雙黃連顆粒中綠原酸含量的HPLC測定 | 雙黃連顆粒中綠原酸含量的HPLC測定 |
| 發(fā)布時(shí)間:2010-08-12 信息來源:admin 發(fā)布人:admin 點(diǎn)擊次數(shù):2822 |
【摘要】 目的 采用高效液相色譜法測定雙黃連顆粒中綠原酸的含量。方法 用外標(biāo)一點(diǎn)法,Diamonsil ODS1 C18色譜柱,甲醇-水-冰醋酸(15∶85∶1)為流動(dòng)相,流速為1.0 mL/min,λ＝324 nm。結(jié)果 綠原酸在0.060～1.210 μg范圍內(nèi)呈良好線性,回歸方程為Y＝105 427X＋586.43,r2＝0.999 5,平均加樣回收率為99.3%,RSD＝0.82%(n＝6)。結(jié)論 本方法簡便、準(zhǔn)確,專屬性強(qiáng),測定結(jié)果重復(fù)性好,為雙黃連顆粒中綠原酸的定量分析提供了科學(xué)有效的方法。 【關(guān)鍵詞】 雙黃連顆粒；綠原酸；高效液相色譜法；含量測定 中圖分類號：R284.1 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1005-5304(2010)04-0043-02 Determination of Chlorogenic Acid in Shuanghuanglian Keli by HPLC ZHANG Hong-tao, CAI Jun-an, GUO Xin-hui (Henan Bainian Kangxin Pharmaceutical Co. Ltd, Dancheng 477150, China) Abstract：Objective To establish the method for detemining the content of chlorogenic acid in Shuanghuanglian Keli by HPLC. Methods Using Diamonsil ODS1 C18 column, with methanol-water-glacial acetic acid (15∶85∶1) as the mobile phase, detection wavelength as 324 nm and flow rate was 1.0 mL/min. Results The calibration curve was linear at the range of 0.060～1.210 μg for chlorogenic acid and the equation was Y＝105 427X＋586.43, r2＝0.999 5. The average recovery was 99.3% and RSD was 0.82% (n＝6). Conclusion This method was simple, accurate and proper, and the reduplication of the result was good, which provide scientific quantitative analysis method of chlorogenic acid in Shuanghuanglian Keli. Key words：Shuanghuanglian Keli；chlorogenic acid；HPLC；content determination
雙黃連顆粒收載于2005年版《中華人民共和國藥典》(一部)[1],處方由金銀花、黃芩、連翹組成,功能疏風(fēng)解表、清熱解毒,用于外感風(fēng)熱所致的感冒。金銀花為方中君藥。原標(biāo)準(zhǔn)中只收載了黃芩的含量測定方法,沒有君藥金銀花的成分含量測定方法,因此,不能有效和全面地控制藥品質(zhì)量。為了更好地控制雙黃連顆粒的質(zhì)量,提高雙黃連顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn),我們參照2005年版《中華人民共和國藥典》(一部)中收載的雙黃連片,采用高效液相色譜(HPLC)法對金銀花的主要成分綠原酸進(jìn)行了含量測定,并進(jìn)行了方法學(xué)研究。現(xiàn)報(bào)道如下。 1 儀器與試藥 高效液相色譜儀：SPD-10A日本島津；紫外分光儀：上�？祷瘍x器制造廠；超聲波清洗器：SK3200H上�？茖�(dǎo)超聲儀器有限公司。 綠原酸對照品由中國藥品生物制品檢定所提供(批號110753-200413,供含量測定用)；雙黃連顆粒由河南百年康鑫藥業(yè)有限公司提供(批號20081101、20081102、20081103)。其他試劑均為分析純。 