāo)明，綠原酸在0.0716～0.6444μg范圍內(nèi)與峰面積呈杰出的線性關(guān)系。 2.5精細(xì)度試驗(yàn)精細(xì)汲取對照品溶液10μl，按上述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，記載各組綠原酸峰面積值，成果均勻峰面積為：840.5，RSD為0.69%(n=6)。 2.6安穩(wěn)性試驗(yàn)取同一供試品溶液，別離于0，2，4，6，8h進(jìn)樣10μl，測得綠原酸的均勻峰面積值為：680.24，RSD為：0.38%(n=5)，標(biāo)明供試品溶液在8h內(nèi)安穩(wěn)。 2.7重復(fù)性試驗(yàn)取同一批號(070204)樣品6份，按含量測定辦法測定，成果綠原酸均勻含量為28.01%，RSD為1.07%(n=6)。 2.8加樣回收率試驗(yàn)精細(xì)稱取已知含量的金銀花提取物6份，別離精細(xì)增加綠原酸對照品適量，按供試品溶液的辦法制備，測定，核算回收率。 2.9樣品測定取3批樣品，依照上述辦法制備供試品溶液，進(jìn)樣10μl，依照已斷定的色譜條件測定，按峰面積值用外標(biāo)法核算樣品中綠原酸的含量。 3評論 金銀花提取物以有機(jī)酸為有用成分，本試驗(yàn)以綠原酸含量作為金銀花提取物的質(zhì)量操控目標(biāo)，一起測定了3批金銀花提取物中綠原酸的含量，經(jīng)過核算，其含量均在20%以上。本文所樹立的辦法簡潔、方便，重復(fù)性及安穩(wěn)性均較好，可在實(shí)際出產(chǎn)中用于該提取物的質(zhì)量操控。本文所做的工作為開發(fā)金銀花的相關(guān)產(chǎn)品供給了質(zhì)量監(jiān)控辦法。
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