熊果酸抗氧化性能的研究 | 熊果酸抗氧化性能的研究 |
| 發(fā)布時(shí)間:2010-08-06 信息來(lái)源:admin 發(fā)布人:admin 點(diǎn)擊次數(shù):2700 |
熊果酸(Ursolic Acid)義名烏索酸，是一類(lèi)五環(huán)三萜類(lèi)化合物，其廣泛存存于山楂、女貞子、白舌草、夏枯草、車(chē)前草、苦丁茶等多種天然植物巾，來(lái)源十分廣泛。近幾年的研究中發(fā)現(xiàn)，熊果酸具有多種生物活性，其在抗癌、防癌、保肝、抗菌、抗病毒、抗氧化以及降血壓、降血脂、降血糖等方面均有廣泛的應(yīng)用，展現(xiàn)出良好的開(kāi)發(fā)利用前景。但是存國(guó)內(nèi)對(duì)于熊果酸的抗氧化性能的研究卻尚未見(jiàn)到。因此，本實(shí)驗(yàn)針對(duì)熊果酸的抗氧化性進(jìn)行了初步研究，為進(jìn)一步研究熊果酸的抗氧化劑打下基礎(chǔ)。 1 材料與方法 1.1 材料與儀器 熊果酸標(biāo)準(zhǔn)品、維生素C標(biāo)準(zhǔn)品由Sigma公司提供；KHPO-KH PO4緩沖液50mmoL／L，pH8.3；鄰苯酚的鹽酸溶液 50mmol／L；H2O2 8.8minol／L；FeSO、水楊酸一乙醇溶液9mmo]／L；所有試劑均為分析純；甘露醇，雙蒸水，甲醇。紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(北京普析通用有限公司)；HH-8數(shù)恒溫水浴鍋(江蘇省金壇市榮華儀器制造)；PHS-3C數(shù)顯酸度計(jì)(上�？祪x儀器有限公司)。 熊果酸對(duì)照品長(zhǎng)沙上禾生物科技有限公司可提供。 1.2 實(shí)驗(yàn)方法 1.2.1 熊果酸對(duì)超氧陰離子自由基(0 ·)的清除實(shí)驗(yàn) 本實(shí)驗(yàn)采用鄰苯三酚白氧化法，即采用鄰苯酚自氧化法產(chǎn)生超氧陰離子，生成有色中間產(chǎn)物，吸光度隨之增加，使吸光度值與反應(yīng)時(shí)間呈良好的線性關(guān)系。但是加入抗氧化性物質(zhì)后會(huì)對(duì)其產(chǎn)生清除作用，從而對(duì)其進(jìn)行抗氧化性能的評(píng)價(jià),取試管加入不同濃度的熊果酸溶液(5mg/1OraL)各50、100、 20L以及200進(jìn)行陽(yáng)性對(duì)照，同時(shí)分別取相同體積的甲醇做對(duì)照。在試管中分別加入50retool/L， pH8.3 K，HPO –KH2PO 緩沖液4.5mL，在25℃ 水浴 鍋保溫lOmin，加人預(yù)熱至25℃ 的50mmol/L鄰苯三酚的鹽酸溶液10mL迅速搖勻，傾入1 cm 的比色杯 中，以緩沖液調(diào)零，在325nm 處，每隔30s測(cè)吸光度1 次，連續(xù)測(cè)定15min。樣品對(duì)0 ·自由基的清除率 (％ )的計(jì)算公式如下： 清除率I(％ )：[1-(A3-A )/(A1-A )]×100％ 其中：A ：不含樣品的吸光度值；A ：不含樣品和 鄰苯三酚的吸光度值；A ：含有樣品的吸光度值；A ： 含樣品，但不含鄰苯三酚的吸光度值。 1.2.2熊果酸對(duì)羥自由基(·OH)的清除實(shí)驗(yàn) 本實(shí)驗(yàn)采用Feton體系法產(chǎn)生羥自由基，即：H 0：+ Fe” -·OH + H，O + Fe“ 。然后在體系rf1加入水楊酸捕捉羥自由基并產(chǎn)生有色物質(zhì)，該物質(zhì)在510nm處有最大吸收，可以利用該吸光度值來(lái)表示羥自由基的含量 。取不同的試管分別加入0.5m g/mL熊 果酸標(biāo)準(zhǔn)品各50、100、200以及200甘露醇作為陽(yáng)性對(duì)照。