【摘要】 目的觀察二氫楊梅素對戊巴比妥鈉致小鼠催眠作用的影響。方法將小鼠隨機分為二氫楊梅素125 mg/kg組、250 mg/kg組、500 mg/kg組，西咪替丁組和蒸餾水組，觀察二氫楊梅素對戊巴比妥鈉致小鼠催眠作用的影響，并考察其對小鼠中樞的直接作用以及多次給二氫楊梅素后致小鼠催眠作用的影響。結(jié)果二氫楊梅素各劑量組，西咪替丁組和蒸餾水組比較，能顯著延長戊巴比妥鈉致小鼠睡眠時間，縮短潛伏期；二氫楊梅素對小鼠中樞無直接作用。結(jié)論二氫楊梅素可延長戊巴比妥鈉的作用，作用機理可能與抑制細胞色素P450，抑制戊巴比妥鈉的代謝有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】 二氫楊梅素 戊巴比妥鈉 催眠作用 藤茶提取物
Abstract：ObjectiveTo survey the influence of dihydromyricetin ( DMY ) on the hypnotic effects of pentobarbital sodium on mice. MethodsThe mice were randomly divided into DMY 125mg/kg group， DMY 250mg/kg group， DMY 500mg/kg group， Cimetidine group and distilled water group. Effect of drug on mice hypnosis induced by pentobarbital sodium was observed. Effect of drugs on mice central action was also observed. ResultsCompared with the group of distilled water， drugs in the group of DMY 125 mg/kg group， DMY 250 mg/kg group， DMY 500mg/kg group and Cimetidine significantly prolonged the time of falling asleep， shortened the duration of hypnosis induced by pentobarbital sodium in mice respectively. It made clear that dihydromyricetin has not any direct effects on the function of central nervous system. ConclusionDihydromyricetin can increase the effect of Pentobarbital sodium and the mechanism may be related to inhibiting the activity of cytochrome P450 ， decreasing metabolism of pentobarbital sodium.
Key words： Dihydromyricetin; Pentobarbital sodium; Hypnotic effect
二氫楊梅素為（3 ，5 ， 7 ， 3’， 4’， 5’六羥基2， 3雙氫黃酮醇，Dihydromyricetin，DMY，見圖1），又名蛇葡萄素(Ampelopsin)，雙氫楊梅素，二氫楊梅樹皮素。是一種重要的黃酮醇化合物， 存在于葡萄科、楊梅科、杜鵑科、藤黃科、大戟科以及柳科等植物中。在蛇葡萄科植物中大量存在， 其中又以顯齒蛇葡萄幼嫩莖葉(民間稱“藤茶”)中含量最高(可高達24%~31%)［1~3］。研究表明，二氫楊梅素（蛇葡萄素）在體外可顯著抑制人早幼粒白細胞、人鼻咽癌細胞、人乳腺癌細胞的增殖，可抑制黑色素瘤細胞在小鼠體內(nèi)的生長、侵襲和轉(zhuǎn)移，抑制小肺癌細胞在裸鼠體內(nèi)的生長［3］。此外二氫楊梅素（蛇葡萄素）還具有消炎、止咳、祛痰、鎮(zhèn)痛、抑菌、抗高血壓病、降脂、降血糖、護肝、體外抗氧化等作用［1］。而且毒性低［二氫楊梅素小鼠灌胃最大耐受量5 g/kg，腹腔注射半數(shù)致死量LD50為(1.41±0.13)g/kg］［1］。但二氫楊梅素對肝內(nèi)重要的藥物（毒物、致癌物）代謝酶細胞色素P450（cytochrome P-450，CYP）影響的研究未見報道。
