王亞琴
（廣東藥學院藥用植物與生藥學教研室，廣東 廣州 510224）
摘 要 通過測定七個產(chǎn)區(qū)杜仲葉中5種有效成分(次生代謝物)的含量，得出生態(tài)因素是調(diào)控藥用植物有效成分合成與積累的重要因素。并對各種生態(tài)因素進行了逐步回歸和通徑分析，結(jié)果表明：影響杜仲葉有效成分合成與積累的主要因素是土壤中的微量元素，而氣象因素影響不大。
關(guān)鍵詞 杜仲葉 有效成分 生態(tài)因素 微量元素
中圖號 R284 文獻標識碼:A 文章編號:1006-8783(2000)03-0173-04
杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)是杜仲科單屬植物，為我國特有樹種，國家二類重點保護植物，同時又是名貴的滋補藥材，早在公元前100多年，我國第一部藥物學典籍《神農(nóng)本草經(jīng)》就記載了杜仲的藥效［1］，“ 杜仲性味甘、微辛、溫、無毒，有補肝腎、強筋骨、益腰膝、除酸痛的效能�！苯t(yī)學又證明了杜仲具有雙向調(diào)節(jié)血壓的特性［2］，以及防止動脈硬化、增強免疫功能等顯著的藥理作用［3］。
藥用植物地理學是研究藥用植物的有效成分(次生代謝物)、功效與植物系統(tǒng)發(fā)育與地理(生態(tài))演進之間的聯(lián)系及規(guī)律性的一門新興學科。藥用植物功效及有效成分積累與土壤、氣候等生態(tài)因素之間的關(guān)系是其主要研究內(nèi)容之一。醫(yī)藥學研究認為，一種藥用植物的功效主要取決于其所含的有效成分，有效成分的種類以及含量決定著藥用植物的功效和臨床療效。影響藥用植物有效成分的因素很多，但主要可以歸納為兩種，即遺傳因素、生態(tài)因素。本文就生態(tài)因素作一探討。
1 實驗材料、儀器和試劑
1.1 實驗材料
本實驗所用杜仲葉分別采自七個杜仲產(chǎn)區(qū)實生繁殖的杜仲樹，所采土樣來自于七個產(chǎn)區(qū)采葉植株的林地。這七個產(chǎn)區(qū)依次是陜西略陽、湖南慈利、貴州遵義、湖北宜昌、四川巫山、通江、河南洛陽。
1.2 主要儀器和試劑
722光柵分光光度計(上海第三分析儀器廠)；PXS-215型離子活度計(上海第二分析儀器廠)；Waters高效液相色譜系統(tǒng)，包括486紫外檢測器、510型泵(美國Milford)；XWT-204型臺式自動平衡記錄儀(上海大華儀表廠)；超聲波發(fā)生器(無錫超聲波設(shè)備廠)；日立180-80型原子吸收分光光度計(日立公司)。綠原酸(德國進口)，桃葉珊瑚甙、京尼平甙、京尼平甙酸(均為日本和光純藥工業(yè)株式會社產(chǎn)品)。
2 實驗方法
2.1 桃葉珊瑚甙的提取及測定 采用分光光度法對桃葉珊瑚甙進行定量測定 (Y=0.6971X，r =0.9990)［4］。
具體測定步驟：精密稱取5 g杜仲葉粉置索氏提取器中，用石油醚脫脂11 h。揮發(fā)干石油醚后，用80%甲醇于60 ℃回流提取1 h，合并兩次濾液，濃縮后，加ρ ＝2%活性炭于50 ℃保溫0.5 h，抽濾，濾液放入冰箱中過夜，再加2%硅藻土，抽濾，濾液放入50 mL容量瓶中，加水至刻度。然后精密吸取4 mL稀釋液于100 mL容量瓶中，加水至刻度。取1 mL稀釋液于具塞試管中，用水補加到3 mL，再加甲醇3 mL，ρ=2%硫酸銅試劑3 mL，混勻，于85 ℃ 水浴上加熱5 min，置流水中冷卻1 min，以相同條件做空白對照，放置30 min后，于601 nm波長處進行比色。
2.2 總黃酮的提取及測定 采用硝酸鋁-亞硝酸鈉比色法(Y=-0.0020+1.2230X，r=0.9997)［5］。
具體測定步驟：精密稱取杜仲葉粉5 g于索氏提取器中，用φ＝95%乙醇回流8 h，濃縮至近干，用蒸餾水溶解后過濾。濾液用正丁醇萃取，至水溶液無黃酮反應(yīng)為止。減壓回收正丁醇至近干，加30%乙醇溶解，過濾，移至50 mL容量瓶中，再用φ＝30%乙醇稀釋至刻度，搖勻。精密吸取此溶液4 mL置100 mL容量瓶中，加φ＝30%乙醇稀釋至刻度，即4 mg/mL。分別精密吸取樣品液3 mL、4 mL于10 mL容量瓶中，精密加入ρ＝5%亞硝酸鈉溶液0.3 mL，放置6 min，再加入ρ＝10%硝酸鋁溶液0.3 mL，放置6 min，加1 mol/L氫氧化鈉溶液4.0 mL，分別用φ＝30%乙醇稀釋至刻度，搖勻，放置15 min。用722光柵分光光度計在510 nm處測吸收度。
