綠原酸及其中藥注射劑的安全性問題狀況分析 | 綠原酸及其中藥注射劑的安全性問題狀況分析 |
| 發(fā)布時間:2011-03-21 信息來源:admin 發(fā)布人:admin 點擊次數(shù):2868 |
黃芳華 (國家食品藥品監(jiān)督管理局藥品審評中心, 北京100038) 近些年來,中藥注射劑的安全性問題引起廣泛關(guān)注,不良反應中變態(tài)反應占了很大比重,尋找引起不良反應的原因是亟待解決的問題。綠原酸在眾多的中藥注射劑中存在,有著廣泛的藥理作用,但是它又是一種可疑的致敏物質(zhì),因此,如何考慮綠原酸的利和弊、關(guān)注綠原酸的安全性問題,是研發(fā)者、生產(chǎn)者和審評人員均應關(guān)注的問題。在這種情況下,作者通過文獻調(diào)研,對綠原酸致敏性研究概況進行總結(jié),對其致敏性進行分析,并提出以后需進一步研究的一些問題和建議。 1 綠原酸概況 1. 1 結(jié)構(gòu) 綠原酸( chlorogenic acid, CA) ,分子式C16H18O9 ,相對分子質(zhì)量354130,是由咖啡酸( caffeic acid) 與奎尼酸( quinic acid, 12羥基六氫沒食子酸)生成的縮酚酸,異名咖啡鞣酸,系統(tǒng)名1, 3, 4, 52四羥基環(huán)己烷羧酸2(3, 42二羥基肉桂酸酯) ,化學名32O2咖啡�？崴�( 32O2caffeoylquinic acid) ,是植物體在有氧呼吸過程中經(jīng)莽草酸途徑產(chǎn)生的一種苯丙素類化合物。 綠原酸由奎尼酸和咖啡酸縮合而成,根據(jù)咖啡酰在奎尼酸上的結(jié)合部位和數(shù)目不同,從理論上講,單咖啡�？崴岷投Х弱？崴崴M成的綠原酸異構(gòu)體共有10種,分別為12咖啡酰奎尼酸、32咖啡�？崴�、42咖啡�？崴帷�52咖啡�？崴�、1, 32二咖啡�？崴�、1, 52二咖啡�？崴帷�1,62二咖啡�？崴帷�3, 42二咖啡�？崴帷�3, 52二咖啡�？崴�、4, 52二咖啡酰奎尼酸。但到目前為止,從植物中發(fā)現(xiàn)的綠原酸異構(gòu)體有綠原酸( 32咖啡酰奎尼酸) 、隱綠原酸(Band510) (42咖啡�？崴�) 、新綠原酸(52咖啡酰奎尼酸) 、異綠原酸A (4, 52二咖啡酰奎尼酸) 、異綠原酸B (3, 42二咖啡�？崴�) 、異綠原酸C ( 3, 52二咖啡酰奎尼酸) 、萊薊素( 1,32二咖啡酰奎尼酸) [ 1 ]。 1. 2 理化性質(zhì) 綠原酸半水合物為白色或微黃色針狀結(jié)晶,在110 ℃時變?yōu)闊o水物,與稀鹽酸共熱產(chǎn)生咖啡酸,熔點208 ℃,比旋光度[α]D = 3512°(C = 218) 。綠原酸在25 ℃時水中溶解度約為4% ,易溶于乙醇、丙酮、甲醇等極性溶劑,微溶于醋酸乙酯,難溶于三氯甲烷、乙醚、苯等親脂性有機溶劑。綠原酸是由咖啡酸與奎尼酸形成的酯,其分子結(jié)構(gòu)中有酯鍵、不飽和雙鍵及多元酚3個不穩(wěn)定部分。在從植物提取過程中,往往通過水解和分子內(nèi)酯基遷移而發(fā)生異構(gòu)化。由于綠原酸的特殊結(jié)構(gòu),決定了其可以利用乙醇、丙酮、甲醇等極性溶劑從植物中提取出來,但是由于綠原酸本身的不穩(wěn)定性,提取時不能高溫、強光及長時間加熱。