高效液相色譜法測(cè)定化妝品中熊果酸的含量 | 高效液相色譜法測(cè)定化妝品中熊果酸的含量 |
| 發(fā)布時(shí)間:2010-12-21 信息來源:admin 發(fā)布人:admin 點(diǎn)擊次數(shù):3114 |
田澍，顧學(xué)芳，張其平，張躍華 （南通大學(xué)化學(xué)化工學(xué)院，江蘇南通226O07) 摘要：采用甲醇超聲提取，液相色譜分離的方法測(cè)定化妝品中熊果酸的含量。色譜條件為：Agilent HC—Cl8(250 mm×4．6 mm，5um)色譜柱，流動(dòng)相V(甲醇)：V(水)：V(冰乙酸)=87：13：0.03，流速1．0 mL／min，紫外檢測(cè)波長(zhǎng)215nm。結(jié)果表明，在此條件下熊果酸在0.2 ug／ml~103ug／mL與相應(yīng)的峰面積具有良好的線性關(guān)系(r>0.999 7)，線性回歸方程為Y=25.367 5x+0.546 9，回收率在96．4％ ～101．3％，方法精密度RSD<3．6％。 關(guān)鍵詞：化妝品；熊果酸；高效液相色譜法 熊果酸(uA)，又名烏索酸、烏蘇酸，屬于口一香樹脂醇型五環(huán)三萜類化合物。主要分布在女貞子、山楂、白花蛇舌草等植物中，以游離形式或結(jié)合成糖苷存在。其藥理活性表現(xiàn)在免疫增強(qiáng)、降血糖、抗病毒和抗腫瘤等方面。隨著研究的深入，熊果酸的抗氧化性在美容護(hù)膚品等方面的應(yīng)用被逐漸開發(fā)。作為化妝品，熊果酸性質(zhì)穩(wěn)定，顏色和氣味不隨時(shí)間改變，而且有很好的觸摸感。日本在1983年一2004年的有關(guān)熊果酸的29篇專利中，有l(wèi)0篇是關(guān)于熊果酸的皮膚美容保健方面的應(yīng)用，熊果酸及其鹽或衍生物能作為蛋白酶抑制劑，能有效預(yù)防和治療皮炎、皮膚粗糙、干燥等；熊果酸及其衍生物能抗紫外線、改善和恢復(fù)真皮膠原纖維束結(jié)構(gòu)，起到美白和防皺作用。然而我國(guó)目前對(duì)僅在高檔化妝品中添加的熊果酸在質(zhì)量控制上尚缺乏統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，2005版藥典采用的薄層掃描法測(cè)定的其實(shí)為熊果酸和其同分異構(gòu)體齊墩果酸(OA)的總含量。作者比較了3種不同色譜柱對(duì)UA的分離效果，建立了反相高效液相色譜法測(cè)定化妝品中熊果酸含量的方法，并對(duì)市場(chǎng)上不同品牌中高檔化妝品中UA的含量進(jìn)行了測(cè)定，為建立化妝品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考。 1 實(shí)驗(yàn)部分 1．1 儀器與試劑 Agilent 1100高效液相色譜儀(紫外檢測(cè)器)， Agilent色譜儀器公司；超聲波清洗儀，上海醫(yī)用儀器廠；Mettler AE 240分析天平(1／100 000天平)，梅特勒一托利多(上海)儀器有限公司。熊果酸，99％，中國(guó)藥品生物制品鑒定所；甲醇，色譜純，美國(guó)Tedia公司；其余試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。 1．2 色譜條件 色譜柱：Agilent HC—C18(250 alla×4．6mm，5／um)，Agilent ZORBAX Eclipse XDB—Cl8(250 mm×4．6 mm，5／um)，Agilent TC—Cl8(250mm×4．6 mm， 5／um)；進(jìn)樣量20ul；流動(dòng)相為V(甲醇)：V(水)：V(冰醋酸)=87：13：0．03，流速為1．0 mL／min；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)為215nm。 1．3 標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液的配制 精密稱取熊果酸標(biāo)準(zhǔn)品1．23 mg置于10 mL容量瓶中，用甲醇稀釋并定容，搖勻，配成質(zhì)量濃度為123ug／ml的溶液。 精確稱取化妝品試樣約1.000 g于具塞錐形瓶中，加甲醇10 mL，超聲提取40 min，離心分離，取上清液以0.45／um濾膜過濾，轉(zhuǎn)移至50 mL容量瓶中，甲醇定容[1]。 2 結(jié)果與討論 2．1 色譜條件的選擇 經(jīng)紫外全波長(zhǎng)掃描，熊果酸甲醇溶液λmax=206 nm，在此檢測(cè)波長(zhǎng)下，流動(dòng)相中甲醇的紫外吸收干擾較大，基線不穩(wěn)，故選擇215 nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。 鞠建華等[2]采用甲醇一水一磷酸(體積比為90： 10：0．05)流動(dòng)相體系，王向紅等 3采用乙腈一甲醇一水一磷酸(體積比為80：10：10：0.05)流動(dòng)相體系，均可實(shí)現(xiàn)基線分離。經(jīng)重復(fù)試驗(yàn)，二者在保留時(shí)間，理論塔板數(shù)上的差別不大�？紤]到經(jīng)濟(jì)、操作等因素，采用基于甲醇一水的流動(dòng)相體系。