杜仲葉醇提取物對大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用 | 杜仲葉醇提取物對大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用 |
| 發(fā)布時間:2011-03-02 信息來源:admin 發(fā)布人:admin 點擊次數(shù):2628 |
王夢華 李恒華 劉穎菊 周歧新 尚京川 高麗佳 （重慶醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院藥理教研室，重慶 400016） 【摘要】 目的探討杜仲葉醇提取物(Alcohol extractive of Folium Eucommiae，AEFE)對動脈粥樣硬化(AS)大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用。方法 復(fù)制實驗性大鼠AS模型，AEFE(70、140 和420 mg·kg-1·d-1，ig)給藥6 w，實驗結(jié)束時測定血漿一氧化氮(NO)、內(nèi)皮素1(ET1)、血栓素B2(TXB2)和6酮前列腺素F1α(6KPGF1α)的含量；取主動脈和冠狀動脈進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察。結(jié)果 AEFE 140和420 mg·kg-1·d-1可明顯升高AS模型大鼠血漿中NO、ET1和6KetoPGF1α濃度(P＜0.01)，而對TXB2無影響；明顯減輕AS大鼠主動脈和冠狀動脈內(nèi)皮細(xì)胞的缺失,但兩組間無顯著差異。結(jié)論 AEFE具有維持NO/ET和TXA2/PGI2平衡、保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的作用。 【關(guān)鍵詞】 動脈粥樣硬化；杜仲葉；醇提取物；內(nèi)皮細(xì)胞 杜仲具有降低血脂、平衡調(diào)節(jié)血壓等功效〔1〕,近來的研究顯示杜仲葉醇提取物(Alcohol extractive of Folium Eucommiae，AEFE)還可作用于內(nèi)皮細(xì)胞促進(jìn)一氧化氮(NO)的釋放〔2〕。本實驗首次觀察AEFE對動脈粥樣硬化(AS)大鼠血漿NO、內(nèi)皮素(ET)1、6酮前列腺素F1α(6KetoPGF1α)、血栓素B2(TXB2)水平和主動脈、冠狀動脈形態(tài)的影響，探討AEFE對AS大鼠內(nèi)皮細(xì)胞的保護(hù)作用。 1 材料與方法 1.1 動物 雄性SD大鼠，體重200～250 g，鼠齡80～120 d。由重慶醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供(醫(yī)學(xué)動物合格證：SCXK渝20020003)。 1.2 藥品與試劑 AEFE：根據(jù)文獻(xiàn)〔3〕制備并濃縮至100％(相當(dāng)于1 ml含生藥1 g)備用，用時以0.5％羧甲基纖維素稀釋；由重慶醫(yī)科大學(xué)化學(xué)教研室提供并鑒定。洛伐他�。褐貞c大新藥業(yè)股份有限公司，批號040501。膽固醇：北京鼎國生物技術(shù)有限責(zé)任公司，批號DH061；豬膽鹽：北京奧博星生物技術(shù)有限公司，批號20050308；丙硫氧嘧啶：上海復(fù)星朝暉藥業(yè)有限公司，批號040708；VitD3注射液：上海通用藥業(yè)股份有限公司，批號041108。NO測定試劑盒：南京建成生物工程研究所；ET1、6KetoPGF1α和TXB2放射免疫試劑盒：解放軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心放免所；其余試劑均為國產(chǎn)分析純。 1.3 實驗儀器 3K30型高速低溫離心機(jī)：美國Sigma公司；722型分光光度計：上海菁華科技儀器有限公司；SN695B型放射免疫測定儀：上海核輻光電儀器設(shè)備有限公司。 1.4 方法 1.4.1 大鼠AS模型的復(fù)制和實驗分組 參考文獻(xiàn)〔4〕方法建立大鼠AS模型，于實驗開始時給予模型組及各給藥組大鼠腹腔注射VitD3注射液(總劑量60 萬U/kg,分3 d給完)，同時給予高脂飼料(3％膽固醇，0.5％豬膽鹽，0.2％丙硫氧嘧啶，5％白糖，10％豬油，81.3％基礎(chǔ)飼料)。實驗動物隨機(jī)分為6組，每組8只：正常對照組，普通基礎(chǔ)全價飼料；AS模型組：高脂飼料；AEFE高中低劑量組，高脂飼料＋AEFE (420，140，70 mg·kg-1·d-1)；洛伐他汀組：高脂飼料＋洛伐他汀(4 mg·kg-1·d-1)。各給藥組在造模2 w后開始灌胃給藥(0.5 ml/100 g濕重)，共給藥6 w。實驗周期為8 w。 1.4.2 血漿NO、ET1、6KetoPGF1α和TXB2含量測定 大鼠抗凝血2 ml，4℃，3 000 r/min離心10 min，取血漿化學(xué)法測定NO、放射免疫法測定ET1、6KetoPGF1α和TXB2，均按試劑盒操作進(jìn)行。 1.4.3 主動脈和冠狀動脈形態(tài)學(xué)觀察 取主動脈和心臟用10％甲醛固定，石蠟包埋切片，HE染色光鏡觀察。 1.5 統(tǒng)計學(xué)方法
