熊果酸ursolie acid含量測定方法研究進(jìn)展
熊果酸（ursolie acid，UA）又名烏索酸、烏蘇酸，屬于三萜類化合物，廣泛存在于熊果、白花蛇舌草、女貞子、烏梅等天然植物和草藥中，具有抗炎、護(hù)肝、降血脂等多種生物學(xué)活性［1～4］。目前許多中藥材及其制劑常選用熊果酸的含量作為其質(zhì)量控制指標(biāo)。本文對(duì)熊果酸含量測定方法的研究進(jìn)展綜述如下。
【關(guān)鍵詞】 熊果酸； 含量測定方法 上禾生物 ursolie acid
1 分光光度法
李國章等［5］建立了湘產(chǎn)3種苦丁茶中熊果酸含量測定的分光光度法，具體操作是取苦丁茶經(jīng)索氏提取器提取后，加入5%香草醛－冰醋酸、高氯酸顯色，在波長548 nm處測定吸光度，結(jié)果熊果酸在4～20 μg·ml-1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，加樣回收率為98.96%。羅啟劍等［6］采用同樣方法測定了連錢草中熊果酸含量，結(jié)果熊果酸在0～18 μg·ml-1濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，加樣回收率為100.64%。
2 薄層掃描法
白潔等［7］采用雙波長薄層掃描法測定了夏枯草中熊果酸的含量，具體操作為取夏枯草藥材粗粉經(jīng)95％乙醇超聲提取兩次，濾液用70℃水浴蒸干，殘?jiān)檬兔呀輧纱�，揮干溶劑，用95％乙醇溶解后測定。采用硅膠G板，以環(huán)己烷－氯仿－醋酸乙酯（20∶5∶8）為展開劑，用10％硫酸乙醇溶液顯色，選用λS=540 nm，λR=700 nm進(jìn)行雙波長反射式鋸齒掃描，結(jié)果熊果酸在0.314～1.570 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，加樣回收率為99.3％。張軍等［8］建立了狼瘡靜顆粒中熊果酸的薄層掃描法測定方法，具體操作為取狼瘡靜顆粒用乙醚萃取3次，合并乙醚萃取液水浴蒸干乙醚，殘留物加無水乙醇－氯仿（3∶2）混合液溶解后測定，以環(huán)己烷－氯仿－醋酸乙酯－甲酸（20∶5∶8）為展開劑，用10％的硫酸乙醇液顯色，以λS=520 nm，λR=700 nm進(jìn)行雙波長薄層掃描，結(jié)果熊果酸在0.498～3.084 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，加樣回收率為97.91％。
3 高效液相色譜法
3.1 HPLC－UV法戚志華等［9］采用HPLC法測定了陜西女貞子中熊果酸的含量，其方法為取女貞子粉末經(jīng)超聲提取后采用HPLC法，選用Lichrospher C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱，流動(dòng)相為乙腈－甲醇－水－磷酸－三乙胺（50∶30∶20∶0.02∶0．04），流速1 ml·min-1，測定波長為205 nm，結(jié)果熊果酸在20.48～102.4 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，加樣回收率為100.6％。梁潔等［10］采用HPLC法測定了廣西產(chǎn)美味獼猴桃根中熊果酸的含量，具體操作為取美味獼猴桃根粗粉經(jīng)超聲提取后測定，選用Thermo Hypersil BDS C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動(dòng)相為乙腈－0.1％ 磷酸水溶液（85∶15），流速1.0 ml·min-1，檢測波長210 nm，結(jié)果該方法熊果酸線性范圍為12.5～150 μg·ml-1，平均回收率為99.35％。
3.2 HPLC－ELSD法趙永席等［11］建立了高效液相色譜－蒸發(fā)光散射檢測法（HPLC－ELSD）測定山茱萸中熊果酸的含量，具體操作為取山茱萸經(jīng)索氏提取后采用Phenomenex C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱，流動(dòng)相為甲醇－0.5％冰醋酸水溶液（87:13），流速0.8 ml·min-1，蒸發(fā)光散射檢測器漂移管溫度65℃，載氣（N2）流速2.0L·min-1，結(jié)果熊果酸在1.16～3.48 μg范圍內(nèi)時(shí)線性關(guān)系良好，平均回收率為97.5％。