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摘要：目的：優(yōu)選金銀花綠原酸煎煮提取的最佳工藝。方法：利用正交試驗(yàn)法．以總浸膏得率和綠原酸含量為指標(biāo)，考察粉碎度、提取時間、提取次數(shù)和加水量對煎煮工藝的影響。結(jié)果：最佳工藝為金銀花粉末過50目篩，加水量30倍，煎煮3次，每次煎煮30 min。

關(guān)鍵詞：金銀花；綠原酸；正交設(shè)計；提取工藝

金銀花原名忍冬，是忍冬科忍冬屬植物忍冬L．japoniea Thunb．及同屬多種植物的干燥花蕾，金銀花具有抗菌和增強(qiáng)機(jī)體免疫功能的作用，味甘、性寒、清熱解毒、涼散風(fēng)熱，其醫(yī)療作用十分廣泛�，F(xiàn)代研究表明：綠原酸和異綠原酸作為金銀花的主要成分有多種藥理活性，具有顯著的清熱解毒、抗菌消炎和延緩衰老作用，對消化道的癌癥有明顯的抑制作用，還具有抗生育作用及對免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)作用[1]。因此綠原酸含量的高低是目前衡量金銀花品質(zhì)優(yōu)劣的主要指標(biāo)。

目前從金銀花中提取綠原酸多采用煎煮法、浸潰法、回流法等 [2,3]，其中最常見易行的方法是煎煮提取法，但由于提取條件沒有優(yōu)化，綠原酸得率較低，金銀花得不到充分利用，導(dǎo)致資源浪費(fèi)。為了保證金銀花有效成分的提取完全，筆者通過正交設(shè)計實(shí)驗(yàn)，以綠原酸含量為考察指標(biāo)，結(jié)合總浸膏得率優(yōu)選最佳工藝，對影響有效成分提取的條件和因素進(jìn)行了探討，為金銀花的煎煮提取工藝提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與材料

金銀花藥材由安徽醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院鑒定、提供；綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品由中國藥品生物制品檢定所提供，其他化學(xué)試劑均為分析純。722S型紫外可見分光光度計，上海精密科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品；JT12001電子天平，上海精天電子儀器廠產(chǎn)品。

2 實(shí)驗(yàn)設(shè)計

根據(jù)文獻(xiàn)報道及中藥材的傳統(tǒng)提取經(jīng)驗(yàn)，確定考察因素為金銀花粉末的粉碎度、加水量、加熱提取時間、煎煮次數(shù)，分別取3個水平進(jìn)行考察�？疾煲蛩丶八�平見表1。采用L9(3 )正交實(shí)驗(yàn)表設(shè)計實(shí)驗(yàn)方案，以總浸膏得率和綠原酸含量作為質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。

3 方法與結(jié)果

3．1 金銀花的預(yù)處理將干燥的金銀花粉碎后，分別通過10，30，50目篩，按每包10 g分裝后置干燥器內(nèi)備用。

3．2 總浸膏得率的測定 按正交設(shè)計表規(guī)定的實(shí)驗(yàn)條件，每次取定量的金銀花藥材進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，將實(shí)驗(yàn)所得的煎煮液先置于蒸發(fā)皿中，水浴蒸至近干，將其連同蒸發(fā)皿一起轉(zhuǎn)移到真空干燥箱中，低溫下用油泵減壓干燥至恒重，準(zhǔn)確稱質(zhì)量�？偨�膏得率=(浸膏質(zhì)量／藥材量)×100％，記錄每次實(shí)驗(yàn)所得的總浸膏得率，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。

3．3 綠原酸含量測定[4,5]

3．3．1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：精密稱取經(jīng)五氧化二磷減壓干燥過的綠原酸對照品2．0 mg，用0．2 mo1．／L鹽酸溶解并定容于100 ml容量瓶中，配制成20．0 Iug／ml的對照品溶液。精密吸取1．O，2．O，4．0，6．0，8．0，10．0 m1分別置于10 ml容量瓶中，0．2 mol／L鹽酸定容，配制成濃度分別為2．0，4．0，8．0，12．0，16．0，20．0 ug／ml的溶液，以0．2 mol／L鹽酸作空白對照，324 nm處測定吸收度，用最／b--乘法經(jīng)線性回歸，得回歸方程：c=22．486 5A一0．294 2，r=0．999 0，金銀花綠原酸的含量在2．78—20．94 ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

