溪黃草中熊果酸含量測定方法學(xué)研究
溪黃草為唇形科植物線紋香茶菜Isodon lophanthoides(Buch.-Ham.exD.Don)H.Hara．的干燥全草。具有清熱利濕、退黃祛濕、涼血散瘀的功效，用于治療急性黃疸型肝炎、急性膽囊炎、痢疾、腸炎等病癥，是我國南方地區(qū)治療乙型肝炎的常用草藥。溪黃草是名優(yōu)產(chǎn)品消炎利膽片的原料藥材之一，市場上溪黃草商品正品很少，多為民間稱“副溪黃”或“苦溪黃”的混淆品。本文采用HPLC法測定溪黃草藥材熊果酸的含量，并對該方法進行了方法學(xué)驗證。
關(guān)鍵詞：熊果酸 HPLC 熊果酸檢測方法 溪黃草
1 儀器與試劑
1.1 儀器
Dionex SUMMIT P680高效液相色譜儀、十萬分之一電子天平；萬分之一電子天平、索氏提取器。
1.2 試藥
溪黃草共有l(wèi)0批次，自編批號為索氏提取器01～l0；熊果酸對照品；甲醇為色譜純；水為重蒸水；其他試劑為分析純。熊果酸（長沙上禾生物科技有售：熊果酸25-98%）
2方法與結(jié)果
2.1 色譜條件
色譜柱：Phenomenex Kromasil C18(4.6mm×250mm; 5um) 柱；檢測波長：210nm，流速：0.5mL/min。
2.2 流動相的選擇
經(jīng)摸索以0.1％磷酸溶液-甲醇(10：90)為流動相，流速為 0.5mL/min，供試品中的熊果酸達到與其他峰分離度較好，峰形對稱，保留時間適中(約26min)。
2.3 對照品溶液的制備
精密稱取熊果酸對照品適量，加甲醇制成每1mL含30 g的溶液，即得。
2.4 供試品溶液的制備
取溪黃草藥材粉末(過40目篩)約1g，精密稱定，置索氏提取器中，加乙醚50mL，提取5h，提取液揮干，殘渣用甲醇分次溶解，轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。
2.5 線性關(guān)系的考察
以熊果酸對照品溶液(29.5g/mL)分別進樣2uL 、5uL、lO uL、20 uL、30 uL、40 uL，按含量測定方法，以峰面積為橫坐標x，熊果酸進樣量(g)為縱坐標Y，繪制標準曲線，得到回歸方程：Y=0.0625X+0.O119，r=O.9999。結(jié)果表明熊果酸在0.059～1.18 g的范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。
2.6 精密度試驗
精密吸取同一對照品溶液10uL，注入液相色譜儀，重復(fù)測定 6次，計算精密度，RSD=0．38％，表明儀器精密度良好。
2.7 穩(wěn)定性試驗
取同一批樣品，按供試品制備方法制備供試品溶液，自制備后，于0、2、4、6、8、12h分別進樣10 uL，測定其峰面積，結(jié)果其 RSD=1.5％。結(jié)果表明供試品溶液在12h內(nèi)基本穩(wěn)定。
2.8 重復(fù)性試驗
取同一批樣品，按供試品制備方法制備6份供試品溶液，按含量測定方法操作，結(jié)果平均含量為0.228mg/g，RSD=2.6％。結(jié)果表明本含量測定方法重復(fù)性良好。
2.9 回收率試驗
取同批已知熊果酸含量的供試品(熊果酸含量0.228mg/g)共 6份，每份取樣量為供試品取樣量(1g)的50％，精密稱定。按當(dāng)前取樣含量約1：1精密加入熊果酸對照品(30.2 g/mL×5mL)，按含量測定方法測定，計算回收率。結(jié)果熊果酸平均回收率為102.5％,RSD=2.1％。
2.10 樣品含量測定
取溪黃草藥材10批，按含量測定方法測定，按干燥品計算，l0批溪黃草藥材的平均含量為0.61mg/g，最高達0.923mg/g，但最低僅為0.252mg/g。結(jié)果表明，不同產(chǎn)地不同批次的溪黃草藥材其熊果酸含量差異較大。
3 討論
本實驗建立了HPLC測定溪黃草藥材中熊果酸的色譜條件，并對該測定方法進行了方法驗證。方法學(xué)考察結(jié)果表明，該法線性關(guān)系良好，回收率、精密度高，重復(fù)性良好，具有準確、靈敏的特點，可作為溪黃草藥材質(zhì)量控制與評價的方法之一。
相關(guān)產(chǎn)品鏈接：
杜仲提取物 綠原酸 金銀花提取物 大花紫薇提取物-科羅索酸 枇杷葉提取物-熊果酸 苦杏仁苷
淫羊藿苷
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