大孔樹脂對(duì)金銀花中綠原酸提取純化效果的研究 | 大孔樹脂對(duì)金銀花中綠原酸提取純化效果的研究 |
| 發(fā)布時(shí)間:2011-02-16 信息來(lái)源:admin 發(fā)布人:admin 點(diǎn)擊次數(shù):3084 |
劉磊，何再安，余子川， 吳和珍，劉超英，劉焱文 (湖北中醫(yī)學(xué)院中藥資源與中藥復(fù)方省部共建教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖北 武漢430061) [摘要]目的：考察不同型號(hào)的大孔吸附樹脂對(duì)金銀花中綠原酸的提取純化效果，為在中藥純化研究中應(yīng)用樹脂吸附純化法，進(jìn)一步開發(fā)金銀花的相關(guān)產(chǎn)品提供參考。方法：用HPLC法測(cè)定綠原酸含量；采用動(dòng)態(tài)吸附法，考察大孔樹脂的吸附、解吸附性能和純化效果。結(jié)果：LS一303樹脂綜合性能最佳，提取液在酸性條件下吸附量佳。結(jié)論：LS-303大孔樹脂對(duì)綠原酸的提取純化效果果較好，可用于工業(yè)化生產(chǎn)。 [關(guān)鍵詞]金銀花；綠原酸；大孔樹脂 金銀花是忍冬科植物忍冬的干燥花蕾，是臨床常用的中藥材之一。綠原酸(chlorogenic acid，CHA)是金銀花的主要藥用成分，具有顯著的清熱解毒和抗菌消炎作用，對(duì)消化道癌癥有明顯的抑制作用，與人體血小板凝集和凝血因子的生成有關(guān)，還具有抗生育作用及對(duì)免疫系統(tǒng)的調(diào)節(jié)作用。綠原酸類化合物是含有羧基和鄰二酚羥基的有機(jī)酸，易溶于水、醇、丙酮等溶劑。從金銀花中提取綠原酸多采用煎煮法、浸漬法、回流法等。傳統(tǒng)分離純化綠原酸的方法有沉淀法、萃取法、層析法等，但沉淀法分離效果不好，萃取法溶劑用量大，層析法成本高、操作復(fù)雜。本文以金銀花水提醇沉后的濾液為樣品液，考察了不同大孔樹脂吸附純化綠原酸的效果，試圖為吸附純化法在中藥制劑研究中的應(yīng)用和進(jìn)一步開發(fā)金銀花的相關(guān)產(chǎn)品提供參考和依據(jù)。 1 儀器與試藥 Agilent 1 100 series高效液相色譜儀(G1322A排氣閥，G1311A泵，G1316A柱溫箱，G1314A紫外檢測(cè)器)；ehemistation色譜工作站；Kromasil Cls色譜柱。綠原酸對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110753—200212)；金銀花藥材(湖北省藥材公司購(gòu)進(jìn))，經(jīng)湖北中醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院生藥學(xué)教研室吳和珍副教授鑒定為忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb．的干燥花蕾； 乙腈，磷酸均為分析純；水為雙蒸水(本實(shí)驗(yàn)室自制)。 2 方法與結(jié)果 2．1金銀花樣品溶液的制備 取金銀花藥材，加適量水煎煮，煎煮液在60~C下濃縮至相對(duì)密度1．2(相當(dāng)于原生藥2．22g·mL )，加乙醇至含醇量為70％ ，靜置24h，濾過(guò)，回收乙醇，濃縮至濾液體積的1／5，將醇沉濃縮濾液(相當(dāng)于原生藥1．85g·mL )加水稀釋5倍后(相當(dāng)于原生藥0．37g·mL )，即得金銀花樣品液。 2．2綠原酸含量測(cè)定 2．2．1色譜條件 色譜柱：Kromasil C 8柱(250mm×4 6mm，71xm)；柱溫：25oC；流動(dòng)相：乙N-O．4％磷酸(12：88)；流速：1mL·min ；檢測(cè)波長(zhǎng)：327nm。 2．2．2標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密稱取綠原酸對(duì)照品適量，置棕色量瓶中，加50％ 甲醇制成每1mL含35．8 g的對(duì)照品溶液，精密吸取對(duì)照品溶液2，4，6，10，14，181~L，分別注入液相色譜儀。按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積積分值(A)對(duì)進(jìn)樣量進(jìn)行回歸，得回歸曲線方程Y=2 468．4X一16．205，r=0．999 6。結(jié)果表明，綠原酸在0．071 6～0．644 41xg與峰面積呈良好的線性關(guān)系。 2．2．