HPLC 測定川菊中綠原酸的含量 | HPLC 測定川菊中綠原酸的含量 |
| 發(fā)布時間:2010-11-10 信息來源:admin 發(fā)布人:admin 點擊次數(shù):3197 |
楊振萍 劉思曼a 邊清泉①a (西南科技大學理學院 四川省綿陽市 621000) a (綿陽師范學院化學系 四川省綿陽市仙人路一段30 號 621000) 摘 要 建立川菊中綠原酸含量的檢測方法。采用高效液相色譜法, 以綠原酸為指標, D iamonsilTM C18 柱(4. 6mm ×150mm , 5um) ; 0. 1mo l·L - 1的N aH2PO 4-CH3OH (7. 3∶2. 7) 為流動相, 檢測波長為326nm。平均回收率為101. 5% ,RSD= 4. 8%。進樣量在0. 092—0. 552ug, 線性關(guān)系良好, r= 0. 9989。該方法簡便、穩(wěn)定、重現(xiàn)性好, 為菊花質(zhì)量的控制提供參考。 關(guān)鍵詞 高效液相色譜, 川菊, 綠原酸。 1 引言 菊花為常用中藥, 是菊科植物菊(Chrysan the mum morif olium Ram at. ) 的干燥頭狀花序, 含有揮發(fā)油、黃酮類、綠原酸等多種有效成分[ 1 ]。味甘苦, 性涼; 具有散風清熱, 平肝明目的功效, 主要用于風熱感冒, 頭痛眩暈, 目赤腫痛等癥[ 2 ]。綠原酸、異綠原酸是菊花有效活性成分之一, 現(xiàn)代藥理研究認為, 綠原酸具有抗菌、抗病毒、抗氧化、抗誘變、抗血小板凝固、保肝利膽等多種保健和藥理作用[ 3—5 ] , 是具有較高藥用價值的活性成分, 綠原酸含量是衡量川菊藥用價值重要指標。目前對植物中綠原酸的定量分析已有大量報道, 關(guān)于菊花中綠原酸含量的測定也有報道[ 6, 7 ]。但是, 關(guān)于川野菊、川金菊中綠原酸含量的HPLC 法測定尚未見報道, 因此, 本實驗建立川野菊、川金菊中綠原酸含量的檢測方法, 以供菊花為原料的制藥企業(yè)選擇原料和質(zhì)量檢測時參考。 2 實驗部分 2. 1 儀器與材料 LC26AD 型高效液相色譜儀(日本島津公司) , 包括SPD210AU P 檢測器, CLA SS2vp 5. 0 色譜數(shù)據(jù)處理工作站, CTD26A 色譜柱溫箱; 綠原酸對照品(供含量測定用, 批號: 086129902, 中國藥品生物制品的檢定所) ; 川野菊、川金菊購于綿陽天誠大藥房, 經(jīng)綿陽師范學院分子生物學與生物制藥重點實驗室劉家琴博士鑒定為菊科植物菊的干燥頭狀花序; 甲醇、乙腈為色譜純, 其他試劑均為AR 級; 實驗用水為二次重蒸餾水。 2. 2 色譜條件 色譜柱為D iamon silTMC18 (4. 6mm ×150mm , 5um ) ; 0. 1mo l·L - 1 N aH2PO 4-CH3OH (7. 3∶2. 7) 為流動相; 檢測波長為: 326nm; 柱溫: 32℃; 進樣量: 10uL; 理論塔板數(shù)按綠原酸峰計算大于4500。 2. 3 樣品的處理 樣品經(jīng)干燥、粉碎后過50 目篩, 準確稱取川野菊0. 5g, 加入30mL 90% 的丙酮超聲提取 30m in, 過濾, 濾渣用8mL 90% 的丙酮超聲洗滌2 次, 合并濾液, 定容至50mL , 0. 45um 的微孔濾膜過濾, 取續(xù)濾液待測。樣品溶液的濃度為10. 0m g·mL - 1。同法制備川金菊樣品溶液。 3 結(jié)果與討論 3. 1 校準曲線的制作 對照品溶液的制備, 準確稱取綠原酸對照品4. 6m g, 置于100mL 容量瓶中, 加水定容至刻度,得到46ug·mL - 1對照品溶液。待測。取綠原酸的對照品溶液(46Lg·mL - 1) , 分別進樣2、4、6、8、10、12LL , 按2. 2 項下測定綠原酸的峰面積, 以對照品進樣量x (Lg) 對峰面積均值y 進行線性回歸, 得到直線方程y = 31968. 5x -17398. 9, r= 9989。線性范圍0. 092—0. 552Lg。 3. 2 精密度試驗 分別取綠原酸對照品溶液10LL , 按2. 2 項下連續(xù)進樣5 次, 結(jié)果綠原酸的峰面積分別為741388、743694、744881、741438、743354, RSD= 2. 0% (n= 3)。 3. 