已發(fā)現(xiàn)黃酮類化合物：黃酮化合物（flavone）(apigenin洋芹素， baicalein黃芩素等)、黃酮醇（flavonol ）（ myricetin楊梅素，galangin高良姜素， kaempferol山柰素， quercetin槲皮素等）、雙氫黃酮 （flavanone）(naringenin柚皮素等)、flavanol (catechin兒茶素， epicatechin－表兒茶素等 )，這些黃酮類中的大多數(shù)化合物在體外或體內(nèi)均可不同程度地抑制或誘導CYP1A1，CYP1A2，CYP1B1，CYP3A4(大鼠CYP3A1)中一個或多個成員［4~7］。CYP1A1、CYP1B1主要參與環(huán)境污染物如多環(huán)芳基化合物（polycyclic aromatic hydrocarbons， PAHs，如:苯并吡， benzo［a］pyrene），雜環(huán)胺類（heterocyclin amines， HCAs， 如PhIP ， 2amino 1methy6 phenylimidazo ［4，5~6］pyridine ）等毒物或前致癌物的代謝激活或代謝清除［7，8］。多環(huán)芳基化合物黃曲霉毒素B1(aflatoxin B1)經(jīng)CYP1A2 和CYP3A4代謝激活可形成黃曲霉毒素B18，9環(huán)氧化物，可誘發(fā)肝癌、肺癌等，但黃曲霉毒素B1( aflatoxin B1 )經(jīng)CYP1A2 和CYP3A4代謝形成的其他化合物又是黃曲霉毒素B1從體內(nèi)清除的重要途徑［7，8］。此外CYP1A2和CYP3A4還是非常重要的藥物代謝酶，臨床上使用的藥物約50％左右經(jīng)CYP3A4 (大鼠CYP3A1) 代謝。此外，參與藥物代謝的CYP還有CYP2C9，CYP2C19，CYP 2D6等［4~8］。
戊巴比妥鈉為巴比妥類鎮(zhèn)靜催眠藥，劑量由小到大，依次會出現(xiàn)鎮(zhèn)靜、催眠、抗驚厥和抗癲癇及麻醉作用。戊巴比妥鈉由CYP代謝而失去活性，在體內(nèi)由CYP介導經(jīng)過C5 上長鏈基團氧化和N 上的去甲基化過程，當CYP活性被抑制時，則減緩戊巴比妥鈉在肝內(nèi)的羥化(氧化) 過程， 致戊巴比妥鈉在體內(nèi)代謝轉(zhuǎn)化減慢，血藥濃度降低變緩，出現(xiàn)睡眠時間顯著延長［9］。參與戊巴比妥鈉代謝的CYP主要成員是CYP2C，而CYP2C又包括CYP2C8，CYP2C9，CYP2C10，CYP2C19四個亞型［10］。因此我們采用二氫楊梅素與戊巴比妥鈉合用后對小鼠催眠作用的影響，以初步判斷二氫楊梅素是否可以通過誘導或抑制細胞色素P450，從而加速或減慢戊巴比妥鈉的代謝，進而縮短或延長小鼠的睡眠時間，以間接判斷二氫楊梅素是否可以誘導或抑制CYP。
圖 1 二氫楊梅素的化學結(jié)構(gòu)與其同類黃酮化合物的結(jié)構(gòu)比較（略）
1 材料
1.1 動物昆明種小鼠，體重20~30 g，雌雄各半。由廣西壯族自治區(qū)食品藥品檢驗所實驗動物中心（合格證號：SCKX桂2003-0001）和廣西中醫(yī)學院實驗動物中心提供（合格證號：SYXK桂2003-0001）。
1.2 藥品與試劑二氫楊梅素（長沙上禾生物科技有售 規(guī)格：二氫楊梅素98%），西咪替�。◤V東臺城制藥有限公司，批號：20080301），戊巴比妥鈉（廣東臺城制藥有限公司，批號：030415），蒸餾水。
2 方法