3樣品溶液含量測(cè)定 精密吸取樣品溶液1mL置100mL 容量瓶中，雙蒸水定容， 搖勻，過(guò)0．45 m微孔濾膜，精密吸取續(xù)濾液10txL，注入液相色譜儀，按上述色譜條件用峰面積值外標(biāo)法計(jì)算樣品液中綠原酸的含量。 2．3綠原酸與酸共熱的穩(wěn)定性考察 在酸性條件下，具有酚羥基結(jié)構(gòu)的綠原酸以分子狀態(tài)存在，可以憑借范德華力與樹脂發(fā)生物理吸附作用，因此隨著樣液酸度的增加，樹脂的吸附容量逐漸增加 [2]，但是由于綠原酸本身的不穩(wěn)定性[3]，其與酸共熱易分解，考慮到使用大孔樹脂純化綠原酸時(shí)需對(duì)樹脂洗脫液進(jìn)行加熱濃縮，以回收洗脫溶劑，因此需對(duì)綠原酸與酸共熱時(shí)的穩(wěn)定性進(jìn)行考察，以確定合適的上樣藥液pH值。取3份50mL的金銀花樣品原液(pH=4．13)置于錐形瓶中，分別調(diào)pH值為1，2，3，放人60~C水浴2h后，測(cè)定樣品液中綠原酸的含量，與原樣品液中綠原酸的含量進(jìn)行比較，計(jì)算綠原酸的損失率，由此分別為14％ ，13％ ，11％ 。由此可見，調(diào)藥液pH：3時(shí)，綠原酸損失較小。 2．4不同樹脂動(dòng)態(tài)吸附量的考察 取5種型號(hào)的大孔樹脂各25g，濕法裝柱，將金銀花樣品液以1BV·h-1的流速分別上樣，按樹脂體積收集流出液，測(cè)定流出液中綠原酸的含量，當(dāng)流出液中綠原酸的含量達(dá)到樣品液中綠原酸含量的10％ 時(shí)，即為吸附終點(diǎn)，計(jì)算樹脂吸附量。并將金銀花樣品液調(diào)至pH=3，再分別上這5種大孔樹脂柱，考察酸性條件下這5種大孔樹脂對(duì)綠原酸的吸附量，結(jié)果見表1。
結(jié)果可見，大孑L樹脂在藥液調(diào)成酸性條件下對(duì)綠原酸的吸附效果要優(yōu)于原藥液，且D一101樹脂對(duì)綠原酸的吸附量較小，不宜作為綠原酸的吸附樹脂。 2．5不同樹脂動(dòng)態(tài)解吸附率考察 根據(jù)酸性條件下4種樹脂對(duì)綠原酸的吸附量，將金銀花樣品液調(diào)至pH=3，分別取50mL上裝有25g LS．300、LS．303、LS-45大孑L樹脂柱，另取60mL上裝有10g XDA-5大孔樹脂柱，均以30％ 乙醇洗脫 J，至洗脫液中檢測(cè)不出綠原酸為止。按樹脂體積收集洗脫液，測(cè)定洗脫液中綠原酸的含量并計(jì)算解吸附率，結(jié)果見表2。
由結(jié)果可見，LS-303樹脂解吸附率較好。 2．6不同樹脂對(duì)綠原酸純化效果的考察 將解吸附率試驗(yàn)中的洗脫液在60℃濃縮、真空干燥至恒重，測(cè)定干膏中綠原酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，結(jié)果見表3。
由結(jié)果可見，LS．303大孑L樹脂對(duì)綠原酸的純化效果較好。 3 討論 樹脂篩選需綜合考慮多種因素，吸附量、解吸附率都只是考察因素之一，吸附量或解吸附率大都不能表明樹脂的純化效果好，因此必須進(jìn)行動(dòng)態(tài)試驗(yàn)以考察樹脂的純化效果才能篩選出合適的樹脂。大孔樹脂具有操作簡(jiǎn)便、樹脂再生容易、耗費(fèi)有機(jī)溶劑少、提取率高等特點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)表明LS．303大孔樹脂對(duì)綠原酸的解吸附率達(dá)90％ 以上，提取物中綠原酸的含量能達(dá)20％ 以上，可用于綠原酸的工業(yè)化生產(chǎn)，有利于金銀花相關(guān)產(chǎn)品的開發(fā)。旺圈 參考文獻(xiàn) [1]高春榮，胡錦蓉，孫君社．金銀花中綠原酸的提取工藝[J]．中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2003，8(4)：5—8． [2]馬希漢，王冬梅，蘇印泉．大孔吸附樹脂對(duì)杜仲葉中綠原酸、總黃酮的分離研究[J]．林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè)，2O04，24(3)：47—51． [3]鄧良，袁華，喻宗沅．綠原酸的研究進(jìn)展[J]．化學(xué)與生物工程，2005，(7)：4_6． 產(chǎn)品鏈接： 杜仲提取物 綠原酸 金銀花提取物 苦杏仁苷 枇杷葉提取物-熊果酸 大花紫薇提取物-科羅索酸 上禾生物 專注植提 精于高純 基于您對(duì)天然產(chǎn)物需求持續(xù)創(chuàng)新 |