3．3．2 樣品綠原酸含量測定：精密稱取總浸膏100mg，加無水乙醇溶解，過濾除去不溶性雜質(zhì)，揮干乙醇后同樣用0．2 mol／L的鹽酸溶解，并定容至50ml，精密吸取5．0 ml，再加0．2 mol／L鹽酸定容至50ml。按上述方法測定其吸光度，帶入回歸方程計算綠原酸濃度c( ug/m1)，綠原酸含量為0．5 c％，記錄每次實(shí)驗(yàn)所得浸膏中的綠原酸含量。結(jié)果見表2。

3．4 方差分析上述試驗(yàn)所用正交表除各因子列外，無空白列作對照，所以采用常規(guī)方法，將離差平方和中最小的項(xiàng)來近似作為誤差的估計，用來計算各因子列的F比值 [6]，采用SPSS 11．5統(tǒng)計軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3。

以總浸膏得率為考察指標(biāo)，由表3方差分析結(jié)果結(jié)合表2極差R值進(jìn)行分析，各指標(biāo)因素的主次順序D>A>B>c，最優(yōu)方案為D3A1B3c2，以金銀花得率為考察指標(biāo)，各指標(biāo)因素的主次順序仍為D>A>B>c，最優(yōu)方案為D3A3B3C1，綜合兩個考察指標(biāo)工藝條件，金銀花煎煮的最佳工藝為A1B3C1 D3。

3．5 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 按最佳工藝條件A1B3C1D3進(jìn)行驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，兩次實(shí)驗(yàn)平均結(jié)果為金銀花總浸膏得率為60．74％，綠原酸含量為6．78％，實(shí)驗(yàn)結(jié)果較為理想，說明該工藝條件簡單、穩(wěn)定、可行。

4 結(jié)論

按方差分析的觀點(diǎn)，只需對有顯著意義的因素確定好的水平，對其他因素則可以按實(shí)際需要來確定適當(dāng)?shù)乃�平。對于總浸膏得率指�?biāo)來說，煎煮次數(shù)(因素D)、粉碎度(因素A)與煮沸時間(因素c)相比有顯著性差異，雖然對于綠原酸含量指標(biāo)來說A 相對較好，但因素A與因素c相比無顯著性差異，因此綜合考慮D 3A1。為最佳條件。從極差分析結(jié)果得出的結(jié)論可以看出，B3的得率最高，另外c因素的3個水平對結(jié)果的影響不大，再考慮綠原酸在提取過程中會發(fā)生化學(xué)變化，提取時間不易過長，筆者認(rèn)為提取30 min可以達(dá)到較好提取效果。綜合上述各種因素，金銀花煎煮的最佳工藝為A1B3C1D3，即金銀花粉末過5O目篩，加水量為3倍，每次煎煮30 min，共煎煮3次，該工藝條件可供工業(yè)化生產(chǎn)參考。

參考殳獻(xiàn)：

[1]石鉞，石任兵，陸蘊(yùn)如．我國藥用金銀花資源、化學(xué)成份及藥理研究進(jìn)展[J]．中國藥學(xué)雜志，1999，34(11)：724— 727．

[2]林緞嫦，宋勁詩，吳應(yīng)雄．金銀花中綠原酸提取工藝探討[J]．中成藥，1994。16(7)：2—3．

[3]李志華，徐讓翻．不同提取工藝對金銀花綠原酸提取率的影響[J]．中草藥，2002，33(8)：714—715．

[4]闞毓銘．中藥制劑分析[M]．南京：南京大學(xué)出版社，1992．405．

[5]何報作．紫外光度法測定金銀花中綠原釀含量的改進(jìn)[J]．廣西中醫(yī)藥．1992。15(5)：45．

[6]于立芬．?dāng)?shù)理統(tǒng)計方法[M]．上海：上�？茖W(xué)技術(shù)出版社，1985．173