2.1 一次給予二氫楊梅素后對戊巴比妥鈉致小鼠催眠作用的影響［11］將小鼠隨機分成4組，每組12或20只。小鼠按125 ，250，500 mg/kg分別灌胃給予二氫楊梅素，陽性藥西咪替丁組按300 mg/kg灌胃給藥，對照組給等體積蒸餾水，2h后分別腹腔注射25，50mg/kg的戊巴比妥鈉，立即觀察并記錄小鼠潛伏期及睡眠時間。
2.2 二氫楊梅素對小鼠中樞直接作用的影響［12］取小鼠分別輕提其尾，將其置于高60 cm的鐵架臺頂端，令其頭朝下沿桿爬行至地面，將不能順利爬至地面而掉落的小鼠淘汰。實驗分組及給藥同上。給藥后30，60，90，120，150及180 min時分別重復上述實驗。密切觀察小鼠給藥前后的自主活動和其他中樞活動異常表現(xiàn)，并記錄各組不能順利爬至地面而從桿上掉落的小鼠數(shù)。
2.3 潛伏期的測定從注射戊巴比妥鈉到小鼠翻正反射消失的時間。
2.4 睡眠期的測定從小鼠翻正反射消失到小鼠醒來的時間。
2.5 睡眠時間變化率的測定給藥組與對照組睡眠時間增加與減少的程度。
2.6 統(tǒng)計學方法 數(shù)據(jù)以±s表示，組間比較進行t檢驗，數(shù)據(jù)采用Microsoft Excel統(tǒng)計軟件進行分析處理。
3 結(jié)果
3.1 一次給予二氫楊梅素后對戊巴比妥鈉致小鼠催眠作用的影響從表1中可以看出，當給小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉25 mg/kg時，給藥組與對照組比較其潛伏期與睡眠時間都無明顯差異，P>0.05；陽性藥西咪替丁組與對照組比較其睡眠時間延長有非常顯著性差異，P<0.01，潛伏期無明顯差異，P>0.05。當給小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉50 mg/kg時，二氫楊梅素125 mg/kg組、250 mg/kg組、500 mg/kg組與對照組比較其睡眠時間延長，有顯著性差異，P<0.05；二氫楊梅素250 mg/kg組、500 mg/kg組與對照組比較其潛伏期縮短，有非常顯著性差異，P<0.01。
表1 一次給予二氫楊梅素后對戊巴比妥鈉致小鼠催眠作用的影響（略）
與對照組比較，*P>0.05; **P<0.05; ***P<0.01
3.2 二氫楊梅素對小鼠中樞直接作用的影響給藥前及給藥后，小鼠自主活動無差異，都沒有出現(xiàn)煩躁不安、鎮(zhèn)靜嗜睡、步履不穩(wěn)、搖搖晃晃等異�，F(xiàn)象，都能順利從竿頂爬至地面，不能順利爬至地面而從桿上掉落的小鼠數(shù)各時段均為0。結(jié)果見表2。
表2 二氫楊梅素對小鼠中樞直接作用的影響（略）
4 討論
戊巴比妥鈉主要由細胞色素P450（Cytochrome P450， CYP） 代謝而滅活，少量以藥物原形經(jīng)腎排泄，故睡眠時間的長短反映了戊巴比妥鈉在體內(nèi)代謝速度的慢或快，對其催眠作用的影響可以間接反映藥物對CYP的影響。但是藥物的中樞抑制或興奮作用也可能延長或縮短戊巴比妥鈉的睡眠時間。由表1 可知二氫楊梅素能使戊巴比妥鈉致小鼠睡眠時間顯著延長，可能是二氫楊梅素對小鼠CYP抑制的結(jié)果，而不是中樞作用。由表2可知給藥前及給藥后，小鼠活動狀態(tài)沒有明顯變化并且全部能順利從桿頂爬至地面，表明藥物對小鼠中樞的直接作用沒有影響，沒有鎮(zhèn)靜催眠的效果，說明二氫楊梅素能顯著延長戊巴比妥鈉致小鼠睡眠時間的原因確實是抑制CYP。西咪替丁是典型的CYP抑制劑，二氫楊梅素雖然對 CYP有抑制作用，但從表1中可以得出其效果不如西咪替丁。
由實驗結(jié)果可知，藤茶提取物二氫楊梅素能使戊巴比妥鈉致小鼠睡眠時間顯著延長，是細胞色素P450的抑制劑，對小鼠中樞的直接作用沒有影響，沒有鎮(zhèn)靜催眠的效果。
相關(guān)產(chǎn)品鏈接：二氫楊梅素（藤茶提取物）
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二氫楊梅素對戊巴比妥鈉致小鼠催眠作用的影響 
