金銀花超微飲片的HPLC指紋圖譜研究 | 金銀花超微飲片的HPLC指紋圖譜研究 |
| 發(fā)布時間:2010-11-22 信息來源:admin 發(fā)布人:admin 點擊次數(shù):2835 |
蔡光先 ， 李順祥 ， 蔣煒 【摘要】 目的研究金銀花超微飲片的HPLE指紋圖譜，考察其有效成分及含量，為金銀花的質(zhì)控提供可靠方法。方法色譜柱為大連依利特公司Hypersil BDS C18(4．6mm×200ram，5vm)柱。流動相為甲醇一0．05％磷酸水溶液(9．8：90．2)，柱溫為25℃ ，流速為1．0ml／min，檢測波長為246nm。結(jié)果 建立了金銀花超微飲片的HPLE指紋圖譜，標定了12個共有峰。結(jié)論利用HPLE指紋圖譜可以較全面地控制金銀花超微飲片的內(nèi)在質(zhì)量。 關(guān)鍵詞 金銀花超微飲片HPLE指紋圖譜高效液相色譜法 金銀花為忍冬科植物忍冬(Lonicerae iaponica Thunb)、紅腺忍冬(L．hypoglauca Mip)、山銀花(L．confusa DC)或毛花柱忍冬(L．dasystyla Rehd)的干燥花蕾或帶初開的花⋯ ，湖南產(chǎn)灰氈毛忍冬(L．macranthoides Hand．一Mazz)E2]將列入新版藥典。本品為傳統(tǒng)中藥，具有清熱解毒、涼風(fēng)散熱的作用。本實驗對13批不同地區(qū)的商品金銀花藥材制成的超微飲片進行測定，并進行方法學(xué)考察，初步建立了指紋圖譜，標定了12個共有指紋峰，其中綠原酸為對照品。 1 儀器與試劑 島津(Shimadzu)LC一10A高效液相色譜儀(配有Lc一10Avp輸液泵，SPD一10Avp紫外檢測器，柱溫箱)。綠原酸對照品(chlorogenic acid，批號0753—200111，供含量測定用中國藥品生物制品檢定所提供)，甲醇為色譜純，水為雙蒸水，其余試劑為分析純。13批商品金銀花藥材購自四川、杭州、甘肅、北京、湖南等地，經(jīng)湖南中醫(yī)藥研究院中藥研究所生藥室謝昭明研究員鑒定分別為忍冬(Lonicerae iaponica Thunb)、灰氈毛忍冬(L．macranthoides Hand．一Mazz)，分別加工成超微飲片。 2 方法與結(jié)果 2．1 供試品溶液的制備精密稱取超微飲片粉末0．2g(共13種)，置50ml量瓶中，加50％ 甲醇約50ml，超聲處理30min，放冷，用50％ 的甲醇精密加至刻度，0．45tan微孔濾膜濾過，即得。 2．2 對照品溶液的制備精密稱取綠原酸對照品4mg于50ml的棕色容量瓶中，加50％ 的甲醇定容至刻度，搖勻，即得(10℃ 以下保存)。 2．3 色譜條件 色譜柱為大連依利特公司Hypersil BDSC18柱(4．6mm×200min，5tam)。色譜條件：流動相為甲醇一0．05％磷酸水溶液(9．8：90．2)，柱溫為25℃ ，流速為1．0ml／min，檢測波長為246nm。該條件下金銀花超微飲片獲得好的分離，見圖1。 2．4 方法學(xué)考察 2．4．1 精密度實驗取同一份金銀花(忍冬)超微飲片的供試品連續(xù)進樣5次，比較共有指紋峰的相對保留時問和相對峰面積，結(jié)果表明各共有指紋峰的相對保留時問和相對峰面積基本一致。符合指紋圖譜的檢測要求。見表1、表2。 2．4．2 穩(wěn)定性試驗取同一份金銀花超微飲片的供試品溶液，分別在制備后1⋯4 8 16、24、48h進樣，比較各共有指紋峰的相對保留時間和相對峰面積，結(jié)果表明各共有指紋峰的相對保留時間和相對峰面積基本一致，RSD<2％ ，表明樣品在48h內(nèi)穩(wěn)定，符合指紋圖譜的檢測要求。 2．4．3 重現(xiàn)性試驗取同一批金銀花(忍冬)超微飲片樣品5份，按供試品溶液制備方法分別制備供試品溶液，比較各共有指紋峰的相對保留時間和相對峰面積，結(jié)果表明各共有指紋峰的相對保留時間和相對峰面積基本一致。符合指紋圖譜的檢測要求。 2．5 指紋圖譜的建立 2．5．1 共有指紋峰的標定采用相對保留時間標定共有指紋峰：以圖譜中綠原酸為參照物(s)，
