不同種獐牙菜中獐牙菜苦苷Swertimarin含量比較 | 不同種獐牙菜中獐牙菜苦苷Swertimarin含量比較 |
| 發(fā)布時間:2010-08-23 信息來源:admin 發(fā)布人:admin 點擊次數(shù):5364 |
不同種獐牙菜中獐牙菜苦苷含量比較 肖懷，宋玉林，王胤，張楨(云南大理學院藥學院，云南 大理 671000)
摘要：目的 比較不同品種獐牙菜植物中獐牙菜苦苷含量，為合理選擇利用資源提供依據(jù)。方法甲醇超聲提取獐牙菜植物中的活性成分，通過HPLC 測定其中的獐牙菜苦苷含量。色譜條件： ZORBAX SB-C18(4.6 mm×150 mm，5 μm)色譜柱，流動相為水-乙腈(92∶8)，流速1 mL·min-1，柱溫25 ℃，檢測波長為238 nm。結(jié)果 獐牙菜苦苷在檢測范圍內(nèi)線性良好(r=0.999 4)，加樣回收試驗的平均回收率為99.2%，重復性試驗RSD 為1.73%(n≥5)。幾種獐牙菜中獐牙菜苦苷含量在0.58%~12.86%。結(jié)論 獐牙菜苦苷含量在獐牙菜屬植物中種間差別比較大。
關鍵詞：獐牙菜；獐牙菜苦苷；含量測定；高效液相色譜法 上禾生物
Content Compareing of Swertiamarin in Different Species of Swertia XIAO Huai, SONG Yulin, WANG Yin, ZhANG Zhen (Department of Pharmacy, Dali College, Dali 671000, China) ABSTRACT: OBJECTIVE To compare the content of swertiamarin in different species of Swertia for reasonable resource exploitation. METHODS The components were extracted by ultrasonic methanol and swertiamarin content determined by HPLC.The chromatographic condition as follow: ZORBAX SB-C18(4.6 mm×150 mm, 5 m) column, the detection wavelength was set at 238 nm with mobile phase of water-acetonitrile (92∶8), flow rate of 1.0 mL·min-1 and column temperature of 25 ℃. RESULTS The calibration curve was in good linear relationship (r=0.999 4) with average recovery of 99.2%. The reproduction was 1.73%(n≥ 5). The content of swertiamarin varied from 0.58% to 12.86% in six Swertia herbs. CONCLUSION The content of swertiamarin was remarkable different in Swertia herbs. KEY WORDS: Swertia; Swertiamarin; content determination; HPLC
獐牙菜苦苷(Swertimarin)是龍膽科(Gentianaceae)獐牙菜屬(Swertia L.)植物中的主要成分之一。獐牙菜苦苷具有抗膽堿作用，在人體腸內(nèi)菌作用下可分解產(chǎn)生具有抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)和胃液分泌、抗?jié)兊然钚晕镔|(zhì)，推測獐牙菜苦苷的抗膽堿作用可能與其降解產(chǎn)物有關[1]。從金沙青葉膽中分離得到的獐牙菜苦苷已成為解痙止痛新藥，對小兒腹痛有較好的療效。此外，獐牙菜苦苷對中樞神經(jīng)系統(tǒng)具有鎮(zhèn)痛和鎮(zhèn)靜作用，臨床上應用有較好的改善睡眠效果[2]。獐牙菜苦苷皮膚吸收代謝產(chǎn)物可擴張毛細血管，激活和促進皮膚細胞的酶系統(tǒng)，提高皮膚的生化功能，還可以治療脫發(fā)癥和用于皮膚美容劑[2]。獐牙菜苦苷還具有抗癌作用[3]。獐牙菜苦苷的含量測定，特別是在獐牙菜屬植物中的含量已有較多的報道[4-6]，其含量種間差距比較大，但已有報道的幾種獐牙菜中其含量一般都小于5%，有些品種則小于1%。筆者在前期系統(tǒng)研究觀賞獐牙菜的化學成分時發(fā)現(xiàn)，該種植物提取浸膏的正丁醇部分，獐牙 菜苦苷的含量達到80%以上，根據(jù)總生藥量計算，其含量遠遠大于所報道的其它種獐牙菜中的含量。