微波法提取金銀花中的綠原酸 | 微波法提取金銀花中的綠原酸 |
| 發(fā)布時(shí)間:2011-01-13 信息來源:admin 發(fā)布人:admin 點(diǎn)擊次數(shù):2998 |
余建平 林燕 滕莉麗 王科軍 （贛南師范學(xué)院化學(xué)與生命科學(xué)系，江西贛州，341000） 摘要：采用微波法提取了金銀花中的綠原酸，所制得的綠原酸粗產(chǎn)品用石油醚脫色、薄層層析分離和紫外分光光度計(jì)測(cè)定含量，并與超聲波法、水提法進(jìn)行了比較。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，微波法在提取金銀花的綠原酸中具有非常好的效果，篩選的最佳微波工藝條件是：微波功率260W，樣品預(yù)浸時(shí)間24hr，輻射時(shí)間15min。在此條件下，與水提法相比總收率提高了10.59%，提取時(shí)間縮短75%；與超聲波提法相比總收率也提高了2.60%，提取時(shí)間縮短了50%。且該方法具有操作簡(jiǎn)單、快速高效、節(jié)能環(huán)保等優(yōu)點(diǎn)。 關(guān)鍵詞：微波法水提法超聲波法金銀花綠原酸 金銀花［1］（Flos Lonicerar）為忍冬屬忍冬植物的干燥花蕾，是中醫(yī)常用藥，具有清熱解毒，涼風(fēng)散熱，抗病毒，保肝利膽的功能。它的主要活性成分為綠原酸。我國(guó)作為金銀花產(chǎn)地，在金銀花炮制、有效成分分析、含量測(cè)定等方面取得了很好的研究成果［2］。對(duì)金銀花這一清熱解毒中藥的研究處于世界領(lǐng)先地位。金銀花中綠原酸的提取方法有：水提法、乙醇回流法、水提醇沉法、酶解法、超聲波法等［1 - 5］。本文將在天然產(chǎn)物提取方面具有被提取活性物質(zhì)不被破壞、快速高效的微波［6］新型提取技術(shù)應(yīng)用于金銀花中綠原酸的提取研究，著重探討了浸泡時(shí)間、微波功率、輻射時(shí)間對(duì)金銀花中的綠原酸提取率的影響，并用薄層層析—紫外分光光度法［3 - 4］測(cè)定綠原酸的含量，且與超聲波提取法、水提法作了比較。 1 實(shí)驗(yàn)部分 1.1 儀器與藥品 微波反應(yīng)器：三樂牌W - 650 型，南京陵江科技開發(fā)公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：上海生申科技公司，紫外燈；分析天平：CG - 328 型；紫外可見光分光度計(jì)：722 型，上海精密科學(xué)儀器有限公司分析儀器廠；循環(huán)水真空泵：SHZ-Ⅲ型，上海儀表供銷公司；活化的硅膠G 板（自制）；金銀花：贛州醫(yī)藥公司；石油醚，乙酸乙酯、甲酸、乙醇、綠原酸均為分析純，上海試劑公司。 1.2 水提法提取 為了與微波法相比較，先用水提法提取金銀花中的綠原酸，具體步驟為：將6.0g 干燥并粉碎的金銀花粉末與100mL 蒸餾水置250mL 蒸餾瓶中在80℃的水浴下加熱提取1h，重復(fù)2 次，將分離的提取液合并，在60℃條件下減壓濃縮至10ml 左右，石油醚脫色，使用薄層層析分離，再使用紫外分光光度計(jì)進(jìn)行測(cè)定含量。 1.3 超聲波法提取 每次用超聲波處理提取0.5hr，其它操作同水提法。 1.4 微波法提取 在裝有冷凝管的250ml 微波專用容器中裝入6. 0g金銀花和100ml 蒸餾水，在設(shè)定的微波功率和輻射時(shí)間下，啟動(dòng)微波爐，提取結(jié)束后，合并3 次分離提取液，其它實(shí)驗(yàn)操作同水提取法。 1.5 綠原酸的分離 本實(shí)驗(yàn)采用硅膠吸附薄層層析進(jìn)行分離，即將樣品點(diǎn)于活化的硅膠G 板上，以乙酸乙酯：甲酸：水= 10：2：3（質(zhì)量比）展開，紫外燈下觀察有藍(lán)色斑點(diǎn)的為綠原酸，刮下斑點(diǎn)，用80%乙醇洗脫，洗脫液定容至5ml，于330nm 處觀測(cè)吸收值，Rf = 0. 65。用標(biāo)樣進(jìn)行吸收值的測(cè)定，確定綠原酸提取液的最大吸收波長(zhǎng)，并計(jì)算出相應(yīng)含量。 1.6 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 利用高精度分析天平，稱取綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品0.0044g，溶于25ml 蒸餾水中，然后利用該母液配成各種標(biāo)準(zhǔn)濃度，用722 型紫外可見分光光度計(jì)330nm 下測(cè)定不同濃度綠原酸的吸光度，結(jié)果如表l。
依據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線可得回歸方程式Y(jié) = A + BX 式中：A = 0.12833 B = 0.02272 X—綠原酸的濃度（μg / ml），Y—吸光度。根據(jù)表1數(shù)據(jù)繪得圖1。
