水提醇沉法從葵花籽中提取綠原酸 | 水提醇沉法從葵花籽中提取綠原酸 |
| 發(fā)布時(shí)間:2010-12-17 信息來源:admin 發(fā)布人:admin 點(diǎn)擊次數(shù):3622 |
鄭喜群1,2，蔣繼豐1，劉曉蘭1，孫秀云1 (1．齊齊哈爾大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院，黑龍江齊齊哈爾 161006： 2．中國農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與營養(yǎng)工程學(xué)院，北京 100083) 摘 要：綠原酸具有抗菌、抗病毒、抗氧化等生物活性�？ㄗ迅缓G原酸。以水酶法提取葵花籽油脂后分離出的水浸提液為原料，采用醇沉淀法去除浸提液中的多糖，抽濾濃縮濾液后得到綠原酸。多次實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，浸提液濃縮到固形物含量在13％ 時(shí)，加入浸提濃縮液體積l倍量的95％ 的乙醇沉淀并過濾掉多糖，反復(fù)處理兩次，濾液再經(jīng)真空濃縮得到純度76％ 左右的綠原酸。 關(guān)鍵詞：葵花籽；浸提液：綠原酸； 多糖 綠原酸(chlorogenic acid)又名咖啡酸，是植物在有氧呼吸過程中產(chǎn)生的一種物質(zhì)，分子式C H-sO，，分子量345．30。綠原酸主要存在于杜仲、金銀花，葵花籽中，是半水狀化合物或微黃色針狀晶體，25℃時(shí)在水中溶解度為4％，熱水中溶解度更大，并且隨溫度降低溶解度逐漸降低[1]。綠原酸易溶于乙醇、丙酮，微溶于乙酸乙酯，難溶于氯仿、乙醚等極性有機(jī)溶劑[2]。毒性很小，幼大鼠口服LD s0大于1g／G。綠原酸具有廣泛的生物活性，對急性咽喉炎癥的化膿，皮膚病有顯著療效， 具有抗菌、抗病毒、止血、增高白血球[3]，縮短血凝和出血時(shí)間作用，還具有抗氧化作用， 消除體內(nèi)自由基[4]， 抑制突變和抗腫瘤作用[5]。綠原酸及其衍生物在抗HIV的研究中表現(xiàn)出一定的抑制效果。對綠原酸生物活性的研究已經(jīng)逐漸深入到食品、保健品、醫(yī)藥和日用化工等多個(gè)領(lǐng)域[2]。綠原酸因此被稱為植物黃金�，F(xiàn)在的純品綠原酸的市場價(jià)格為每20mg為108．00元。 葵花籽含綠原酸1.0％～4．5％，平均為2．8％，從葵花籽中提取綠原酸具有實(shí)用價(jià)值， 同時(shí)還能避免由于綠原酸的存在引起葵花分離蛋白變黑的現(xiàn)象[1]。本文采用的原料是水酶法葵花籽提油后離心分離出的水浸提液，該液體中含有綠原酸、低聚糖、少量蛋白及果膠等，采用水提醇沉方法提取綠原酸。目前國內(nèi)以水酶法提取葵花籽油脂后分離出的水浸提液為原料提取綠原酸的研究還未見其它報(bào)道。 1 材料與方法 I．I 原料與試劑 葵花籽： 市售： 浸提液：葵花籽水酶法提取油脂后的浸提液，呈深綠色，固形物含量在5％～6％之間，略顯渾濁過濾后放置備用。 綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品： 中國藥品生物制品鑒定所產(chǎn)品。 1．2 儀器 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器：上海亞榮生化儀器廠；離心機(jī)：北京離心機(jī)廠。 1．3 方法 1．3．1 綠原酸含量的測定【 】 采用紫外分光光度法。精確稱取綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品5．5 mg，置于5Oml容量瓶中，搖勻配制成綠原酸標(biāo)準(zhǔn)液，取0，5、0．75、I．O0、I．25、2．O0、2．50m1分別置于10ml比色管中，稀釋至刻度 用分光光度計(jì)在200~800nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行掃描。找到最大吸收波長329nm。在329nm處測吸光度OD，以綠原酸標(biāo)品濃度為橫坐標(biāo)，以O(shè)D 為縱坐標(biāo)繪圖， 以30％ 甲醇做參比，得到回歸方程：A=42．763C+0．0259，R=0．998，其中C代表濃度㈣，A代表吸光度。將經(jīng)真空冷凍干燥得浸提樣品200．0mg，用30％的甲醇溶解至100ml，從中吸取1ml再定容到100ml，取樣在329nm下測吸光度值，代入回歸方程計(jì)算樣品中綠原酸的含量。例如：測得吸光度為0．652，計(jì)算可得C=0．0156g／L，可計(jì)算出200．0mg粗品綠原酸中綠原酸的質(zhì)量為156．