高效液相色譜法測(cè)定虎杖中大黃素的含量 | 高效液相色譜法測(cè)定虎杖中大黃素的含量 |
| 發(fā)布時(shí)間:2021-02-04 信息來(lái)源:admin 發(fā)布人:admin 點(diǎn)擊次數(shù):744 |
| 虎杖不僅供觀賞，也做食品，嫩莖做蔬菜，根做冷飲料，置涼水中鎮(zhèn)涼(冰箱冰鎮(zhèn)尤佳》名，“冷飲子”，清涼解暑代茶。它的液汁可染米粉，別有風(fēng)味。食用以其味酸故也稱“酸湯桿”。 虎杖收載于《中國(guó)藥典》2000年版一部，采用分光光度法測(cè)定總葸醌控制含量�；⒄群祯愌苌�，以游離型為主，有大黃素、大黃素甲醚、大黃酚等成分?，本文采用高效液相色譜法測(cè)定虎杖藥材中大黃素的含量，方法快速、方便、可靠。  1儀器與試藥 Agilent1100型組合式全自動(dòng)高效液相色譜儀�；⒄人幉�(市售)，大黃素對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，供含量測(cè)定用)，甲醇為色譜純，其它試劑均為分析純。 2方法和結(jié)果 2.1色譜條件 色譜柱：KromasilC18(250mm×4.6mm，5μm)，流動(dòng)相：甲醇-0.1%磷酸溶液(85:15)，流速：1.0mlmin，柱溫：室溫，測(cè)定波長(zhǎng)：254nm，用外標(biāo)法檢測(cè)，進(jìn)樣量：5.OμL。 2.2供試品溶液的制備 取本品粉末(過(guò)三號(hào)篩)約0.5g(同時(shí)另取本品粉末在105℃測(cè)定干燥失重)，精密稱定，置100ml容量瓶中，加甲醇約80ml，超聲處理(功率250W，頻率30kHz)30min，放冷至室溫，加甲醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，精密量取續(xù)濾液10ml，置100ml圓底燒瓶中，揮去甲醇，加2.5mol/L硫酸溶液20ml，加熱回流1h，冷卻，加氯仿30nIl，繼續(xù)回流2h，分取氯仿層，酸液用氯仿提取3次，每次5ml，合并氯仿提取液，通過(guò)裝有無(wú)水硫酸鈉的漏斗，置50ml容量瓶中，濾器用少量氯仿洗滌，洗液并人濾液中，加氯仿至刻度，搖勻，精密量取氯仿液10ml，水浴蒸干，殘?jiān)蛹状歼m量使溶解，置25ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液。 2.3對(duì)照品溶液的制備 精密稱取大黃素對(duì)照品9.81mg，置100ml容量瓶中，加甲醇適量使溶解，并加甲醇至刻度，搖勻，作為對(duì)照品儲(chǔ)備液(濃度為0.0981mg/ml)。精密量取lml，加甲醇稀釋至25ml，作為對(duì)照品溶液。 2.4線性關(guān)系考察 將上述大黃素對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣2.0μL、4.0μL、6.0μL、8.0μL、10.0μL、12.0μL。記錄峰面積，以峰面積(Y)對(duì)進(jìn)樣量(X)作圖，得標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程：Y=4.0387×103X一0.844，r=0.9999，線性范圍為7.848×10-3～4.709×10-2. 2.5精密度試驗(yàn) 取同一供試品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，結(jié)果RSD為0.2%，表明精密度良好。 2.6重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批虎杖樣品5份，按上述方法測(cè)定大黃素的含量，結(jié)果RSD為0.5%。 2.7溶液穩(wěn)定性試驗(yàn) 取“2.6”項(xiàng)下供試品溶液，在0，4，8，12，16，20，24h分別進(jìn)樣5μL，記錄峰面積，結(jié)果峰面積的RSD為0.9%，表明供試品溶液在24h內(nèi)均穩(wěn)定。 2.8回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量為1.6%樣品適量，分別精密加入大黃素對(duì)照品儲(chǔ)備液15ml，按上述方法測(cè)定，計(jì)算加樣回收率。 2.9樣品測(cè)定 取虎杖藥材按上述方法測(cè)定樣品中大黃素的含量，結(jié)果見表2。將對(duì)照品溶液、供試品溶液分別進(jìn)樣sva，依本法測(cè)定，樣品和對(duì)照品在同一保留時(shí)間位置上有一相應(yīng)的色譜峰。 3討論 取大黃素對(duì)照品溶液，在200～400nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行掃描，結(jié)果顯示在219nm、254nm、292nm處均有最大吸收峰，由于254nm處的吸收度較強(qiáng)且不受溶劑峰干擾，故選擇254nm作為測(cè)定吸收波長(zhǎng)，與《中國(guó)藥典》規(guī)定一致。 實(shí)驗(yàn)表明，本品經(jīng)水解后再用氯仿提取4次，大黃素已基本提取完全。 從線性、回收率、重現(xiàn)性、溶液穩(wěn)定性等試驗(yàn)結(jié)果可以看出，用HPLC法測(cè)定虎杖中大黃素的含量，準(zhǔn)確性高，重現(xiàn)性好，且操作簡(jiǎn)便快速。
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