綠原酸的供試液放置于棕色瓶、冰箱(2 ℃)保存時最為穩(wěn)定[ 2 ]。 1. 3 分布 綠原酸在植物中廣泛分布,從高等雙子葉植物到蕨類植物均有報道,但含量較高的植物不多,主要存在于杜仲科、忍冬科忍冬屬Lonicera L. 、菊科蒿屬A rtem isia L. 植物中,包括杜仲、金銀花、向日葵、繼花、咖啡和可可樹等。 1. 4 藥理作用 綠原酸被認為是眾多藥材和中成藥抗菌解毒、消炎利膽的主要有效成分,通常被作為定性甚至定量的指標。 據(jù)報道,綠原酸的主要生物活性有: ①對透明質(zhì)酸酶及葡萄糖262磷酸酶的抑制作用; ②對自由基的清除及抗脂質(zhì)過氧化作用; ③抗誘變作用; ④保肝利膽作用; ④抗菌、抗病毒及解痙等作用。 2 含綠原酸的中藥注射劑概況 在清熱解毒類的中藥注射劑處方中,以下的藥材均含綠原酸:金銀花、忍冬藤、魚腥草、茵陳、梔子等。作者曾對目前已上市的呼吸系統(tǒng)中藥注射劑進行分析,統(tǒng)計了20個復方制劑,藥味出現(xiàn)頻率以金銀花(或其提取物)最高,共有12個,占60% ,魚腥草、梔子等也有較高頻率,說明含有綠原酸類成分的藥味出現(xiàn)頻次較高。 近些年來中藥注射劑的不良反應報道較多,對已上市的17個呼吸系統(tǒng)中藥注射劑進行文獻分析,不良反應最多者為過敏反應,占報道文獻的約90%。而且過敏反應也表現(xiàn)多樣,程度不一,如皮膚瘙癢、皮疹、藥熱、過敏性哮喘、急性肺水腫,嚴重者過敏性休克,直至死亡。 3 綠原酸致敏性研究概況 2006年4月11日在CHKD期刊全文庫以“綠原酸”為關(guān)鍵詞進行檢索,時間范圍為1994～2006年,共檢出583篇,其中藥效5篇,藥代相關(guān)3篇(含一篇與氨芐青霉素作用的藥代相互影響) 、綜述3篇(2篇非針對綠原酸而是針對中藥注射劑的不良反應的綜述) ,無一篇真正綠原酸的毒理研究文獻。2008年9月5日再次檢索,在該庫中共檢出968篇文獻,仍無綠原酸的毒理研究文獻。 檢索國外文獻,目前多為藥效研究報道,如對免疫功能的影響、抗炎作用、抗誘變、心血管、保肝利膽、抗菌、抗病毒等方面。 關(guān)于綠原酸致敏性的研究,國外研究集中在20世紀60年代,此后基本無報道;國內(nèi)則無相關(guān)報道。研究綠原酸致敏性的起因在于暴露于咖啡豆粉塵中的咖啡廠工人經(jīng)常發(fā)生呼吸道哮喘、鼻炎或皮炎,進而引起大家興趣,對引起過敏反應的原因進行了一系列的研究。分析文獻,主要為2個研究小組———加拿大的Freedman研究小組和美國的Layton研究小組對綠原酸的致敏性進行了研究,并在1961～1968年期間發(fā)表了一系列文獻。以后對此問題基本無報道。該兩小組對于綠原酸是否為變應原呈相反的兩方面意見,前者認為是變應原,而后者認為不是變應原。 Freedman等人通過研究認為:綠咖啡豆的水提取液高度致敏,皮膚直接接觸0102～5 mL的水溶液(含5 g·L - 1 )中產(chǎn)生明顯的陽性水皰和紅斑反應,水提取液通過Sephedex G- 25柱進行分離,發(fā)現(xiàn)中間部分可產(chǎn)生強烈的被動轉(zhuǎn)移陽性反應,通過三氯化鐵反應認為,致敏性活性物質(zhì)中存在高濃度酚類化合物。