數(shù)據(jù)用x±s表示，結(jié)果用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行t檢驗和方差分析處理。 2 結(jié) 果 2.1 AEFE對血漿NO和ET1含量的影響 AS模型組血漿NO和ET1濃度與正常對照組相比均明顯降低(P＜0.01)；與AS模型組相比，AEFE低劑量組兩指標(biāo)改變無明顯差異，AEFE中、高劑量組和洛伐他汀組NO和ET1濃度明顯升高(P＜0.01)。AEFE中、高劑量組NO水平高于洛伐他汀組，但無統(tǒng)計學(xué)意義(表1)。 2.2 AEFE對血漿6KetoPGF1α和TXB2含量的影響 AS模型組與正常對照組相比血漿6KetoPGF1α濃度明顯降低而TXB2濃度顯著升高(P＜0.01)；與AS模型組相比，AEFE低劑量組兩指標(biāo)改變無明顯差異，AEFE中、高劑量組和洛伐他汀組6KetoPGF1α濃度明顯升高(P＜0.01)，洛伐他汀組達(dá)到正常水平，但各組TXB2濃度無差異(表1)。表1 各組大鼠血漿NO、ET1、6KetoPGF1α和TXB2濃度的變化(略) 2.3 AEFE對主動脈和冠狀動脈形態(tài)的影響 正常對照組大鼠主動脈和冠狀動脈結(jié)構(gòu)完整，層次清晰，內(nèi)膜內(nèi)皮細(xì)胞連續(xù)完整。AS模型組主動脈內(nèi)皮細(xì)胞呈連續(xù)性缺失，底層膠原纖維暴露，內(nèi)皮下間隙增寬，內(nèi)彈力板分離斷裂；AEFE低劑量組病理改變基本同AS模型組；AEFE中、高劑量組和洛伐他汀組動脈結(jié)構(gòu)完整，層次清晰,內(nèi)膜較光滑，偶見局部少量內(nèi)皮細(xì)胞缺失。AS模型組冠狀動脈可見連續(xù)性內(nèi)皮細(xì)胞缺失、數(shù)目不一的泡沫細(xì)胞和鈣質(zhì)沉著；AEFE低劑量組冠脈改變基本同AS模型組，而中、高劑量組和洛伐他汀組內(nèi)皮基本完整，其下偶見泡沫細(xì)胞，管壁可見輕度增厚和少量鈣質(zhì)沉著，其病變程度明顯好于AS模型組,但三組間無顯著差異(圖1和圖2)。 3 討 論 血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷被認(rèn)為是AS最重要的始動環(huán)節(jié)，繼發(fā)于它的內(nèi)皮通透性、黏附性、血液凝固性改變及所釋放的大量細(xì)胞因子及生長因子將導(dǎo)致AS發(fā)生的一系列連鎖反應(yīng)〔5〕。血管內(nèi)皮的正常功能是通過內(nèi)皮分泌血管活性物質(zhì)(如NO，ET1及PGI2等)來實現(xiàn)的，因此內(nèi)皮損傷后首先表現(xiàn)為血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌功能的失調(diào)。有研究表明高血脂癥可引起ET1含量升高、NO水平下降〔6，7〕；然而部分學(xué)者認(rèn)為高血脂癥對內(nèi)皮細(xì)胞有毒性作用，損壞細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能，引起ET1、NO水平均降低〔8，9〕。孫金明等〔10〕研究高血脂癥對內(nèi)皮血管活性物質(zhì)合成和釋放的動態(tài)影響，結(jié)果顯示高血脂癥對ETl基因表達(dá)及ETl含量的影響呈波動性變化，高血脂癥初中期ET1基因的表達(dá)升高，隨后呈下降趨勢。PGI2和TXA2維持平衡對預(yù)防AS的發(fā)生，防止血栓形成有著重要的調(diào)節(jié)作用。由于兩者的不穩(wěn)定性，故目前均以測定6KetoPGF1α和TXB2作為判斷其濃度的指標(biāo)。在AS發(fā)病過程中，oxLDL增加，細(xì)胞過氧化脂質(zhì)的升高，可以抑制血管壁PGI2合酶的活性，使PGI2合成減少，而血小板TXA2生成增加。 