3 供試品溶液穩(wěn)定性試驗 取供試品溶液, 每隔2h 進樣1 次, 連續(xù)進樣5 次, 測定綠原酸的峰面積, RSD = 1. 4% , 結(jié)果表明, 供試品溶液在8h 內(nèi)基本穩(wěn)定。 3. 4 重現(xiàn)性試驗 準確稱取川野菊樣品粉末5 份, 各0. 5g, 按2. 3 項制備供試品溶液, 分別重復測定3 次, 結(jié)果綠原酸含量均值分別為5. 9、6. 0、6. 2、5. 8、5. 8m g·g- 1, RSD 為2. 8% (n= 5)。 3. 5 回收率試驗 取川野菊樣品溶液5 份, 分別加入適當量的綠原酸的對照品, 計算回收率, 結(jié)果見表1。 3. 6 樣品的測定 在2. 2 項色譜條件下對2 種供試品和對照品溶液行色譜, 見圖1。按外標一點法計算各樣品中綠原酸的含量, 結(jié)果川野菊、川金菊中綠原酸含量分別為6. 0、4. 6m g·g- 1, RSD 分別為1. 6%、2. 7% (n= 3)。
3. 7 檢測波長的確定 用DAD 檢測器在本實驗溶劑體系條件下, 分析了綠原酸對照品色譜峰和2 種樣品中目標組分相應色譜峰的紫外光譜, 結(jié)果二者的紫外光譜基本一致, 綠原酸326nm 有最大吸收。該處待測組分與雜質(zhì)峰基本能使基線分離, 檢測靈敏度高, 確定檢測波長為326nm。 3. 8 流動相體系的選擇 文獻[6—8 ]流動相分別為CH3CN ∶0. 4% H3PO4 (25∶75) ; 0. 1mo l·L - 1 NaH2PO4∶CH3OH ( 7∶3) ; 0. 1mo l·L - 1磷鹽緩沖溶液(pH = 2. 65) ∶CH3OH (76∶24) 等流動相體系, 本實驗考察對比后認為采用0. 1mo l·L - 1 N aH2PO 4∶CH3OH (7. 3∶2. 7) 體系能使綠原酸與其他組分有效分離(R> 1. 5) , 保留值適宜, 柱后處理簡便。 3. 9 目標組分萃取程度的確定 經(jīng)過對2 種川野菊、川金菊樣品萃取目標組分后的藥渣HPLC 檢測, 無待測組分特征峰出現(xiàn),說明樣品經(jīng)丙酮超聲萃取3 次后, 綠原酸已萃取完全。 4 結(jié)論 川野菊、川金菊樣品中綠原酸含量測定結(jié)果說明, 兩者的有效成分綠原酸含量均較高, 該品種可供綠原酸為活性成分的制劑業(yè)作為原料選擇。其它活性成分的測定有待進一步研究。
參考文獻 [ 1 ] 黃泰康. 常用中藥成分與藥理手冊[M ]. 北京: 中國醫(yī)藥科技出版社, 1994. 1565. [ 2 ] 國家藥典委員會編. 中華人民共和國藥典(一部) [M ]. 北京: 化學工業(yè)出版社, 2000. 254. [ 3 ] Ito H,M iyazak i T,Ono M et al. A ntiallergic A ctivities of Rabdo siin and Its Related Compounds: Chem ical and Biochem ical E2 valuations[J ]. B ioorg. M ed. Chem. , 1998, 6 (7) : 1051. [4 ] J iang Y, Kusama K, Satoh K et al. Induction of Cyto toxicity by Ch lo rogenic A cid in Human O ral Tumo rcell L ines [J ]. P hy 2 tom ed icine, 2000, 7 (6) : 483. [ 5 ] 高錦明, 張鞍林, 張康健. 綠原酸分布、提取與生物活性研究綜述[J ]. 西北林學院學報, 1999, 14 (2) : 73—82. [ 6 ] 桑旭峰, 吳海雯. 徐奇超. HPLC 同時測定銀黃口服液中綠原酸和芩苷含量[J ]. 中成藥, 2005, 27 (1) : 96—98. [ 7 ] 寧文. 菊花不同炮制品中揮發(fā)油和綠原酸含量的測定[J ]. 廣亞中醫(yī)藥, 2003, 26 (5) : 56—57. [ 8 ] 李鵬, 陳科力, 葉從進. 湖北福田河白菊質(zhì)量研究[J ]. 中藥材, 2004, 27 (2) : 102—103. 產(chǎn)品鏈接： 杜仲提取物 綠原酸 金銀花提取物 苦杏仁苷 枇杷葉提取物-熊果酸 大花紫薇提取物-科羅索酸 上禾生物 專注植提 精于高純 基于您對天然產(chǎn)物需求持續(xù)創(chuàng)新 |