2 方法與結(jié)果 2.1 色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑,以甲醇-水-冰醋酸(15∶85∶1)為流動(dòng)相,流速為1.0 mL/min,檢測波長為324 nm。理論塔板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算應(yīng)不低于6 000[1]。 2.2 溶液的制備 2.2.1 對照品溶液的制備 取綠原酸對照品適量,精密稱定,置于棕色量瓶中,加50%甲醇制成每1 mL含60 μL的溶液,即得對照品溶液。 2.2.2 供試品溶液的制備 取裝量差異項(xiàng)下的本品,研細(xì),取約0.4 g,精密稱定,置于50 mL的量瓶中,加50%甲醇適量,超聲處理(功率135 W,頻率59 kHz)20 min。放置至室溫,加50%甲醇至刻度,搖勻,濾過,精密量取續(xù)濾液2 mL,置10 mL量瓶中,加50%甲醇至刻度,搖勻,濾過,取續(xù)濾液,即得供試品溶液。 2.2.3 陰性樣品的測試 取缺金銀花的樣品,按供試品制備方法制備陰性樣品后測定,在綠原酸相應(yīng)位置無峰出現(xiàn),說明陰性樣品的其他成分無干擾。色譜圖見圖1。圖1雙黃連顆粒HPLC圖譜 注：A.對照品；B.供試品；C.陰性樣品 2.3 線性關(guān)系的考察 取同一對照品溶液(60.51 μg/mL),分別精密吸取1、2.5、5、10、20 μL注入液相色譜儀,測定峰面積。以峰面積積分值為縱坐標(biāo),綠原酸對照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,計(jì)算回歸方程為：Y＝105 427X＋586.43,r2＝0.999 5,表明綠原酸在0.060～1.210 μg之間呈良好的線性關(guān)系。 2.4 精密度試驗(yàn) 取同一對照品溶液,重復(fù)進(jìn)樣6次,每次進(jìn)樣10 μL,測定綠原酸峰面積,結(jié)果RSD＝0.14%,表明精密度良好。 2.5 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(批號20081101)供試品,按供試品溶液制備方法制備5份供試液,依法測定每份樣品中綠原酸的含量。結(jié)果RSD＝1.18%,表明本法重復(fù)性良好。 2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批號(批號20081101)供試品,按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,分別在0、2、4、6、8 h測定峰面積,RSD＝0.76%(n＝5)。表明制備的供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。 2.7 加樣回收率試驗(yàn) 采用加樣回收法。精密稱取已知含量的同一批樣品(批號20081101,含量為5.217 mg/g)0.2 g,置50 mL量瓶中,分別精密加入綠原酸對照品溶液(0.375 mg/mL)各3 mL,蒸干,按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試液,照上述色譜條件測定。分別進(jìn)樣10 μL,測定綠原酸峰面積并計(jì)算綠原酸含量(見表1) 表1加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果,結(jié)果平均回收率為99.3%,RSD＝0.82%(n＝6)。 2.8 樣品測定 對3批中試產(chǎn)品進(jìn)行測定,結(jié)果見表2。表2樣品測定結(jié)果 3 討論 根據(jù)3批測定結(jié)果,每1 g含金銀花以綠原酸(C16H18O9)計(jì)均不少于5.0 mg,考慮到藥材產(chǎn)地、加工、運(yùn)輸、貯藏等因素的影響,藥材中綠原酸也會有較大的差別,因此暫規(guī)定本品每1 g含金銀花以綠原酸(C16H18O9)計(jì),不得少于4.5 mg。 為了保證供試品中綠原酸提取完全,本試驗(yàn)對供試品超聲處理時(shí)間進(jìn)行了考察,分別超聲處理10、20、30 min進(jìn)行測定,測得樣品中對應(yīng)的綠原酸含量分別為4.56、5.18、5.20 mg/g,結(jié)果表明,超聲處理20 min與30 min含量變化不大,從節(jié)約能源考慮,規(guī)定超聲處理20 min為提取時(shí)間。 本研究采用HPLC法對雙黃連顆粒中綠原酸進(jìn)行含量測定,試驗(yàn)結(jié)果表明,所建立的方法穩(wěn)定、準(zhǔn)確、可行,能有效控制雙黃連顆粒的內(nèi)在質(zhì)量,確保臨床療效。 【參考文獻(xiàn)】
相關(guān)產(chǎn)品鏈接： |