再分別加入1 mL 9mmol/L水楊酸一乙 醇溶液，1mL 9mrnol/L FeSO4，1 rnI 8．8mmoL/L H2O2，用雙蒸水補(bǔ)齊至5mL，充分搖勻，迅速倒入1 cm 的比色杯中,于510nm 處測(cè)定其吸光度值，以甲醇調(diào)零�？梢愿鶕�(jù)吸光度值判斷樣品對(duì)羥自由基的清除作用，其清除率I(％ )計(jì)算公式如下： 清除率I(％)=[A。-(A -Ax。)]/A�！�100％ 其中：An為空白對(duì)照液的吸光度，A 為加入待 測(cè)溶液后的吸光度，A 為待測(cè)溶液的本底吸收值。 即以待測(cè)溶液和1mI 甲醇，lmL FeSO 和 1mL 水楊酸-乙醇溶液作為待測(cè)溶液的本 底吸收值。其中H 0 要在加入清除劑之后加入，以 使Feton體系產(chǎn)生的羥白南基被完全或部分清除 ， 以利于總反應(yīng)的進(jìn)行。 2 結(jié)果與分析 2.1 熊果酸對(duì)超氧陰離子自由基(O ·)的清除 能力 鄰苯三酚在堿性條件下能發(fā)生自氧化，生成有色中間產(chǎn)物和0·。當(dāng)有自由基清除劑存在時(shí)，有色產(chǎn)物的生成量減少，可測(cè)定該自由基清除劑的活性。本實(shí)驗(yàn)研究比較了不同濃度熊果酸標(biāo)準(zhǔn)品與V 對(duì)0·的清除效果。熊果酸對(duì)o2-·具有較強(qiáng)的清除作 用，在一定的濃度下濃度與清除效果呈正相關(guān)。且 存20 g/mL時(shí)清除能力最強(qiáng)，可達(dá)88.42％ ，但是對(duì) 超氧陰離子的清除能力不及相同濃度下的v 。 2.2 熊果酸對(duì)羥自由基(·OH)的清除能力 本實(shí)驗(yàn)采用Feton體系法產(chǎn)生羥自由基，加入水 楊酸捕捉·OH并產(chǎn)生有色物質(zhì)，因此可以利用該吸 光度值來(lái)表示·OH 的含量。但是隨著自由基清除劑的加入，有色產(chǎn)物的生成量減少，可測(cè)定該自由基 清除劑的活性，本實(shí)驗(yàn)比較了不同濃度熊果酸(5、10、20 g/mL)和甘露醇(20mg/mL)對(duì)羥自由基的清除作用，熊果酸對(duì)羥自由基有一定的清除作用，且在20mg／mL時(shí)清除作用最強(qiáng)，可達(dá) 86.35％ ，同時(shí)也可以看出，同濃度下熊果酸對(duì)羥自由基的清除作用要強(qiáng)于甘露醇。 3 討 論 近年來(lái)，世界上掀起了植物藥開(kāi)發(fā)的熱潮，植物藥以其天然、低毒、易于提取的特點(diǎn)被廣泛關(guān)注 ，而熊果酸以其廣譜的生理活性備受矚目，其廣泛存在于白花蛇舌草、女貞子、烏梅、夏枯草等天然植物中，利于開(kāi)發(fā)。目前，相關(guān)文獻(xiàn)表明熊果酸具有抗氧化性 ，但是國(guó)內(nèi)并沒(méi)有相關(guān)的抗氧化性實(shí)驗(yàn)研究。因 此本實(shí)驗(yàn)對(duì)熊果酸的抗氧化性進(jìn)行了探討。 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，熊果酸具有較強(qiáng)的抗氧化性，在20 g/mL時(shí)對(duì)超氧陰離子和羥自由基的清除率即 可達(dá)88.42％和86.35％ 。同時(shí)，對(duì)羥自由基的清除作 用強(qiáng)于同濃度的甘露醇。因此，熊果酸具有廣泛的 開(kāi)發(fā)和利用價(jià)值，在美容化妝產(chǎn)品領(lǐng)域具有廣泛的前景，值得綜合利用，加強(qiáng)資源開(kāi)發(fā)，帶來(lái)美容行業(yè) 新的明天。 |