0，因此，綠原酸的純度為：156．0／200．0×100％=78％。 1．3．2 總糖的測量 采用葸酮比色法。 1．3-3 綠原酸的提取工藝流程 水酶法提油后分離出的水浸提液一過濾一真空濃縮到適合固形物濃度-．-an入95％ 的乙醇一抽濾一濾液收集一再次加入95％ 的乙醇一抽濾一收集濾液一合并兩次濾液一真空濃縮一冷卻收集析出的晶體。 2 結(jié)果與討論 葵花籽中含綠原酸1．0％～1．5％，多糖12％左右。水酶法提油后分離出的水浸提液中主要含有綠原酸、多糖、少量蛋白、果膠等。提取綠原酸的最大障礙是多糖。綠原酸和多糖都易溶解于水，但綠原酸還易溶于乙醇，而多糖類物質(zhì)難溶于乙醇，采用高濃度乙醇沉淀多糖，過濾可將多糖從溶液中除去，可得到純度較高的綠原酸，同時(shí)也得到一定純度的多糖。實(shí)驗(yàn)證明，用95％的乙醇溶液多次沉淀多糖比一次沉淀效果好。由于乙醇在加入浸泡液時(shí)被稀釋，對多糖的沉淀不利，也加大乙醇的用量，從經(jīng)濟(jì)和效率雙方面考慮， 在加入乙醇之前先對浸泡液進(jìn)行真空濃縮，提高溶液中固形物含量。由于綠原酸有長時(shí)間受熱容易分解的性質(zhì)，濃縮過程中要求真空度較高。在提取綠原酸的流程中影響綠原酸提取率的主要因素是真空濃縮后溶液的濃度和每次加入酒精的量。 2．1 浸泡液真空濃縮終點(diǎn)濃度的確定 取浸泡液分裝存燒杯中。真空濃縮到不同的終點(diǎn)濃度，提取綠原酸，稱量綠原酸的質(zhì)量并計(jì)算其純度。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1所示。
表1確定的四個(gè)浸泡液真空濃縮后濃度是根據(jù)多次實(shí)驗(yàn)得出的。離心前，固形物含量在5％～6％ 之間，澄清。當(dāng)浸泡液真空濃縮到固形物含量8％ 左右時(shí)，濃縮液變混濁，離心分離后證明混濁物為蛋白質(zhì)；離心后的清液繼續(xù)濃縮，當(dāng)固形物含量1 3％ 時(shí)，溶液再次變混濁，離心后固體量非常少，測得此固體中含有綠原酸、蛋白和大分子多糖；此時(shí)離心后繼續(xù)濃縮， 當(dāng)固形物含量2 1％ 左右時(shí)，液體明顯變得粘稠，此時(shí)液體中含有的多糖開始析出， 當(dāng)固形物含量31％ 以上時(shí)，液體粘稠度很大，沒有析出物。從純度和綠原酸得率雙面考慮， 當(dāng)真空濃縮到固形物含量為13％ 時(shí)加入乙醇為適宜。固形物含量越低，乙醇加入量越大，后步濃縮量也大，真空濃縮加熱時(shí)間延長，會造成綠原酸的損失。當(dāng)固形物含量1 3％ 以上，隨著多糖濃度的增加，部分多糖會包裹綠原酸，在加入乙醇后，在多糖沉降的同時(shí)包裹的綠原酸也隨之沉降，造成綠原酸的損失。因此，選擇浸泡液真空濃縮到固形物含量1 3％。 2．2 乙醇用量的確定 取浸泡液分裝在燒杯中，確定乙醇的加入量。表2為實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
期的濃縮量。從以 實(shí)驗(yàn)結(jié)果看出， 乙醇與浸泡液的體積比為1：1較適宜。 3 結(jié)論 水酶法提油后的浸泡液進(jìn)行真空濃縮到固形物含量1 3％ 時(shí)，加入此時(shí)溶液量1倍的95％ 乙醇兩次， 沉降多糖，然后繼續(xù)真空濃縮，冷卻可析出純度為75．9％以上的綠原酸。 參考文獻(xiàn)： 【1】 陳少洲．葵粕中綠原酸的研究進(jìn)展與應(yīng)用前景【J】l食品與發(fā)酵工業(yè)，2002，(3)：5 1-52． 【2】 劉軍海，等，綠原酸及其提取純化和應(yīng)用前景【J】．糧食與油脂，2003，(9)：44． 【3】 李新蘭．保健食品開發(fā)及應(yīng)用[M】．武漢：華中理工大學(xué)出版社，2000． 【4】 Ohnishi M，et a1．Inhibitory efects of c~omgemc acids Of lihaleic acid peroxidation and haemdysis[J]．Phytochemistry，1994，36(3)：579-583． 【5】 陳迪華，等．天然多酚成分研究進(jìn)展[M】．國外醫(yī)藥(植物藥分冊)，1997，12(1)：9-15． 【6】 陳乃熾，等，從杜仲葉中提取綠原酸純品的研究【J】．西北林學(xué)院學(xué)報(bào)，1996，(11)：58．60． 產(chǎn)品鏈接： 杜仲提取物 綠原酸 金銀花提取物 苦杏仁苷 枇杷葉提取物-熊果酸 大花紫薇提取物-科羅索酸 上禾生物 專注植提 精于高純 基于您對天然產(chǎn)物需求持續(xù)創(chuàng)新 |