將各色譜峰保留時間與同一圖譜中參照物的保留時間比較，其比值為各色譜峰的相對保留時間，見表3。 2．5．2 共有指紋峰的相對峰面積 以圖譜中綠原酸為參照物(s)，將各共有指紋峰峰面積與同一圖譜中參照物的峰面積比較，其比值為各共有指紋峰的相對峰面積。根據(jù)《中藥注射劑指紋圖譜研究的技術(shù)要求》的規(guī)定 J，單峰峰面積占總峰面積<10％時，峰面積比值不作要求，僅需標定相對保留時間，但我們將其全部標出。見表4。 2．6 金銀花超微飲片中綠原酸的含量測定 2．6．1 綠原酸線性關(guān)系考察與含量測定 照《中國藥典》⋯ 金銀花項下的含量測定條件，精密量取配置好的綠原酸對照品不同濃度溶液，進樣測定，以綠原酸進樣量為橫坐標，以峰面積響應(yīng)值為縱坐標，繪標準曲線，得回歸方程：Y= 1868110．526X+19735(r=0．9995)。綠原酸在0．19 ~0．95ug范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。精密吸取對照品溶液10ul，供試品溶液10ul，分別注人高效液相色譜儀，測定峰面積，計算，即得。
2．6．2 13批不同來源金銀花的超微飲片的綠原酸含量比較見表5。結(jié)果顯示，金銀花產(chǎn)地、品種不同，其超微飲片的綠原酸含量有較大差別。湖南產(chǎn)灰氈毛忍冬L．macranthoides Hand。一Mazz的綠原酸含量高于其他產(chǎn)地與品種。 2．7 相似度計算采用中南大學(xué)“計算機輔助相似性評價系統(tǒng)”進行相似度計算。有關(guān)參數(shù)設(shè)置如下，預(yù)處理：數(shù)據(jù)壓縮5000×11，壓縮層數(shù)2；數(shù)據(jù)平滑：使用移動窗口多項式最小二乘擬合平滑；數(shù)據(jù)平移：三標準峰平移。譜峰處理：譜峰識別所有指紋圖譜同一閾值0．02；自動譜峰匹配。相似度計算結(jié)果見圖2。 2．8 不同植物來源的金銀花(忍冬Lomcerae iapomca Thunb與灰氈毛忍冬L．macran~oides Hand．一Mazz．)的指紋比較見圖3。
3 討論 超微飲片是我院研制的一種微米級新型中藥飲片，因其原藥材的形狀、顯微特征已不存在，采用指紋圖譜技術(shù)來控制其質(zhì)量具有較強的專屬性。本試驗所用的對照品為綠原酸，參照《中國藥典》中金銀花下的含量測定方法⋯1制備供試品溶液，參照文獻[4,5]，試驗出選擇甲醇一0．05％磷酸水溶液(9．8：90．2)為流動相的分離效果比較好，保留時間也適合。在試驗中我們比較了220、246、327nm等不同的波長金銀花藥材峰的個數(shù)，發(fā)現(xiàn)金銀花藥材在較高的波長上峰的個數(shù)減少，檢測波長定為246nm較宜。對13批不同地區(qū)的商品金銀
花制成的超微飲片進行了綠原酸的含量測定，結(jié)果表明金銀花因產(chǎn)地的不同，其有效成分的含量也有較大的差異。以其抗菌成分綠原酸作為判斷指標，則湖南邵陽隆回小沙江產(chǎn)灰氈毛忍冬的質(zhì)量最佳。在含量測定中，湖南邵陽隆回小沙江產(chǎn)灰氈毛忍冬的綠原酸的含量均高于其他產(chǎn)地的金銀花。另外，購自深圳二天堂和深圳萬澤的金銀花經(jīng)鑒定其品種也是灰氈毛忍冬，其綠原酸的含量也超出其他批次的綠原酸的含量，可以推斷灰氈毛忍冬的質(zhì)量優(yōu)于忍冬的質(zhì)量。不同植物來源的金銀花超微飲片HPLC指紋圖譜差別較大。通過對灰氈毛忍冬與忍冬的指紋圖譜進行比較可知它們在峰的個數(shù)及峰的相對強度方面均有區(qū)別。不同的超聲提取時間對藥材的綠原酸的提出率也有一定的影響。相似度計算結(jié)果表明，四組相似度的參數(shù)均在0．9以上，說明建立的指紋圖譜相似度較好。 參考文獻 1 國家藥典委員會．中國藥典20O0年版．一部．北京：化學(xué)工業(yè)出版社，20O0，177． 2 湖南省衛(wèi)生廳．湖南省藥材標準．長沙：湖南科技出版社，1993．191—192． 3 國家藥品監(jiān)督管理局．中藥注射劑指紋圖譜研究的技術(shù)要求(暫行)．中草藥，20O0，2(10)：671—575． 4 馮文宇，彭峰，何兵，等．金銀花及其提取物指紋圖譜研究．瀘州醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2003，26(4)：283—286． 5 劉艷娥，吳玫涵，吳玉田，等．金銀花藥材高效液相指紋圖譜研究．解放軍藥學(xué)學(xué)報，2003，19(3)：161—164 產(chǎn)品鏈接： 杜仲提取物 綠原酸 金銀花提取物 苦杏仁苷 枇杷葉提取物-熊果酸 大花紫薇提取物-科羅索酸 上禾生物 專注植提 精于高純 基于您對天然產(chǎn)物需求持續(xù)創(chuàng)新 |