在本實驗中，高膽固醇飲食造模8 w后，AS模型組大鼠血漿NO、ET1和6KetoPGF1α含量較正常組明顯降低，TXB2濃度明顯升高，同時血管內(nèi)皮細(xì)胞有連續(xù)性缺失，血管結(jié)構(gòu)紊亂，說明模型組血管內(nèi)皮功能和結(jié)構(gòu)受到明顯的損傷,動脈粥樣硬化發(fā)生；AEFE中、高劑量和洛伐他汀能明顯增加血漿NO、ET1和6KetoPGF1α水平，使主動脈和冠狀動脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷減輕、血管結(jié)構(gòu)基本正常，但對TXB2無影響，提示AEFE具有維持NO/ET和TXA2/PGI2平衡、保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能，防治AS的作用。此時的NO、ET1和PGI2水平升高是內(nèi)皮功能修復(fù)的一種表現(xiàn)，對TXA2無影響提示AEFE的作用靶點不在血小板。AEFE升高NO的作用較洛伐他汀明顯，而對PGI2水平的影響不及洛伐他汀，說明兩藥對內(nèi)皮細(xì)胞功能的修復(fù)影響環(huán)節(jié)不相同。AEFE中、高劑量兩組療效無明顯差異可能是AEFE 140 mg·kg-1·d-1已接近最大效應(yīng)，故增加劑量藥物效應(yīng)無顯著增加。 【參考文獻(xiàn)】 1 王本祥.現(xiàn)代中藥藥理與臨床〔M〕.天津:天津科技翻譯出版公司,2004：67983. 2 王夢華，劉穎菊，周歧新，等.杜仲葉醇提取物血管舒張作用的機(jī)制研究〔J〕.中藥藥理與臨床,2006；22(2):356. 3 戚向陽，喻曉輝，張聲華,等.杜仲的炮制及降壓成分提取工藝的研究〔J〕.中草藥，1997；28(3):1447. 4 楊鵬遠(yuǎn),芮耀誠,焦亞斌.動脈粥樣硬化大鼠實驗?zāi)Ｐ偷慕ⅰ睯〕.第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報,2003；24(7):8023. 5 Ross R.The pathogenesis of atherosclerosis：a perspective for the 1990s〔J〕.Nature，1993；362:8019. 6 Vergnani L，Hatrik S，Ricci F,et al.Effect of native and oxidized lowdensity lipoprotein on endothelial nitric oxide and superoxide production：key role of Larginine availabilitity〔J〕.Circulation,2000；101(11):12616. 7 Boulanger CM，Tanner FC，Bea ML,et al.Oxidized low density lipoprotein induce mRNA expression and release of endothelin from human and porcine endothelium〔J〕.Cir Res,1992；70(6):11917. 8 Aliev G，Bodin P，Burnstock G.Free radical generators cause changes in endothelial and inducible nitric oxide synthases and endothelin1 immunoreactivity in endothelial cells from hyperlipidemic rabbits〔J〕.Mol Genet Metab，1998；63(3):1917. 9 He Y，Kwan WC，Steinbrecher UP.Effects of oxidized low density lipoprotein on endothelin secretion by cultured endothelial cells and macrophages〔J〕.Atherosclerosis，1996；119(1):10718. 10 孫金明,胡壯麗,鄭華英，等.動態(tài)觀察實驗性高脂血癥對血管內(nèi)皮活性物質(zhì)含量及其基因表達(dá)的影響以及DDPH的內(nèi)皮細(xì)胞保護(hù)作用〔J〕.中國藥理學(xué)通報，2001；17(6):67984. 杜仲提取物 綠原酸 金銀花提取物 苦杏仁苷 枇杷葉提取物-熊果酸 大花紫薇提取物-科羅索酸 上禾生物 專注植提 精于高純 基于您對天然產(chǎn)物需求持續(xù)創(chuàng)新
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