高效液相色譜法測定痔瘡片中大黃素和大黃酚的含量 | 高效液相色譜法測定痔瘡片中大黃素和大黃酚的含量 |
| 發(fā)布時間:2010-11-12 信息來源:admin 發(fā)布人:admin 點擊次數(shù):2627 |
薛漓(廣西梧州藥品檢驗所，廣西梧州543002) 摘要：目的建立痔瘡片中大黃素和大黃酚的含量測定方法。方法 高效液相色譜法。Kromarsil C-s柱，甲醇-o．1 磷酸液(90：10)為流動相，流速為lmL／min，檢測波長254nm。結(jié)果痔瘡片中大黃素和大黃酚能有效分離，且無雜質(zhì)干擾。大黃素進(jìn)樣量在0．046~0．230~g，大黃酚進(jìn)樣量在0．100~0．500btg，均呈良好線性關(guān)系，r=O．9998。大黃素和大黃酚平均回收率分別為99．7 和96．1 (n=5，RSD分別為l_1 和1，9 )。結(jié)論本法準(zhǔn)確、可靠�？勺鳛橹摊徠馁|(zhì)量控制方法。 關(guān)鍵詞：痔瘡片；大黃素；大黃酚；高效液相色譜法 痔瘡片由大黃、白芷、蒺藜、功勞木等六味中藥組成。具有清熱解毒、涼血止痛等功效，用于各種痔瘡、肛裂、大便秘結(jié)。已收載于國家藥品標(biāo)準(zhǔn)。但現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅有TLC鑒別而無含量測定指標(biāo)。為了更好地控制藥品質(zhì)量，我們選取本品中大黃的代表成分大黃素和大黃酚作為質(zhì)控指標(biāo)，對其含量測定方法進(jìn)行了研究，為進(jìn)一步完善其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了參考依據(jù)。 1 儀器與試藥 高效液相色譜儀：Waters 501泵，484檢測器，U6K進(jìn)樣器，SP4290積分儀。 大黃素對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：756—9023，大黃酚對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：0796—9404)，甲醇、磷酸等溶劑均為分析純。 痔瘡片(廣西梧州市玉蘭藥廠，批號：990504，980806，990705，990403，970301)。 2 色譜條件 色譜柱：Kromarsil Cl8(250mmX 4．6mm)。大連化學(xué)物理研究所。流動相：參照中國藥典三黃片中大黃的測定條件調(diào)節(jié)比例，甲醇一0．1 磷酸(90：10)，流速：lmL／min，檢測波長：254nm。 系統(tǒng)適用性試驗：按上述條件，理論塔板數(shù)按大黃素峰計算為5 300，按大黃酚峰計算為5 500，二者的分離度為4．9，連續(xù)進(jìn)樣5針，大黃素和大黃酚峰面積的RSD均為0．5 0A。 3 對照品及供試品的制備 對照品溶液的制備：分別精密稱取大黃素和大黃酚對照品適量，加無水乙醇一醋酸乙醋(2：1)制成每lmL含大黃素0．Olmg，大黃酚0．025m_g的混合溶液，即得。 供試品溶液的制備：取本品2O片，除去糖衣，精密稱定，研細(xì)(過三號篩)，精密稱取適量(約相當(dāng)于2片)置錐形瓶中，精密加乙醇25mL，密塞，稱定重量，加熱回流1h，放冷，用乙醇補足減失的重量，濾過。精密量取續(xù)濾液10mL，置燒瓶中，水浴蒸干，加3O 乙醇一鹽酸(10：1)溶液15nlL，水浴加熱水解1h，立即冷卻，置分液漏斗中，加氯仿強力振搖提取4次，每次15mL，合并氯仿液，水浴蒸干，殘渣用無水乙醇一醋酸乙酯(2：1)溶解，移入25mL量瓶中，并稀至刻度，搖勻，微孔濾膜(O．45~m)濾過，取續(xù)濾液即得。另取不含大黃的陰性樣品適量，同法制成陰性對照溶液，按上述色譜條件測定，結(jié)果表明陰性對照品無干擾。 4 檢測 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10ul，注入液相色譜儀，測定，以峰面積外標(biāo)法計算含量，即得。 5 線性關(guān)系考察 精密吸取對照品溶液4，5，7．5，1O，15，20ul，分別進(jìn)樣分析，測定峰面積，以峰面積值為縱坐標(biāo)，對照品進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，作線性回歸，得回歸方程，大黃素Y=98．813X—10．807；大黃酚Y=1．990X+146．334；r=0．9998，結(jié)果表明，大黃素在0．04610．230ug，大黃酚在0．100~0．500ug內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。 6 精密度試驗 取同一批號樣品的供試液，重復(fù)進(jìn)樣5次，測定，峰面積值分別為：大黃素164，170，167，166，166，平均值：166．8，RSD=1．3 ；大黃酚485，490，489，489，487，平均值：487．8，RSD=0．4 ，精密度良好。 7 穩(wěn)定性試驗 取同一批號的供試品液分別在2，5，1O，15h進(jìn)行測定，結(jié)果表明在15h內(nèi)基本穩(wěn)定(RSD=1．5 )。 8 重現(xiàn)性試驗 取同一批號的樣品，分別取樣5份，按供試品溶液制備方法制備，進(jìn)樣，測定，結(jié)果(mg／g)：大黃素0．205，0．201，0．203，0．207，0．209，平均值：0．205，RSD=1．6 ；大黃酚0．822，0．828，0．823，0．831，0．802，平均值：0．821，RSD=1．4 ，表明本方法重現(xiàn)性良好。 9 加樣回收率試驗 精密稱取已測定含量的樣品(tit號：970301)約0．4g，精密加入適量大黃素和大黃酚對照品，按含量測定方法測定，計算回收率，5次實驗結(jié)果分別為(％)：大黃素99．7，100．9，99．2，100．6，98．2，平均回收率99．7 ，RSD=1．1 ；大黃酚94．7，98．9，96．8，94．3，96．0，平均回收率96．1 ，RSD=1．9 。 1O 樣品測定 取樣品5批，按上述方法測定含量，結(jié)果見表l。表1 樣品測定結(jié)果( %,n=2)
11討論 大黃作為痔瘡片的主藥之一，已知其主要有效成分為蒽醌類，其中又含結(jié)合蒽醌和游離葸醌。為了便于測定，本實驗參照三黃片的含量測定方法，把結(jié)合蒽醌水解后測定其苷元大黃素和大黃酚。實驗證明，三黃片含量測定的提取、水解及HPLC條件也適合于本品的含量測定。從所測5批樣品結(jié)果看，其含量相差較遠(yuǎn)，可能主要與大黃原料的質(zhì)量不同有關(guān)。至于其生產(chǎn)工藝對含量有何影響，生產(chǎn)中其葸醌的提取率如何，產(chǎn)品含量限度指標(biāo)的合理制定等，還有待于進(jìn)一步研究。為了更好地控制痔瘡片的質(zhì)量，建議修訂本品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，增加大黃葸醌的含量測定項目。 產(chǎn)品鏈接： 杜仲提取物 綠原酸 金銀花提取物 苦杏仁苷 枇杷葉提取物-熊果酸 大花紫薇提取物-科羅索酸 上禾生物 專注植提 精于高純 基于您對天然產(chǎn)物需求持續(xù)創(chuàng)新 |
