銀翹天甘復(fù)方制劑中綠原酸的測定 | 銀翹天甘復(fù)方制劑中綠原酸的測定 |
| 發(fā)布時(shí)間:2010-09-10 信息來源:admin 發(fā)布人:admin 點(diǎn)擊次數(shù):4134 |
遼寧醫(yī)學(xué)院 王宏軍蔣紅 王春華 姚健 【摘要】本實(shí)驗(yàn)旨在探索建立銀翹天甘復(fù)方制劑中綠原酸含量的檢測方法。采用紫外分光光度法(Uv)，檢測波長為327 am；薄層色譜法(TLC)，展開劑為乙酸丁酯一甲酸一水(7．5：2．5：2．5)。結(jié)果表明：綠原酸濃度為2．5～15斗g／mL時(shí)有較好的線性關(guān)系，回歸方程：A=0．1897C-0．0033，r=0．9997(n=5)，回收率為99．4％，RSD為0．2％。薄層色譜能將復(fù)方制荊中的綠原酸很好的分離出來，樣品中的綠原酸比移值(R．f值)=0．28+0．01(n=5)，與對(duì)照品之間的R．f值基本一致。銀翹天甘復(fù)方制劑中舍有綠原酸，且uv、TLC可作為銀翹天甘復(fù)方制劑中綠原酸的定性分析檢測方法。 【關(guān)鍵詞】銀翹天甘；綠原酸；紫外分光光度法；薄層色譜法 銀翹天甘復(fù)方是由金銀花、連翹、天花粉和甘草組方而成，具有清熱解毒、抗菌消炎、增強(qiáng)機(jī)體免疫等功效，該復(fù)方制劑常以君藥金銀花中的綠原酸(CHA)為主要檢測目標(biāo)。目前金銀花中CHA的含量測定多采用紫外分光光度法(UV)和高效液相色譜法(HPLC)(任占軍等，2007；馮文字等，2006)。本文采用UV、薄層色譜法(TLC)對(duì)銀翹天甘復(fù)方制劑中的CHA進(jìn)行測定。 1材料與方法 1．1 實(shí)驗(yàn)材料與儀器 1．1．1材料金銀花、連翹、天花粉、甘草購自遼西國藥店；硅膠G粉(青島海洋化工廠，批號(hào)：20020523)、羧甲基纖維素鈉(CMC)，上�；瘜W(xué)試劑站分裝廠(批號(hào)：921224)；綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品，中國藥品生物制品檢定所(批號(hào)：110753—200413)：無水乙醇、甲醇、乙酸丁酯、甲酸均為分析純．購自遼西化學(xué)試劑公司。 1．1．2儀器UV757CRT紫外可見分光光度計(jì)，上海三精科有限公司；KQ一300B型超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司：索氏提取器，上海 玻璃儀器有限公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀RE一5203．上海壓榮生化儀器廠；薄層手動(dòng)涂敷器．武漢藥科新技術(shù)開發(fā)有限公司；ZF_4型紫外透射反射分析儀。 上�？岛坦怆妰x器有限公司。 1．2 實(shí)驗(yàn)方法 1．2．1制藥稱取粉碎過60目篩的金銀花40 g、連翹40 g、天花粉40 g、甘草40 g混勻，用70％乙醇作為溶媒，采用改良索氏提取法(王宏軍等。 2003)，提取6—8 h，減壓濃縮，干燥得浸膏。1．2．2綠原酸UV定性分析(1)外標(biāo)法：精確稱取綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品2 mg，用50％甲，醇溶解定容至10 mL；精確稱取浸膏3．000 g用50％甲醇溶液溶解，配成濃度為0。3 mg／mL樣品：用UV757CRT型紫外可見分光光度計(jì)于200。400 nm范圍內(nèi)掃描，可以得到標(biāo)準(zhǔn)品、樣品的紫外圖譜，若在樣品中含有與對(duì)照品相似或一樣的化學(xué)物，在UV圖譜相同位置處將有類似的吸收峰。 (2)內(nèi)標(biāo)法：在外標(biāo)法的基礎(chǔ)上，于樣品中滴加20¨L標(biāo)準(zhǔn)品，得到另外一組UV圖譜，與樣品圖譜進(jìn)行比對(duì)，若樣品中含有與對(duì)照品相似或一樣的化學(xué)物，會(huì)在同一吸收波長處出現(xiàn)一個(gè)峰高大于樣品的吸收峰。 1．2．3 TLC定性分析色譜條件：硅膠G板(自制)，展開劑：乙酸丁酯一甲酸一水(7．5：2．5：2．5)，樣品與標(biāo)準(zhǔn)品分別點(diǎn)樣10斗L，點(diǎn)樣后飽和30 min，上行法展開，室溫，365 nm紫外檢視。若樣品中含有與對(duì)照品相似或一樣的化學(xué)物。在薄層板同一位置會(huì)發(fā)出相同的熒光，具有相同的比移值(Rf值)。胙原點(diǎn)中心的距離到色斑中心距離／原點(diǎn)至展開劑前沿距離。 1．2．4綠原酸定量分析準(zhǔn)確稱取綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品2 mg，用50％甲醇作為溶媒，配成濃度分別為2．5、5、7．5、10、12．5、15¨g／mL標(biāo)準(zhǔn)溶液。用1．2．2中外標(biāo)法獲得的綠原酸最大吸收峰波長檢測吸光度值(A)，在一定波長下，濃度一A呈線性關(guān)系，可以繪制綠原酸的標(biāo)準(zhǔn)曲線并得其線性方程。將樣品稀釋后按照標(biāo)準(zhǔn)品相同測定方法可以測得樣品的吸光度值，代入線性方程中。即得樣品中綠原酸的含量。 1．2．5加樣回收率實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確稱取已知含量的同一批樣品0．18 g，共5份，分別加入與樣品中綠原酸相當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)品，按供試品溶液制備方法處理并進(jìn)樣測定。計(jì)算公式如下：