添加少量醋酸以創(chuàng)造弱酸性條件(調(diào)節(jié)pH=4．O)，有利于分離，同時(shí)可以改善峰形，并且以醋酸為添加劑時(shí)熊果酸保留時(shí)間小于以正磷酸為添加劑時(shí)保留時(shí)間。喬非等[4]還利用三乙胺作為掃尾劑改善峰形(在作者所選用的色譜柱系統(tǒng)中未能起到明顯的作用)。作者選取流動(dòng)相為甲醇一水一醋酸體系(體積比為87：13： 0.03)。 取同一標(biāo)準(zhǔn)溶液，按以上色譜條件，流速1．0 mL／min分別進(jìn)樣，得到熊果酸在3種不同色譜柱下的色譜結(jié)果，記錄保留時(shí)間、柱效。結(jié)果表明， HC—C18色譜柱理論塔板數(shù)為14 563，保留時(shí)間為l6．35 min，柱效明顯高于其他兩根色譜柱，只是保留時(shí)間稍長(zhǎng)，ZORBAX Eclipse XDB—C18色譜柱保留時(shí)間最短，僅為11．65 min，但其柱效也最低，塔板數(shù)僅為10 346。根據(jù)色譜柱資料，TC—C18柱碳載量為l2％，ZORBAX Eclipse XDB—C18柱碳載量為lO％，而HC—C18柱碳載量為18％，說明高表面積和更高的碳載量能使賦形劑和溶劑峰與待測(cè)組分色譜峰更好的分離。故選擇HC—C18柱，它能更好地符合分析要求。Agilent HC—Cl8色譜柱采用1．2色譜條件，圖譜見圖1。
2．2 線性關(guān)系 精密吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液0．1 mL、0．2 mL、0．3 mL、0．4 mL、0．5 mL和1．0 mL，分別置于1 mL容量瓶中，甲醇定容。所得溶液質(zhì)量濃度分別為l2.30 ug／ml、24.60 ug／ml、36.90 ug／ml、49.20 ug／ml、61.50 ug／ml和123.00 ug／ml，按1．2色譜條件測(cè)定。每份對(duì)照液測(cè)定5次，取峰面積平均值，得線性回歸方程為y=25.367 5x+0.546 9，線性范圍為0.2 t,g／mL～103ug／mL，r=0．999 7，熊果酸標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖2。 2．3 精密度及回收率實(shí)驗(yàn) 取49．20 ug/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液，補(bǔ)充進(jìn)樣3次，共8次，所得結(jié)果平均值為48.43ug/mL，計(jì)算RSD=1．56％。精密量取熊果酸質(zhì)量濃度為l0.13 ug/mL供試液2 mL，定量精確加入標(biāo)準(zhǔn)溶液(24.60ug/mL)0．2 mL、0．4 mL、0．6 mL及1．0 mL，使用與樣品相同的方法制備和測(cè)定，取5次測(cè)定平均值計(jì)算回收率，回收率在96．4％ ～101．3％，結(jié)果見表1。
以上測(cè)定結(jié)果表明，該方法具有良好的精密度、重現(xiàn)性和穩(wěn)定性。 2．4 樣品測(cè)定 將市場(chǎng)上收集到的l0種中高檔美白護(hù)膚產(chǎn)品進(jìn)行熊果酸相對(duì)含量的測(cè)定，部分測(cè)定結(jié)果見表2。
從對(duì)市場(chǎng)上中高檔的美白化妝品的測(cè)定結(jié)果可以看出，只有少部分化妝品中含有熊果酸，表明目前化妝品中有較少品種添加該成分。作為一種新型、天然的美白成分，日本企業(yè)在開發(fā)上超過了歐洲，開發(fā)出系列化妝品，在這一點(diǎn)上，國(guó)內(nèi)眾多大型化妝品生產(chǎn)企業(yè)還有很大的發(fā)展空間。 3 結(jié)論 采用高效液相色譜法測(cè)定化妝品中熊果酸含量，方法保留時(shí)間小于17 min，在0．2ug／mL～103ug／mL與目標(biāo)物峰面積具有良好的線性關(guān)系，回歸系數(shù)達(dá)到0．999 7，回收率在96.4％ ～101.3％，測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定可靠，可為化妝品生產(chǎn)過程的質(zhì)量控制及建立相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)起到一定的參考作用。 參考文獻(xiàn)： [1]李潔，王超，武婷，等．高效液相色譜法測(cè)定化妝品中三種香豆素的含量[J]．日用化學(xué)工業(yè)，2006，36(4)：257—259． [2]鞠建華，周亮，鄭瑞霞，等．高效液相色譜法測(cè)定中藥枇杷葉中熊果酸的含量[J]．中國(guó)藥學(xué)雜志，2003，38(9)：657—659． [3]王向紅，崔同，齊小菊，等．HPLC法測(cè)定不同品種棗及酸棗中的齊墩果酸和熊果酸[J]．食品科學(xué)，2002，23(6)：137—138． [4]喬非，馬雙成，林瑞超，等．回心草藥材中熊果酸的研究[J]．藥物分析雜志，2004，24(2)：208—210． 產(chǎn)品鏈接： 杜仲提取物 綠原酸 金銀花提取物 苦杏仁苷 枇杷葉提取物-熊果酸 大花紫薇提取物-科羅索酸 上禾生物 專注植提 精于高純 基于您對(duì)天然產(chǎn)物需求持續(xù)創(chuàng)新 |