趙宇新等［12］建立了HPLC－ELSD法測定中藥飲片木瓜及中成藥制劑知柏地黃丸中熊果酸的含量，其操作為去樣品經(jīng)提取后采用Kromasil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色譜柱，柱溫40℃，甲醇－水－冰醋酸（260∶40∶0.15）為流動(dòng)相，流速0.6 ml·min-1，漂移管溫度85℃，氣體流速2.60 L·min-1，結(jié)果熊果酸在0.380～1.90 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，熊果酸的回收率分別為99.8％。
3.3 HPLC－MS法楊宜華等［13］采用液質(zhì)連用法測定了白花蛇舌草中熊果酸含量，其操作為取樣品經(jīng)超聲提取后選用Hypersil ODS C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱，流動(dòng)相甲醇－0.05％冰醋酸（75∶25），二極管陣列檢測器，流速0.2 ml·min-1，柱溫45℃，質(zhì)譜采用大氣壓化學(xué)離子化探頭，選擇性離子流模式（正離子），APCI400℃，CDL250℃，BLOCK 250℃，結(jié)果熊果酸在20.4～163.2 μg·ml-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，加樣回收率為100.78％。
4 氣相色譜法
黃建林等［14］建立了測定番石榴葉中熊果酸的氣相色譜－質(zhì)譜（GC－MS）方法，具體操作為取樣品經(jīng)微波萃取后以雙（三甲硅烷）三氟乙酰胺（BSTFA）為衍生化試劑，將熊果酸制成三甲基硅烷衍生物后，在DB－5 MS毛細(xì)管柱上進(jìn)行分離，柱升溫程序?yàn)椋褐鯗?00℃，恒溫保持2 min，以每分鐘10℃的速度升溫至300℃，保持14 min，通過與標(biāo)準(zhǔn)樣品對(duì)照比較保留時(shí)間和質(zhì)譜確認(rèn)樣品中熊果酸的色譜峰，以峰面積進(jìn)行定量測定，結(jié)果熊果酸在4.7～114 μg·ml-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回收率為89.4%。
5 高效毛細(xì)管電泳法
遲道兵等［15］建立了高效毛細(xì)管電泳（HPCE）法測定山茱萸中熊果酸含量的方法，其操作為取樣品經(jīng)索氏提取后以15 mmol·L-1磷酸氫二鈉（Na2HPO4）－15 mmol·L-1硼砂（Na2B4O7）（pH9.22）、含10%甲醇（V/V）的緩沖體系作為運(yùn)行電解質(zhì)溶液，檢測波長214 nm，分離電壓20.0 kV進(jìn)行分離檢測，結(jié)果熊果酸在0.57～0.95 mg·ml-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均加樣回收率為97.43%。張鋒等［16］采用毛細(xì)管電泳高頻電導(dǎo)法測定了夏枯草中熊果酸的含量，其方法為取樣品經(jīng)索氏提取后以布洛芬為內(nèi)標(biāo)，采用毛細(xì)管區(qū)帶電泳，高頻電導(dǎo)檢測，未涂層彈性融硅石英毛細(xì)管柱（55 cm×75 μm ID，有效長度46cm），1.2 mmol·L-1三乙胺－HCl（pH=10.60），β-環(huán)糊精（0.08 mmol·L-1）為運(yùn)行緩沖液，分離電壓12.5 kV，重力進(jìn)樣10 s（高度20 cm），結(jié)果熊果酸在4.3～120.4 μg·ml-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，加樣回收率分別為98.2％。
6 其他
熊果酸的含量測定除以上幾種方法外，文獻(xiàn)報(bào)道的還有β-環(huán)糊精增敏熒光法［17］、近紅外光譜法［18］和毛細(xì)管膠束電動(dòng)色譜法［19］等，但這些方法往往因?yàn)闂l件限制或準(zhǔn)確度不夠高等原因而使用率較低。
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相關(guān)產(chǎn)品鏈接：
杜仲提取物 綠原酸 金銀花提取物 大花紫薇提取物-科羅索酸 枇杷葉提取物-熊果酸 苦杏仁苷
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