1．3數(shù)據(jù)處理方法利用Microsofter officer Excel求標(biāo)準(zhǔn)曲線及其標(biāo)準(zhǔn)方程．對(duì)重復(fù)數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)或F檢驗(yàn)。 2結(jié)果與分析 2．1 綠原酸最大吸收波長本實(shí)驗(yàn)掃描獲得的綠原酸最大吸收峰波長為327 am，與《中國獸藥典》(2005)報(bào)道一致。 2．2定性分析結(jié)果 2．2．1 UV分析結(jié)果外標(biāo)法測定結(jié)果見圖1，箭頭所指為樣品與標(biāo)準(zhǔn)品在同一波長下具有相似吸收峰的位置。內(nèi)標(biāo)法分析結(jié)果見圖2，箭頭所指為樣品與添加標(biāo)準(zhǔn)品發(fā)生變化的位置，通過UV圖譜可以認(rèn)為銀翹天甘復(fù)方中含有綠原酸。
2．2．2 TLC分析結(jié)果由于綠原酸在345 am紫外光照射下會(huì)發(fā)出藍(lán)色熒光。鉛筆標(biāo)記結(jié)果見圖3，由此可知樣品中含有綠原酸。在色譜圖3中1為陰性對(duì)照，2、3為樣品，4為綠原酸對(duì)照品。樣品、標(biāo)準(zhǔn)品的Rf值見表l，二者之間無顯著差異。 2．3定量分析結(jié)果分別在327 nm處測的不同濃度綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品的吸光度值，結(jié)果見表2。線性回歸方程為A=0．1897C-0．0033，r=O．9997(n=5)。將樣品稀釋成0．18 mg／mL，測得其吸光度值為0．661(n=5)，代入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程中即得檢測樣品中綠原酸含量為3.5ug/ml。由此可知銀翹天苷復(fù)方制劑中含綠原酸為1．94％。
2．4加樣璃牧率實(shí)驗(yàn)結(jié)果綠原酸UV法燕樣回收率試驗(yàn)結(jié)果見表3。加樣平均網(wǎng)收率為99．4％，RSD為0．2％。
3討論 3．1 中藥復(fù)方制劑成分定性分析的方法 長期以來TLC作為中藥成分檢測分析的重要手段，具有設(shè)備簡單、操作方便、分離速度快等特點(diǎn)(張巖等。2008)，尤其是對(duì)于中藥復(fù)方制劑檢測方法的探索發(fā)揮著重要的作用。本文探索了以UV和TLC作為自制銀翹天甘中藥組方制劑中有效成分綠原酸的檢測方法，結(jié)果顯示銀翹天甘中藥組方制劑中含有綠原酸，而且UV與TLC方法簡便、快速、準(zhǔn)確�？梢宰鳛殂y翹天甘復(fù)方制劑有效成分綠原酸的定性檢測方法。 3．2 中藥復(fù)方制劑成分定量分析的方法 本文利用UV法對(duì)銀翹天甘復(fù)方制劑中有效成分綠原酸進(jìn)行定量檢測。其測定結(jié)果中UV標(biāo)準(zhǔn)曲線方程的相關(guān)度r=0．9997，表明在327 nm處測定綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品濃度與吸光度之間有良好的線性關(guān)系。但由于樣品中成分較多，對(duì)吸光度有一定的影響，使其吸光度偏大，而綠原酸含量卻比較少，由此表明用UV法作為中藥復(fù)方制劑成分定量分析不太適合，銀翹天甘復(fù)方制劑有效成分綠原酸的定量檢測方法還有待予進(jìn)一步的研究。 參考文獻(xiàn) [1]馮文宇，田吉，何兵。金銀花與川銀花綠原酸含量及提取率實(shí)驗(yàn)研究[J]． 中藥材，2006，29(1)：30—31． [2]任占軍．谷學(xué)新，侯士纂，等．HPLC法測定速感冒片中綠原酸的含量 [J]．藥物分析雜志，2007，27(5)：752—753． [3]王宏軍，吳國娟，李煥榮，等．金銀花中綠原酸提取物方法的篩選及其抑菌作用[J]．北京農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào)．2003，18(4)：262—265． [4]張巖。曹國杰。張燕．等．黃酮類化合物的提取以及檢測方法的研究進(jìn)展[J]．食品研究與開發(fā)，2008，29(1)：154—158． [5]中國獸藥典委員會(huì)．金銀花[M]．中國獸藥典[M]．2005.VolⅡ《二部)：220． 產(chǎn)品鏈接： 杜仲提取物 綠原酸 金銀花提取物 苦杏仁苷 枇杷葉提取物-熊果酸 大花紫薇提取物-科羅索酸 上禾生物 專注植提 精于高純 基于您對(duì)天然產(chǎn)物需求持續(xù)創(chuàng)新 |
