黃花忍冬果實(shí)中綠原酸的提取及含量測定 | 黃花忍冬果實(shí)中綠原酸的提取及含量測定 |
| 發(fā)布時間:2010-11-03 信息來源:admin 發(fā)布人:admin 點(diǎn)擊次數(shù):2447 |
于加平1 , 王夕宇2 , 馬中宇1 ( 1 . 吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院生物工程系, 吉林吉林132101 ;2 . 吉爾吉藥業(yè)有限公司, 吉林吉林132013) 摘要：用乙酸乙酯作溶劑, 采用索氏提取法對黃花忍冬果實(shí)中綠原酸進(jìn)行提取, 高效液相色譜法對綠原酸進(jìn)行檢測和含量的測定。結(jié)果表明, 該法對黃花忍冬果實(shí)中綠原酸的提取簡單、快速; 檢測方法可行, 含量測定準(zhǔn)確。 關(guān)鍵詞：黃花忍冬果實(shí); 綠原酸; 高效液相色譜; 含量測定 忍冬屬是忍冬科中較大的屬之一, 現(xiàn)知全世界約有200種, 我國約100 種, 廣布于各省區(qū), 以西南、華中地區(qū)種類最多[ 1] 。其中黃花忍冬( Lonicera chrysantha) 是其中一種, 主要分布于華北、東北、西北。該屬植物多為直立或攀援狀灌木,許多忍冬可供藥用。綠原酸成分一直被認(rèn)為是忍冬中的主要有效成分, 現(xiàn)代藥理研究表明, 其具有抗菌抗病毒作用[ 2] ,還有保肝利膽、止血、抗氧化、抗生育等作用[ 3] 。筆者用乙酸乙酯作溶劑[ 4] , 采用索氏提取法對黃花忍冬果實(shí)中綠原酸進(jìn)行提取, 高效液相色譜法對綠原酸進(jìn)行檢測和含量的測定。結(jié)果表明, 在黃花忍冬果實(shí)中含有綠原酸, 且含量較高, 為綠原酸的提取提供一種有效方法和原料來源。 1 材料與方法 1 .1 材料日本JASCO BS- 2000 型高效液相色譜儀,CKChro工作站,phenomenex[ 4 .6 ×250 .0 mm,Luna 5μC18( 2) ] 色譜柱。索氏提取器( 上海洪紀(jì)儀器設(shè)備有限公司) 。乙腈為美國Acetonitrile 、色譜純, 超純水, 磷酸為分析純;綠原酸對照品購自中國藥品生物制品檢定所, 批號110753-200212 。黃花忍冬果實(shí)采自吉林農(nóng)業(yè)科技學(xué)院校園內(nèi), 經(jīng)陰干、低溫烘干處理為干品。 1 .2 方法 1 .2 .1 黃花忍冬果實(shí)中綠原酸的提取。將干燥的黃花忍冬果實(shí)用研缽研碎, 稱取10 g , 用濾紙包好, 置于索氏提取器中, 往圓底燒瓶中加乙酸乙酯80 ml , 在水浴鍋上加熱回流3h, 控制溫度在75 ℃左右。把回流液倒于蒸餾瓶中進(jìn)行減壓蒸餾至20 ml , 超聲溶解, 過濾, 裝于棕色具塞管中, 得待測液,放于冰箱中待用。 1 .2.2 綠原酸的檢測 1 .2.2.1 色譜條件。用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑; 乙腈- 0 .5% 磷酸溶液( 10∶90) 為流動相; 檢測波長327 nm; 流速1 .0 ml/ min ; 柱溫25 ℃。理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算應(yīng)不低于3 000 。 1 .2 .2.2 綠原酸對照品溶液的制備。精密稱取綠原酸對照品2 .700 mg , 置50 ml 容量瓶中, 加甲醇超聲溶解并稀釋至刻度, 搖勻,0 .2 μm 濾膜過濾, 取濾液即得濃度為0 .054 mg/ ml 。 2 結(jié)果與分析 2 .1 黃花忍冬果實(shí)中綠原酸的檢測取“1.2.2 .2”的標(biāo)準(zhǔn)品溶液5 μl 和“1.2.1”提取液10μl ( 經(jīng)0 .2 μm 濾膜過濾) , 按上述色譜條件分別進(jìn)樣分析, 平行進(jìn)樣5 次, 得色譜圖,5 次得到相同的色譜圖, 說明結(jié)果準(zhǔn)確, 證實(shí)樣品中含有綠原酸。 