杜仲葉片生長(zhǎng)與綠原酸含量變化關(guān)系研究 | 杜仲葉片生長(zhǎng)與綠原酸含量變化關(guān)系研究 |
| 發(fā)布時(shí)間:2010-08-20 信息來(lái)源:admin 發(fā)布人:admin 點(diǎn)擊次數(shù):2357 |
【摘要】 目的探討杜仲葉結(jié)構(gòu)發(fā)育與綠原酸積累的關(guān)系。方法用高效液相色譜法測(cè)定了不同發(fā)育時(shí)期杜仲葉中綠原酸的含量，用石蠟切片法研究了杜仲葉的結(jié)構(gòu)發(fā)育。結(jié)果在豫北地區(qū)，3月中旬杜仲葉萌動(dòng)，4月上旬葉片分化完成表皮、柵欄組織、海綿組織和葉脈等成熟組織。7月葉片厚度達(dá)到最大,之后趨于穩(wěn)定。4月葉片綠原酸的含量為0.654%，6月葉片中綠原酸的含量達(dá)到最高，為1.153%。之后，隨著葉片的衰老，綠原酸含量不斷降低，至落葉前的11月，綠原酸含量為0.483%。結(jié)論綜合分析葉片生物量和綠原酸含量，7～8月份采集杜仲葉較合適。 【關(guān)鍵詞】 杜仲 葉 結(jié)構(gòu) 綠原酸 高效液相色譜法 石蠟切片法 杜仲Eucommia ulmoides Oliv．為杜仲科(Eucommiaceae)杜仲屬落葉喬木，為我國(guó)特產(chǎn)。杜仲皮是我國(guó)傳統(tǒng)的中藥材,具有補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨、安胎、降血壓等功效。杜仲傳統(tǒng)以皮入藥,然而杜仲皮的生產(chǎn)年限較長(zhǎng)，一般20年左右才能剝皮，藥源遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足需要。近年來(lái)有關(guān)學(xué)者在杜仲以葉代皮方面做了不少研究［1，2］，發(fā)現(xiàn)杜仲葉與杜仲皮藥用成分的含量基本一致［2～4］，且藥效相當(dāng)，甚至有一些藥用成分，如綠原酸，其葉中的含量高于皮中含量的5倍［5］。因此，杜仲葉不僅可以作為杜仲的新藥源，而且可以作為保健品的新原料。綠原酸是杜仲葉中的重要成分［1，5］，具有利膽、抗菌、抗病毒、降壓、增高白血球及興奮中樞神經(jīng)系統(tǒng)等多種藥理作用，是保健、醫(yī)藥等工業(yè)的重要原料［5～7］。杜仲葉中的綠原酸的含量常作為評(píng)價(jià)杜仲葉品質(zhì)的重要依據(jù)，而杜仲葉中綠原酸的產(chǎn)生與杜仲葉細(xì)胞發(fā)育有密切關(guān)系。本實(shí)驗(yàn)在對(duì)杜仲葉結(jié)構(gòu)發(fā)育研究的基礎(chǔ)上，用HPLC方法測(cè)定了杜仲葉中綠原酸含量［8～10］，探索了杜仲葉中綠原酸含量與杜仲葉結(jié)構(gòu)發(fā)育之間的關(guān)系以及杜仲葉中綠原酸含量變化的規(guī)律，為杜仲葉的綜合開發(fā)利用及最佳采葉時(shí)期的確定提供科學(xué)依據(jù)。 1 器材 1.1 藥材本實(shí)驗(yàn)所用材料均取自河南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院生物園地(東經(jīng)113°86、北緯35°31)。 1.2 儀器和試藥儀器為美國(guó)Waters600高效液相色譜儀。Sep-pak C18柱，510泵，490可編程序紫外檢測(cè)器，680梯度裝置。綠原酸對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所)。 2 方法 2.1 杜仲葉結(jié)構(gòu)的觀察從2006年04月開始，每月取樣1次，直到落葉前的11月。用于測(cè)定綠原酸含量的杜仲葉采摘后在室內(nèi)自然風(fēng)干，粉碎備用。用于切片的材料，取后立即用3%戊二醛固定液固定并保存，常規(guī)石蠟切片制片法制片，番紅-固綠染色，Olympus顯微鏡觀察組織結(jié)構(gòu)，常規(guī)顯微測(cè)量。 2.2 綠原酸的含量測(cè)定采用高效液相色譜法。 2.2.1 色譜條件流動(dòng)相為乙腈（CH3CN）∶2%乙酸（HAC）水溶液（25∶75）；流速為1.0 ml/min；檢測(cè)器波長(zhǎng)分別為326 nm,254 nm；進(jìn)樣量1 μL。 2.2.2 綠原酸的測(cè)定精確稱取粉碎、過(guò)100目篩的杜仲葉樣品2 g，加入150 ml 80%的甲醇水溶液，超聲波振蕩30 min，抽濾，其濾液置于25 ml容量瓶中，80%的甲醇水溶液定容。取出50 ml放入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中蒸除甲醇，蒸至10～20 ml轉(zhuǎn)至分液漏斗，以2N的鹽酸酸化，加醋酸乙酯20 ml靜置分層，下層水相重復(fù)用醋酸乙酯萃取3次，合并醋酸乙酯，加無(wú)水Na2SO4 脫水，濾除Na2SO4，濾液濃縮至干，然后加2 ml甲醇溶液溶解，取0.2 ml于活化的Sep-pak C18柱頂端，用80%的甲醇洗脫，收集前2 ml洗脫液作樣品測(cè)定。 3 結(jié)果 3.1 杜仲葉生長(zhǎng)發(fā)育中形態(tài)結(jié)構(gòu)的變化杜仲葉橫切面觀察，杜仲葉片結(jié)構(gòu)屬于典型的中生性雙子葉植物葉結(jié)構(gòu)。葉片由表皮、葉肉和葉脈三部分組成。上表皮為一層細(xì)胞，排列緊密，長(zhǎng)方形，外被角質(zhì)層；上表皮下面是柵欄組織，柵欄組織也由一層細(xì)胞組成，細(xì)胞呈長(zhǎng)圓柱形；柵欄組織下方是由3～4層細(xì)胞組成的海綿組織，海綿組織細(xì)胞內(nèi)含有膠細(xì)胞，即海綿組織內(nèi)含有膠絲。海綿組織細(xì)胞下面是下表皮，下表皮也由一層扁平細(xì)胞組成，下表皮分布有較多氣孔。網(wǎng)狀葉脈，其中主脈維管束外韌型，形成層明顯。 3.2 不同生長(zhǎng)發(fā)育時(shí)期杜仲葉中綠原酸含量的變化葉片結(jié)構(gòu)的變化與化學(xué)成分的變化有著密切的關(guān)系。杜仲葉中的綠原酸的含量隨葉子生長(zhǎng)而變化，在4～6月份綠原酸含量隨葉片的生長(zhǎng)發(fā)育而增加，綠原酸在葉中含量的最大值出現(xiàn)在植株生長(zhǎng)最旺盛的6月份，葉片中綠原酸含量達(dá)到最高為1.153%，比年平均含量高出33.0%，然后又隨著葉片生長(zhǎng)進(jìn)入衰老階段，綠原酸含量逐漸下降，到葉落時(shí)達(dá)到最低為0.483%，比年平均含量低45.8%。結(jié)果見表2。 4 討論 【參考文獻(xiàn)】 ［1］ 李家實(shí),閻玉寧. 杜仲皮與葉化學(xué)成分初步研究［J］.中藥通報(bào)，1986，11：41. |
