高效液相色譜法測(cè)定熱毒平顆粒中綠原酸的含量 | 高效液相色譜法測(cè)定熱毒平顆粒中綠原酸的含量 |
| 發(fā)布時(shí)間:2010-08-14 信息來(lái)源:admin 發(fā)布人:admin 點(diǎn)擊次數(shù):2111 |
【摘要】 目的 建立以高效液相色譜法測(cè)定熱毒平顆粒中綠原酸含量的方法。方法 色譜柱為YMC公司ODS-A柱(150 mm×4.6 mm,5 μm)；流動(dòng)相為乙腈-0.2%磷酸水溶液(10∶90),流速為1.0 mL/min,檢測(cè)波長(zhǎng)為327 nm。結(jié)果 綠原酸的檢測(cè)濃度在0.084 8～0.848 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系(r＝0.999 9)；平均回收率為102.60%,RSD＝1.69%(n＝6)。結(jié)論 本法簡(jiǎn)便、快速,可用于熱毒平顆粒的質(zhì)量控制。 【關(guān)鍵詞】 熱毒平顆粒；綠原酸；高效液相色譜法；含量測(cè)定 Determination of Chlorogenic Acid in Reduping Keli by HPLC LI Ping, GAO Song, CHEN Yu-jie, et al 1.Hebei University of Technology, Tianjin 300130, China；2.Tianjin Longshunrong Pharmaceutical Factory of Zhongxin Pharmaceuticals, Tianjin 300457, China Abstract：Objective To establish an HPLC method for the determination of Chlorogenic acid in Reduping Keli. Methods The determination was performed by HPLC using an YMC ODS-A column (150 mm×4.6 mm, 5 μm), with mobile phase consisted of acetonitrile-0.2%H3PO4 solution (10∶90) at a flow rate of 1.0 mL/min and a detection wavelength of 327 nm. Results The calibration curve for Chlorogenic acid was linear in the concentration range of 0.008 5～0.084 8 mg/mL (r＝0.999 9). The average recovery was 102.60 % (RSD＝1.69%, n＝6). Conclusion The method is simple, rapid and applicable for the quality control of Reduping Keli. Key words：Reduping Keli；Chlorogenic acid；HPLC；content determination 熱毒平顆粒由金銀花、生石膏、玄參、地黃等中藥制成,具有清熱解毒之功效,用于治療流感、上呼吸道感染及各種發(fā)熱等癥[1]。綠原酸為該制劑主藥金銀花的主要有效成分,具有明顯的抗炎、殺菌、抗病毒的作用[2]。筆者采用高效液相色譜(HPLC)法測(cè)定該制劑中綠原酸的含量,方法簡(jiǎn)便、快速,可用于熱毒平顆粒的質(zhì)量控制。 1 儀器與試藥 SP8800高效液相色譜儀(美國(guó)光譜物理公司)；分析之星色譜工作站；紫外FOCUS檢測(cè)器。綠原酸對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所,批號(hào)110753-200413)；熱毒平顆粒(天津中新藥業(yè)隆順榕制藥廠,批號(hào)0602001、0602002、0602003)。乙腈為色譜純,磷酸為分析純,水為純凈水。 2 方法與結(jié)果 2.1 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 色譜柱：YMC公司ODS-A柱(150 mm×4.6 mm,5 μm)；流動(dòng)相：乙腈-0.2%磷酸水溶液(10∶90)；流速：1.0 mL/min；柱溫：室溫；檢測(cè)波長(zhǎng)：327 nm；進(jìn)樣量：10 μL。理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)應(yīng)不低于3 000,分離度＞1.5。色譜圖見(jiàn)圖1。 2.2 溶液的制備 2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取綠原酸對(duì)照品4.24 mg,置于50 mL量瓶中,加50%甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,配成濃度為0.084 8 mg/mL的對(duì)照品儲(chǔ)備溶液,10 ℃以下保存。再精密量取4 mL置10 mL量瓶中,加50%甲醇溶解并稀釋至刻度,制成含綠原酸0.033 9 mg/mL的對(duì)照品溶液。
2.2.2 供試品溶液的制備 2.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備 按處方取除金銀花的各味藥材,按制法制得樣品,再按“2.2.2”項(xiàng)下方法,制得陰性對(duì)照溶液。 2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立 精密吸取綠原酸濃度為0.084 8 mg/mL的對(duì)照品儲(chǔ)備溶液1、2、4、8、10 mL,置10 mL量瓶中,加50%甲醇稀釋至刻度,搖勻,在上述色譜條件下測(cè)定,以峰面積對(duì)濃度進(jìn)行線性回歸,得回歸方程為：Y＝55 799 416X－28 478.3(r＝0.999 9)。結(jié)果表明,綠原酸檢測(cè)濃度在0.084 8～0.848 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系。 2.4 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液10 μL,按上述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次,測(cè)定峰面積。結(jié)果RSD＝0.52%,表明本方法精密度良好。 2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批號(hào)(0602001)樣品,按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,按上述色譜條件分別在0、1、2、4、6、8 h進(jìn)樣,測(cè)定綠原酸峰面積。結(jié)果RSD＝0.64%,表明供試品溶液在8 h之內(nèi)穩(wěn)定。 2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)(0602001)樣品精密稱取0.5 g,共6份,按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,按上述色譜條件測(cè)定每份樣品中綠原酸含量。結(jié)果綠原酸的平均含量為1.190 mg/g, RSD＝0.88%,表明方法重復(fù)性良好。 2.7 加樣回收率試驗(yàn)
精密稱取綠原酸對(duì)照品適量,配制成0.012 4 mg/mL的對(duì)照品儲(chǔ)備溶液,取同一批號(hào)(0602001)樣品,研細(xì),混勻,取0.25 g,精密稱定,共6份,精密加入綠原酸對(duì)照品儲(chǔ)備溶液各25 mL,按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制得供回收率用供試品溶液,按上述色譜條件測(cè)定,計(jì)算回收率。結(jié)果平均回收率為102.60%, RSD＝1.69%。結(jié)果見(jiàn)表1。表1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果(略) 取本品3批,按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果見(jiàn)表2。表2 樣品中綠原酸含量測(cè)定結(jié)果(略) 3 討論
取綠原酸對(duì)照品的甲醇溶液,在190～650 nm波長(zhǎng)范圍進(jìn)行掃描,在327 nm波長(zhǎng)處有較大吸收,與2005年版《中華人民共和國(guó)藥典》中金銀花的測(cè)定波長(zhǎng)一致,故測(cè)定波長(zhǎng)選定為327 nm。
【參考文獻(xiàn)】
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