超聲波法提取金銀花中的綠原酸 | 超聲波法提取金銀花中的綠原酸 |
| 發(fā)布時(shí)間:2010-10-19 信息來(lái)源:admin 發(fā)布人:admin 點(diǎn)擊次數(shù):2646 |
尹 波, 王科軍 (贛南師范學(xué)院化學(xué)與生命科學(xué)系, 江西 贛州 341000) 摘 要:采用超聲波法提取金銀花中的綠原酸,并與水提法進(jìn)行比較。采用薄層層析法進(jìn)行分離。用紫外分光光度法測(cè)定綠原酸的含量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果為:超聲波法的提取率大大高于水提法,所需時(shí)間比直接用水提法所需時(shí)間縮短一半,提取條件溫和,操作簡(jiǎn)單,平均收率為19. 07 %。 關(guān)鍵詞:超聲波法; 水提法; 金銀花; 綠原酸 金銀花[1 ] 為忍冬屬( L onicera japonica Thunb. ) 忍冬植物的干燥花蕾,為中醫(yī)常用藥,具有清熱解毒,涼風(fēng)散熱,抗病毒,保肝利膽的功能。其主要活性成分為綠原酸。我國(guó)作為金銀花產(chǎn)地,在金銀花炮制、有效成分分析、含量測(cè)定等方面取得了很好的研究成果[2 ] 。對(duì)金銀花這一清熱解毒中藥的研究處于世界領(lǐng)先地位。金銀花中綠原酸的提取方法有傳統(tǒng)的水提法、乙醇回流法、水提醇沉法、酶解法、微波法等。超聲波提取[3 ] 作為一種新型的提取技術(shù),在天然產(chǎn)物提取方面得到廣泛的應(yīng)用,具有被提取活性物質(zhì)不被破壞,提取時(shí)間短等優(yōu)點(diǎn)。但用于金銀花中綠原酸的提取未見報(bào)道。本研究采用超聲波法提取金銀花中的綠原酸,取得了滿意的結(jié)果。 1 實(shí)驗(yàn)部分 1. 1 儀器與試劑 超聲波發(fā)生器( KCT- Ⅲ型數(shù)控,昆山市超聲儀器有限公司) ,旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海生申科技公司) ,分析天平(CG- 328 型) ,紫外可見光分光度計(jì)(722 型光柵分光光度計(jì),上海精密科學(xué)儀器有限公司分析儀器廠) ,循環(huán)水真空泵(SHZ- Ⅲ型,上海儀表(集團(tuán)) 供銷公司) ,活化的硅膠G 板(自制) ;金銀花(購(gòu)于贛州友邦大藥房,干燥粉碎后備用) ,石油醚,乙酸乙酯、甲酸、乙醇、綠原酸均為分析純。 1. 2 水提法實(shí)驗(yàn) 為了與超聲波法相比較,先用水提法對(duì)綠原酸進(jìn)行了提取,具體方法為:取6 g 干燥并粉碎的金銀花粉末于80 ℃的水浴下加熱3 次,每次1 h ,將提取液在60 ℃條件下減壓濃縮至5 mL 左右,石油醚脫色,濃縮液稀釋,測(cè)其紫外吸收。 1. 3 超聲波提取法實(shí)驗(yàn) 取6. 0 g 金銀花于燒瓶中,用適量蒸餾水分兩次提取,每次用超聲波處理提取一定時(shí)間后,分離出提取液,合并兩次提取液,使用薄層層析分離,再使用紫外分光光度計(jì)進(jìn)行測(cè)定。 1. 3. 1 硅膠吸附薄層層析- 紫外分光光度法[4 ] 將樣品點(diǎn)于活化的硅膠G板上,以乙酸乙酯∶甲酸∶水= 10∶2∶3 展開,紫外燈下觀察有藍(lán)色斑點(diǎn)的為綠原酸, 刮下斑點(diǎn), 用80 %乙醇洗脫,洗脫液定容至5 mL ,于330 nm 處測(cè)吸收值, Rf = 0. 65 。用標(biāo)樣進(jìn)行吸收值的測(cè)定,確定綠原酸提取液的最大吸收波長(zhǎng),并計(jì)算出相應(yīng)含量。 1. 3. 2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 利用高精度分析天平,稱取綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品0. 0044 g ,溶于25mL 蒸餾水中,然后利用該母液配成各種標(biāo)準(zhǔn)濃度, 用722 型紫外可見分光光度計(jì)在330 nm 下測(cè)定不同濃度綠原酸的吸光度,結(jié)果如表1 。
根據(jù)表1 數(shù)據(jù)繪得圖1 。
依據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線可得回歸方程式 Y = A + B X 式中: A = 0. 12833 ; B = 0. 02272 ; X —綠原酸的濃度(ug/ mL) ; Y —吸光度。 1. 3. 3 樣品液中綠原酸的含量測(cè)定 稱取樣品6. 0 g 放入25 mL 容量瓶中,加2 %的抗氧化劑a 水溶液,定容至25 mL ,提取,過濾,再對(duì)渣進(jìn)行同樣提取,合并兩次提取的樣品液,濃縮至5 mL 左右,石油醚脫色,用薄層層析法分離出各組分,刮下在紫外外燈下呈藍(lán)色的熒光斑點(diǎn),用80 %乙醇(加2 %抗氧化劑a) 洗脫,并定容至5 mL ,置1 mL 石英皿中,用紫外分光光度計(jì)在220～520 nm 處掃描測(cè)得樣品液與標(biāo)準(zhǔn)液最大吸收波長(zhǎng)相同,均為330 nm。