2.3 杜仲膠含量的測定 采用堿浸法［6］。
具體操作步驟：稱取杜仲干葉15 g于55～60 ℃烘2 h，研磨成柔軟絲綿狀待用。加入ρ＝5%氫氧化鈉于85、75、65 ℃分別加熱2、3、12 h，沖洗后得到粗膠提取物。將粗膠提取物置于索氏提取器中脫色，再加入酸性溶液于65、50 ℃分別加熱24、12 h并沖洗干凈，然后加入堿性有機溶劑于40 ℃加熱12 h，沖洗干凈，可得到近白色膠絲提取物，干燥至恒重即可。
2.4 綠原酸、京尼平甙、京尼平甙酸的測定及提取 采用反相高效液相色譜法同時測定了綠原酸、京尼平甙及京尼平甙酸［7，8］。
色譜條件：色譜柱 Nova-Pak C18(4 μm,3.9 mm×75 mm);流動相：V(甲醇)∶V(水)∶V(冰乙酸)=10∶90∶1;流速 1 mL/min，檢測波長232 nm。
2.5 土壤中微量元素的測定 西北農(nóng)業(yè)大學中心分析實驗室測定。
2.6 氣象資料 調(diào)查地區(qū)氣象臺(站)提供。
3 結(jié)果與分析
3.1 不同地區(qū)杜仲葉有效成分含量分析
不同地區(qū)杜仲葉有效成分含量存在極顯著差異。遵義地區(qū)的京尼平甙、綠原酸、桃葉珊瑚甙、總黃酮含量最高，慈利地區(qū)的京尼平甙酸含量最高，洛陽地區(qū)的京尼平甙含量最低，宜昌地區(qū)的綠原酸、桃葉珊瑚甙、總黃酮、京尼平甙酸含量最低。多重比較結(jié)果顯示，慈利、略陽、遵義三個地區(qū)的京尼平甙酸含量高，與其他四個地區(qū)差異極顯著。綠原酸含量以遵義最高，與其他六個地區(qū)差異極顯著。遵義、慈利兩個地區(qū)的京尼平甙含量高，與其他五個地區(qū)差異極顯著。遵義地區(qū)的桃葉珊瑚甙含量最高，與其他六個地區(qū)相比達極顯著水平。遵義、通江、慈利三個地區(qū)的總黃酮含量高，與其他四個地區(qū)差異極顯著。由此可以看出，杜仲葉中不同有效成分在不同地區(qū)含量差異很大。
本實驗為了準確研究生態(tài)因素對有效成分的影響，所用杜仲葉均采自同一樹齡實生繁殖的杜仲樹且株數(shù)相同，采樣時間、方法一致，排除了類型間差異(遺傳基因)和雌雄間差異的干擾以及密度的影響。從而可以得出生態(tài)因素是調(diào)控藥用植物有效成分合成與積累的重要因素這一結(jié)論。
參考文獻
［1］張康健編.杜仲［M］.北京：中國林業(yè)出版社，1990.232.
［2］王俊麗.杜仲的研究與應(yīng)用［J］.中草藥，1993，24(12)：655.
［3］張康健，張?zhí)?中國神樹—杜仲［M］.北京：經(jīng)濟管理出版社，1997.35.
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［5］馮煦，李鴻英.北柴胡與煙臺柴胡黃酮成分的比較研究［J］.中草藥，1992，23(9)：44.
［6］馬柏林，王藍.杜仲膠實驗室方法的研究［J］.西北林學院學報，1994，9(4)：67.
［7］黃西峰.反相HPLC分離金銀花成分及綠原酸含量測定［J］.中草藥，1988，19(5)：14.
［8］Takahashi T,Matsumoto N,Oshio H. The Stability of bio-active components in the bark of Eucommia ulmoides:Eucommiae cortex［J］. Shoyakugaku Zasshi，1988,42(2):111.
［9］張之申.不同產(chǎn)地三七的生態(tài)環(huán)境觀察和微量元素研究［J］.中國中藥雜志，1991，16(6)：335.
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