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白　潔1, 2 , 陳翔飛1 , 孫海峰1

(1. 深圳清華大學(xué)研究院,廣東深圳　518057; 　2. 清華大學(xué),北京　100084)

摘要:目的測定夏枯草中熊果酸的含量。方法薄層掃描法。結(jié)果熊果酸在0. 314～1. 570μg范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好( r = 0. 999 2) ,平均回收率為99. 3% ,精密度實(shí)驗(yàn)RSD = 1. 86%。結(jié)論該方法可用于夏枯草的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞:夏枯草; 　熊果酸; 　薄層掃描法

　  夏枯草系唇形科多年生植物夏枯草Prunella vulgaris L. 的干燥果穗。主產(chǎn)于江蘇、安徽、河南、浙江等地,其它各省亦產(chǎn)。具有清肝火、散郁結(jié)、降血壓等功效[ 1 ]。本文通過采用雙波長薄層色譜掃描法,測定其中熊果酸成分的含量,以控制藥材質(zhì)量。

1　儀器與試藥

CAMAG 3 (瑞典) 薄層色譜掃描儀、Sartorius BS 210 S (德國)電子天平。熊果酸:由中國藥品生物制品檢定所提供,批號074229909;薄層層析硅膠G(青島海洋化工廠) ;薄層板:自制硅板G板(20 cm ×20 cm) ;所有試劑均為分析純。夏枯草藥材:由深圳市一致藥店及深圳市福田農(nóng)批市場購買,產(chǎn)地湖北和河南。

2　方法與結(jié)果

2. 1　薄層色譜條件薄層板為硅膠G板,取硅膠G與0. 4%CMC2Na水溶液按1 ∶3 比例研勻鋪板, 厚度0. 3 mm, 陰干,105℃活化30 min,以環(huán)己烷∶氯仿∶醋酸乙酯( 20∶ 5∶8)為展開劑,預(yù)飽和30 min,每個樣品點(diǎn)成4. 0 mm ×1. 0 mm長條狀,放入展開缸內(nèi)上行展開10 cm,噴以10%硫酸乙醇溶液,于100℃顯色5 min,采用雙波長反射式鋸齒掃描,以540 nm 作為測定波長, 700 nm作為參比波長,狹縫大小: 2. 0 mm ×0. 2mm。

2. 2　對照品溶液制備精密稱取熊果酸對照品適量,加95%乙醇溶解制成每毫升含0. 314 mg的溶液。

2. 3　供試品溶液分別精密稱取夏枯草藥材粗粉約1 g,加入25ml 95%乙醇超聲提取30 min,過濾,濾渣繼續(xù)加入20 ml 95%乙醇超聲提取20 min,過濾,合并兩次濾液, 70℃水浴蒸干,殘?jiān)�用石油�?60～90℃)浸泡兩次,共15 ml, 2 min /次,傾出石油醚液,揮干溶劑,用95%乙醇溶解并轉(zhuǎn)移至10 ml容量瓶中定容,搖勻,即得。

2. 4　峰純度檢查樣品及熊果酸對照品相同Rf值處,進(jìn)行200～700 nm全波段光譜掃描,比較樣品與對照品吸收光譜圖的相似性,并確定最大吸收波長。結(jié)果見圖1。選擇樣品與對照品吸收峰最大值,及前后85%峰位進(jìn)行峰純度檢測。結(jié)果見表1。

2. 5　線性范圍考察精密吸取對照品溶液1, 2, 3, 4, 5 μl ,分別點(diǎn)于同一薄層板上,依上述條件展開,顯色后掃描,以熊果酸的量(μg) 為橫坐標(biāo)X,吸收峰面面積積分值為縱坐標(biāo)Y,回歸得方程: Y = 6. 244X - 1 010. 426, r = 0. 999 2。結(jié)果表明,熊果酸的含量在0. 314～1. 570μg范圍內(nèi),呈良好線性關(guān)系。

2. 6　穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取同一薄層板上點(diǎn)樣量相同(3μl) 的5個對照品斑點(diǎn),每隔5 min 掃描1 次,取每次5個點(diǎn)的平均值。結(jié)果表明,熊果酸在15 min內(nèi)掃描基本穩(wěn)定, RSD = 3. 61 % ( n = 5) ,以后隨時間延長,吸收峰面積顯著減少。

2. 7　同板精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取對照品溶液(3μl) 點(diǎn)于同一薄層板上,依法展開,顯色后掃描, RSD = 1. 86% ( n = 5) 。

2. 8　異板精密度實(shí)驗(yàn)取5塊薄層板分別點(diǎn)5個點(diǎn)樣量相同的對照品斑點(diǎn)(3μl) ,依法展開,顯色后掃描,求出每塊板5個點(diǎn)的平均值, RSD = 3. 17 % ( n = 5) 。

2. 9　重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取供試品(批號060210) 5份,按樣品測定方法分別測定其含量計(jì)算RSD = 1. 94 % ( n = 5) 。

2. 10　回收率實(shí)驗(yàn)取已知含量的樣品( 批號060210) 約1 g,精密稱定,再精密加入熊果酸對照溶液4. 5 ml,按供試品溶液制備方法制成加樣回收實(shí)驗(yàn)液。依法點(diǎn)樣,展開,顯色后掃描,測得其平均回收率為99. 3% , RSD = 3. 23 % ( n = 5) 。

2. 11　樣品測定精密吸取供試品溶液7μl,對照品溶液2μl與5μl,交叉點(diǎn)于同一薄層板上,依法展開測定,按外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算。結(jié)果見表2。

3　討論

通過薄層板展開,樣品與熊果酸對照品相同Rf值處斑點(diǎn)全波段掃描圖譜可見,各批次夏枯草樣品與對照品有相似的吸收光譜圖,并且最大吸收在540 nm附近,因此選擇540 nm作為檢測波長,為了扣除背景吸收,選擇700 nm為參比波長。如表1峰純度考察的結(jié)果,可見以99%作為峰純度的檢測限,可以認(rèn)為各樣品對應(yīng)Rf值處均為單一物質(zhì)熊果酸吸收峰,檢測結(jié)果可以排除其它雜質(zhì)成分的干擾。通過采用薄層掃描法對夏枯草藥材中熊果酸含量測定的方法學(xué)考察,可見此種含量測定方法操作簡便、結(jié)果準(zhǔn)確,可以作為夏枯草中熊果酸含量測定方法。經(jīng)過檢測,河南及湖北產(chǎn)的共六批次夏枯草藥材,其中熊果酸的含量均達(dá)到《中國藥典》(2005年版)大于0. 12%的含量要求[ 2 ]。

參考文獻(xiàn):

[ 1 ] 　江蘇新醫(yī)學(xué)院. 中藥大辭典[M ]. 上海: 上海科學(xué)技術(shù)出版社,2001: 1827.

[ 2 ] 　國家藥典委員會. 中國藥典, Ⅰ部[ S ]. 北京: 化學(xué)工業(yè)出版社,2005: 198.