對已知的咖啡中的酚類化合物進行了系統(tǒng)的評價,將可疑化合物注入已知對綠咖啡過敏的10個工人的皮膚中,只有綠原酸產(chǎn)生了陽性反應,在試驗者中1μg的CA足以引起水皰和吞噬細胞突起的紅腫反應。交叉中和試驗則表明,綠咖啡的抗體可被CA中和,試驗者認為該結(jié)果提示CA可能是綠咖啡中的主要過敏原[ 3 ]。因CA廣泛存在于多種植物中, Freedman等人對其他含CA的植物蓖麻子和橙子進行了研究,蓖麻子有致敏性,如呼吸道癥狀、蕁麻疹等,有報道稱對于咖啡粉塵過敏的病人對蓖麻油也產(chǎn)生皮內(nèi)陽性反應,對蓖麻油和綠咖啡過敏的大部分病人,對橙子也產(chǎn)生陽性的皮內(nèi)反應。通過紙色譜和紅外色譜分析方法進行研究,認為CA也是蓖麻油和橙子中的組分, CA可與蓖麻油和橙子水提取物得到完全的交叉中和反應[ 4 ]。對于口服CA常不引起過敏而靜注或吸入引起過敏的現(xiàn)象,經(jīng)過研究表明志愿者或家兔口服給予含綠原酸的濃黑咖啡,血中未檢出CA,但家兔靜注給藥血中則可檢出CA,因此推測CA進入哺乳動物組織通過胃腸道不能直接到達循環(huán)血,可能在腸中破壞或轉(zhuǎn)化[ 5 ] 。對CA的過敏性進一步研究,家兔以CA2弗氏佐劑聯(lián)合物致敏表現(xiàn)出明顯的抗體形成,而僅以CA (不與弗氏佐劑結(jié)合)不產(chǎn)生抗體形成,對致敏的家兔進行皮內(nèi)試驗,可見Arthus型反應,ASA試驗則表明致敏家兔心內(nèi)注射CA攻擊產(chǎn)生不平靜、極度呼吸困難直到死亡, PCA試驗(心內(nèi)注射藥物進行攻擊)則表明當抗血清稀釋度為1∶10, 1, 1∶100,1∶1 000時產(chǎn)生反應,稀釋度為1∶5 000, 1∶1萬不產(chǎn)生應。因CA為小分子物質(zhì),對于其致敏機理認為與磺胺嘧啶、氯胺2T等類似,即是半抗原物質(zhì),進入體內(nèi)與蛋白結(jié)合,而產(chǎn)生致敏活性[ 6 ]。 對CA是否有致敏性持反方觀點的主要為Layton研究小組。他們在猴身上進行試驗, 2只猴子在蓖麻子過敏病人血清被動致敏部位以1%濃度CA進行攻擊或以5%綠咖啡提取固形物溶液進行攻擊,未產(chǎn)生反應,隨后注入蓖麻子蛋白則產(chǎn)生明顯反應;豚鼠身上進行的PCA反應試驗也表明對CA、綠咖啡或脫敏的蓖麻油飲食未產(chǎn)生反應,而以蓖麻油子蛋白和大蕁麻蛋白攻擊可在豚鼠身上立即引起陽性反應,通過這些試驗,Layton等人認為被動轉(zhuǎn)移蓖麻子抗體血清的部位缺乏對CA和綠咖啡的反應,提示CA不是蓖麻子過敏的重要因素[ 7 ]。他們對綠咖啡的過敏性進行了研究,認為對蓖麻子蛋白在1∶10萬稀釋度下臨床皮膚劃痕試驗陽性結(jié)果病人身上,只在2 /9對1∶100稀釋度的綠咖啡提取物表現(xiàn)出強的陽性反應,而對1∶100的重結(jié)晶的綠原酸均未產(chǎn)生明顯的皮膚反應;將敏感病人血清被動轉(zhuǎn)移至猴,對于CCDCA(通過200管反向逆流制備而來)或MSCA (通過綠原酸的無水甲醇可溶部分制備而來)無反應,而對粗綠原酸樣品有反應, 5 mg的綠咖啡的不擴散性的滲出物在所有對留存的綠咖啡過敏的病人的血清均產(chǎn)生強烈的反應[ 8 ]。