2 .2 黃花忍冬果實(shí)中綠原酸的含量測定 2 .2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作。精密吸取對照品溶液( 0 .054mg/ ml ) 1 .0 、5 .0 、10 .0 、15 .0 、20 .0 、25 .0 μl 進(jìn)樣, 記錄色譜圖, 以綠原酸對照品的濃度為橫坐標(biāo), 峰面積積分值為縱坐標(biāo), 進(jìn)行線性回歸分析, 得回歸方程Y= 323 624 X - 24 308 , 相關(guān)系數(shù)r = 0 .999 6( n= 5) 。綠原酸在0 .000 54 ～0 .013 50 μg 范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好線性關(guān)系。
圖1 綠原酸對照品與黃花忍冬果實(shí)樣品HPLC 色譜圖 Fig .1 HPLC Chromatograms of reference substance and sample 2 .2 .2 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。取對照品溶液分別于配制后0 、1 、2 、4 、8 、12 h , 取濾液10μl 注入色譜儀, 記錄色譜圖, 考察溶液放置后峰面積的變化情況, RSD 為0 .27% , 表明供試品溶液在12h 內(nèi)穩(wěn)定。 2 .2.3 精密度實(shí)驗(yàn)。取對照品溶液連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣5 次, 記錄色譜圖, 考察峰面積的變化情況, RSD 為0 .19% , 表明該含量測定方法精密度良好。 2 .2.4 回收率實(shí)驗(yàn)。精密稱定已測定含量的黃花忍冬果實(shí)5 份, 每份約10 .0 g , 按“1 .2 .1”方法提取后精密加入綠原酸對照品0 .890 mg , 經(jīng)0 .2 μm 濾膜過濾, 進(jìn)樣, 測定峰面積。計(jì)算平均回收率為99 .37% , RSD 為1 .47 % , 結(jié)果見表1 。 2 .3 樣品含量的測定取“1.2.1”制備的黃花忍冬果實(shí)提取液20 μl ( 經(jīng)0 .2 μm 濾膜過濾) , 平行進(jìn)樣3 次, 得色譜圖, 按外標(biāo)法計(jì)算樣品中綠原酸含量, 測得平均含量為0 .28% 。
3 結(jié)論 (1) 采用索氏提取法對黃花忍冬果實(shí)中綠原酸進(jìn)行提取, 經(jīng)高效液相色譜法檢測, 證實(shí)黃花忍冬果實(shí)中含有綠原酸, 經(jīng)外標(biāo)法測定其含量為0 .28 % 。 ( 2) 目前黃花忍冬多數(shù)為城市的綠化樹種, 其果實(shí)是一種尚未被開發(fā)利用且很有價值的藥用資源, 我國黃花忍冬果實(shí)資源極為豐富, 需要對其進(jìn)行開發(fā)研究, 使之得到合理應(yīng)用。通過該實(shí)驗(yàn)證實(shí), 黃花忍冬果實(shí)中含有綠原酸且其含量較高, 這為黃花忍冬果實(shí)的綜合開發(fā)利用奠定了基礎(chǔ)。 參考文獻(xiàn) [1] 李會軍, 李萍. 忍冬花蕾的化學(xué)成分研究[J] . 林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè),2005,25(3) :29- 32. [2] 中國藥典委員會. 中國藥典: 一部[ M] . 北京: 化學(xué)工業(yè)出版社,2000 :177 . [3] 邢俊波, 李萍. 忍冬屬化學(xué)成分研究概況及展望[J] . 中藥材,1999 ,22(7) :366 - 370. [4] 鄧素蘭, 余繼宏, 鄧芳琴. 金銀花中綠原酸提取工藝的對比[J] . 吉首大學(xué)學(xué)報(bào): 自然科學(xué)版,2007,28(2) :109- 112 . 產(chǎn)品鏈接： 杜仲提取物 綠原酸 金銀花提取物 苦杏仁苷 枇杷葉提取物-熊果酸 大花紫薇提取物-科羅索酸 上禾生物 專注植提 精于高純 基于您對天然產(chǎn)物需求持續(xù)創(chuàng)新 |