為了比較系統(tǒng)的比較其種間差距，筆者通過甲醇超聲提取， HPLC 測定了觀賞獐牙菜(S. Decora Franch)、麗江獐牙菜(S. delaveyi Franch)、紫紅獐牙菜(S. punicea Hemsl)、日本獐牙菜(S. japonica)、狹葉獐牙菜(S. anguslifolia)、賓川獐牙菜(S. binchuanensis)等不同產(chǎn)地的六種獐牙菜中獐牙菜苦苷Swertimarin（上禾生物）含量，為更合理有效的開發(fā)應用獐牙菜資源，或?qū)ふ意啦丝嘬罩参镌刺峁┮罁?jù)。 1 儀器和材料 Agilent 1100 高效液相色譜儀(真空在線脫氣機，四元泵，自動進樣器，柱溫箱，DAD 檢測器，Chemstation 化學工作站， 美國安捷倫公司) ，SY3200-T 超聲儀(上海聲源超聲波儀器設備有限公司)，F(xiàn)A2004N 電子天平(上海精密科學儀器有限公司天平儀器廠)。獐牙菜苦苷對照品自觀賞獐牙菜中提取分離得到，與標準品TLC 和混合熔點測定鑒定，經(jīng)HPLC檢測，1%自身對照品計算法計算純度均大于99%(扣除溶劑峰)，見圖1。甲醇為分析純，水為純 化水，其它測試試劑為光譜純。生藥樣品除日本獐牙菜得自日本富山縣富山大學和漢藥研究所外，其它均采自大理，經(jīng)何廷農(nóng)教授(中科院西北高原生物研究所)及大理學院生藥學 教研室夏叢龍老師鑒定。標本現(xiàn)存于大理學院藥學院藥物標本室。 2 方法與結(jié)果 2.1 色譜條件 色譜柱：ZORBAX SB-C18 (4.6 mm×150 mm，5μm)，流動相：水-乙腈(92∶8)，流速：1 mL·min-1，柱溫：25 ℃，檢測波長：238 nm，進樣量：10 μL。 2.2 對照品溶液配制 精密稱取干燥衡重的樣品約0.1 g，甲醇溶解于100 mL 量瓶中定容，備用。 2.3 樣品溶液制備 精密稱取獐牙菜風干粉碎樣品3 g，用約30 mL甲醇超聲提取30 min，過濾，重復提取3 次，合并濾液，定容到100 mL，備用。色譜圖見圖1(觀賞獐牙菜)。 2.4 標準曲線繪制 分別精密量取濃度為1.075 mg·mL-1 的對照品溶液10，8，6，4，2，1 mL，用甲醇定容至10 mL。取少許，濾膜過濾，進樣測定。以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，進行線性回歸，得：Y=13.778 92X+64.114 06，r=0.999 4。結(jié)果表明在1.075～10.075 μg內(nèi)線性關系良好。 2.5 儀器精密度試驗 精密吸取對照品溶液10 μL，重復進樣5 次，分別測定峰面積值，計算出獐牙菜苦苷RSD 為0.48%。 2.6 重復性試驗 平行稱取觀賞獐牙菜5 份，每份約3 g，按“2.3”項下方法制備，在“2.1”項下色譜條件，各進樣10 μL，測定獐牙菜苦苷Swertimarin（上禾生物）峰面積，計算出含量，結(jié)果RSD 為1.73%。 2.7 穩(wěn)定性試驗 取配制好的觀賞獐牙菜樣品溶液分別于1，2，4，6，8，12，24 h 進樣10 L，樣品峰面積 RSD為0.83%，說明樣品在24 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。 2.8 加樣回收率試驗 平行稱取觀賞獐牙菜6 份，每份約1.0 g。于100 mL 燒瓶中，各加入5 mL 配制好的對照品溶液(濃度1.075 mg·mL-1)，按“2.3”項下方法操作，得6 份提取液。進樣測定獐牙菜苦苷峰面積，計算回收率為99.2%，RSD 為1.73%。 2.9 樣品含量測定 取制備好的樣品溶液，測定獐牙菜苦苷Swertimarin（上禾生物）峰面積。每種生藥平行制備3 份，每份進樣3 次，每次10 μL，各以平均峰面積代入方程求出相應含量。其中的觀賞獐牙菜和狹葉獐牙菜，先取25 mL 稀釋至50 mL 后再進樣測定。結(jié)果見表1。
3 討論 分別測定了超聲提取5，10，15，20，25，30 min后提取液獐牙菜苦苷Swertimarin（上禾生物）含量，提取15 min 以后，提取時間對含量影響較小，為盡可能提取充分，選擇30min 為樣品提取時間。為提高檢測靈敏度，選擇獐牙菜苦苷Swertimarin（上禾生物）最大吸收波長附近的238 nm 作為檢測波長。根據(jù)測定結(jié)果，該屬植物中都含有獐牙菜苦苷，但種間差別較大，在觀賞獐牙菜、狹葉獐牙菜中含量很高，甚至超過了10%。獐牙菜苦苷是獐牙菜屬植物中的主要有效成分，具有多種生理活性，分析比較其含量的種間差別，可為該屬植物的開發(fā)利用提供參考依據(jù)。觀賞獐牙菜在云南有非常廣泛的分布，可作為獐牙菜苦苷提取的藥源植物。
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