1.7 樣品液中綠原酸的含量測(cè)定 經(jīng)脫色、薄層層析分離的提取，用80%乙醇（加2%抗氧化劑a）洗脫，并定容至25ml，用lmL 石英檢測(cè)池在紫外分光光度計(jì)上于220 - 520nm 范圍內(nèi)掃描測(cè)得樣品液與標(biāo)準(zhǔn)液最大吸收波長(zhǎng)相同，均為330nm。再在330nm 處測(cè)定樣品液吸收值，查標(biāo)準(zhǔn)曲線，算出百分含量。 2 結(jié)果分析 2.1 水提法產(chǎn)品收率 平行做三次水提取實(shí)驗(yàn)，總收率為11.37%。 2.2 超聲波提取法產(chǎn)品收率 平行做三次水提取實(shí)驗(yàn)，總收率為19. 06%，與水提法相比提高7.69%。 2.3 微波提取法各種因素對(duì)產(chǎn)品收率的影響 2.3.1 樣品預(yù)浸泡時(shí)間對(duì)產(chǎn)品收率的影響 在其它條件相同的條件下，作者對(duì)樣品進(jìn)行不同時(shí)間的預(yù)浸泡，然后按1. 4 方法提取。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。
從表2 可見，預(yù)浸泡時(shí)間越長(zhǎng)，收率越大，但超過24h，差異很小，所以本實(shí)驗(yàn)最佳預(yù)浸泡時(shí)間為24h。 2.3.2 微波輻射時(shí)間對(duì)產(chǎn)品收率的影響 在其它因素不變的條件下，作者改變輻射時(shí)間，考察不同輻射時(shí)間對(duì)樣品提取收率的影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3。
從表3 可知，微波輻射時(shí)間越長(zhǎng)，收率越大，但15min 后的變化很小，所以微波輻射時(shí)間選擇為15min為最佳。比水提法的時(shí)間縮短了75%，超聲波提法的時(shí)間縮短50%。 2.3.3 微波功率對(duì)產(chǎn)品收率的影響 其它條件相同，作者只改變微波功率考察對(duì)產(chǎn)品收率的影響。結(jié)果見表4。
從表4 可見，隨著微波功率的增大產(chǎn)品收率在增大，但超過260W 后增大很小。故微波功率以260W 為最佳。 2.3.4 最佳微波條件重復(fù)提取的產(chǎn)品收率 在最佳微波條件下重復(fù)提操作取實(shí)驗(yàn)，其結(jié)果見表5。
從表5 可得，微波方法在相同水平提取金銀花中的綠原酸實(shí)驗(yàn)的重復(fù)操作的穩(wěn)定性好，而3 次以后金銀花中綠原酸的提取基本完成，最好的總收率可達(dá)21.66%，比水提法的11. 37%提高了10. 59%，超聲波法的19.06%提高了2.60%。由此說明微波方法提取金銀花 中的綠原酸是一種比較理想的方法。 3 結(jié)論 3.1 利用微波方法提取了金銀花中的綠原酸，其最佳工藝條件為：微波功率260W，樣品預(yù)浸時(shí)間24hr，輻射時(shí)間15min。 3.2 與水提法相比總收率提高了10. 59%，提取時(shí)間縮短75%；與超聲波提法相比總收率也提高了2.60%，提取時(shí)間縮短了50%。且該方法具有操作簡(jiǎn)單、節(jié)能清潔和快速高效等優(yōu)點(diǎn)。是一種提取金銀花中綠原酸的環(huán)境友好的先進(jìn)方法。 參考文獻(xiàn) ［1］鄭敏燕. 超聲波法提取紫丁香中丁香油的研究［J］. 青海師范大學(xué)學(xué)報(bào)，2003，（3）：32 - 33. ［2］林丹，趙國(guó)玲，劉佳佳. 金銀花不同提取方法的綠原酸比較研究［J］. 天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2003，15（2）；124 - 125. ［3］蔡霄英，劉永樂. 金銀花中綠原酸的分離與測(cè)定新方法［J］.食品科技，2003，（5）：104 - 106. ［4］武雪芬，景小琦，李國(guó)茹。金銀花中藥用成分的提取及抑菌試驗(yàn)［J］，天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2001，13（3）：43 - 44. ［5］尹波，王科軍. 超聲波法提取金銀花中的綠原酸［J］. 林產(chǎn)化工通訊，2005，（1）：16 ～ 1 8 ［6］周瑾，閆小燕，賀高江等. 微波提取銀檔黃酮苷的方法研究［J］. 天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2001，14（1）：42 - 44. 產(chǎn)品鏈接： 杜仲提取物 綠原酸 金銀花提取物 苦杏仁苷 枇杷葉提取物-熊果酸 大花紫薇提取物-科羅索酸 上禾生物 專注植提 精于高純 基于您對(duì)天然產(chǎn)物需求持續(xù)創(chuàng)新 |