于330 nm 處測(cè)定樣品液吸收值,查標(biāo)準(zhǔn)曲線,算出百分含量。 2 結(jié)果分析 2. 1 水提法產(chǎn)品收率 平行做3 次水提取實(shí)驗(yàn),分別得綠原酸0. 6851 g ,0. 6892 g ,0. 6724 g ,平均收率為11. 37 %。 2. 2 超聲波提取法中各種因素對(duì)產(chǎn)品收率的影響 2. 2. 1 樣品預(yù)浸泡時(shí)間對(duì)產(chǎn)品收率的影響 在超聲波提取時(shí)間為30 min、提取溫度為30 ℃的條件下,對(duì)樣品進(jìn)行不同時(shí)間的預(yù)浸泡,然后按1. 3 節(jié)方法提取。結(jié)果如表2 ,預(yù)浸泡時(shí)間越長(zhǎng),收率越大,但超過24 h ,差異很小,所以預(yù)浸泡時(shí)間定為24 h 。 2. 2. 2 超聲波提取時(shí)間對(duì)產(chǎn)品收率的影響 在預(yù)浸泡時(shí)間為24 h 、提取溫度為30 ℃的條件下,對(duì)樣品按1. 3 節(jié)方法進(jìn)行不同超聲波提取時(shí)間的實(shí)驗(yàn),結(jié)果如表2 ,超聲波處理時(shí)間越長(zhǎng),收率越大,但30 min 后的差異很小,所以超聲波處理時(shí)間定為30 min。 2. 2. 3 超聲波提取溫度對(duì)產(chǎn)品收率的影響 在預(yù)浸泡時(shí)間為24 h 、超聲波處理時(shí)間為30 min 的條件下,改變超聲波的提取溫度,對(duì)樣品按1. 3 節(jié)中的方法提取,結(jié)果如表2 ,溫度的影響不是很大,選用室溫即可,實(shí)際上整個(gè)超聲波提取過程是個(gè)溫度不斷升高的過程。 2. 2. 4 超聲波法提取的最佳條件和產(chǎn)品收率 根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,綜合各種影響因素,超聲波法提取金銀花中的綠原酸的最佳條件為:室溫下,先將樣品浸泡24 h ,分兩次提取,每次超聲波處理30 min ,合并兩次提取液,濃縮,石油醚脫色,用薄層層析分離,再用紫外分光光度法測(cè)定其含量。 在最佳條件下做3 次實(shí)驗(yàn),原料6 g ,分別得綠原酸1. 1440 g ,1. 1436 g ,1. 1442 g ,平均收率為19. 07 % ,比水提法提高了7. 7 個(gè)百分點(diǎn)。 2. 3 分離精制與含量測(cè)定 純薄層層析法用于分離效果很差,不適宜于定量分析,只適用于定性分析,而單純的紫外光光度法常用于定量分析,用于定性時(shí),樣品的處理要求較高,操作復(fù)雜。但將這兩種方法有機(jī)的結(jié)合起來(lái)卻能較方便的進(jìn)行定性分析,定量測(cè)定。 3 結(jié)論
3. 1 由水提法與超聲波法提取金銀花所得的主要成分是相同的,這兩種方法的主要差別是超聲波法提取綠原酸的收率較高,而且提取時(shí)間短,條件溫和,是一種較好的方法。 3. 2 樣品的預(yù)浸時(shí)間越長(zhǎng)、超聲波提取時(shí)間越長(zhǎng)、超聲波溫度越高,提取收率也越高。最佳實(shí)驗(yàn)條件為:室溫下,先將樣品浸泡24 h ,分兩次提取,每次超聲波處理30 min ,合并兩次提取液。 3. 3 用薄層層析法及紫外光度法結(jié)合能較方便地對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行定性、定量測(cè)定。 參考文獻(xiàn): [1 ] 鄭敏燕. 超聲波法提取紫丁香中丁香油的研究[J ] . 青海師范大學(xué)學(xué)報(bào),2003 , (3) :32- 33. [2 ] 林丹,趙國(guó)玲,劉佳佳. 金銀花不同提取方法的綠原酸比較研究[J ] . 天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2003 ,15 (2) :124-125. [ 3 ] 蔡霄英,劉永樂. 金銀花中綠原酸的分離與測(cè)定新方法[J ] . 食品科技,2003 , (5) :104- 106. [4 ] 武雪芬,景小琦,李國(guó)茹. 金銀花中藥用成分的提取及抑菌試驗(yàn)[J ] . 天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2001 ,13 (3) :43-44. [5 ] 周瑾,閆小燕,賀高江,等. 微波提取銀檔黃酮苷的方法研究[J ] . 天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2001 ,14 (1) :42- 44. 產(chǎn)品鏈接： 杜仲提取物 綠原酸 金銀花提取物 苦杏仁苷 枇杷葉提取物-熊果酸 大花紫薇提取物-科羅索酸 上禾生物 專注植提 精于高純 基于您對(duì)天然產(chǎn)物需求持續(xù)創(chuàng)新 |