進一步研究表明,采用化學分析方法如NMR等分析成分,認為CCDCA為CA,因此認為CA不是過敏原,采用法國和加拿大病人抗血清被動轉(zhuǎn)移的P2K試驗,對任何CA樣品的可擴散者不產(chǎn)生反應,但是從綠原酸中分離而來的不擴散性的雜質(zhì)( contami2nant)對綠咖啡過敏者的P2K試驗可產(chǎn)生過敏,因此認為純CA和綠咖啡中的擴散性物質(zhì)不是過敏原,導致過敏者是綠原酸中分離而來的不擴散性的雜質(zhì)( contaminant) [ 9 ]。另外,在志愿者和猴身上進行試驗,志愿者(12個加拿大人和4個法國人)進行PK試驗,皮膚致敏血清以1%的CCD2純化的CA攻擊,未產(chǎn)生反應; 4個加拿大人的血清致敏部位以1%商購的CA則產(chǎn)生明顯反應; 7個以加拿大人血清被動致敏者,當1%綠咖啡殘留物進行皮試時出現(xiàn)明顯的水皰和發(fā)紅。 在猴身上以加拿大人或法國人咖啡過敏者的血清被動致敏部位對CCD2純化的CA或18 h綠咖啡滲出液不產(chǎn)生反應,通過以上試驗Lyaton等認為真正致敏原是高分子物質(zhì)[ 10 ]。對以上二者的分歧所帶來的矛盾[ 11 ] , Layton L L認為在其研究中沒有證據(jù)表明CA以半抗原形式存在,與人血清蛋白或牛血清蛋白甚至綠咖啡蛋白結(jié)合形成復合物而致敏[ 12 ]。但Freedman S O推測為:兩者試驗樣品不一致是導致結(jié)果不一致的重要原因,并再次確定在他們所進行的試驗中得到陽性結(jié)果,采用Layton L L的樣品(CCD柱制備)重復其試驗也得到與之相同的結(jié)果,認為CA常來源于咖啡和其他植物來源,在常溫下暴露于空氣中易氧化,而且指出他們的試驗中只是說明CA是變應原,但是沒有稱CA是唯一的變應原[ 13 ]。 由于中藥注射劑的特殊性,本中心將“含綠原酸中藥注射劑的安全性問題”作為第一批與申辦人共同研究的“共性問題”進行研究。網(wǎng)上的討論意見中有進行了綠原酸的過敏試驗研究,認為豚鼠主動過敏試驗和大鼠被動過敏試驗結(jié)果均為陰性。 4 對綠原酸的致敏性分析 通過以上文獻綜合分析,對于綠原酸是否為變應原尚無確切定論。首先,缺乏系統(tǒng)的試驗,從上世紀60年代進行的有爭議的兩方面試驗的爭論焦點,可看出其中存在很多問題,如受試物的純度問題、是否為其他成分的影響、試驗方法有所不同等,可能是導致雙方結(jié)果不一致的原因。另一方面,這些試驗進行時間均較早,隨著研究手段、試驗方法、儀器設備均有較大進步,卻對綠原酸的致敏性無相應系統(tǒng)、深入的研究。 在這種情況下,僅根據(jù)一方面的觀點,簡單認為綠原酸有或無過敏性均是不慎重的。其次,變態(tài)反應是一種復雜的反應,涉及多種因素,影響多個系統(tǒng)。現(xiàn)有的過敏試驗有其局限性,如目前考察過敏性多采用全身主動過敏試驗(ASA ) 和被動皮膚過敏試驗( PCA) ,根據(jù)目前的研究狀況,這些試驗方法本身有一定局限性,不能做到完全預測致敏性,比如說有些在臨床發(fā)現(xiàn)明確有致敏性的樣品進行該試驗結(jié)果卻為陰性,或是在一些情況下需刺激強度較高時才能得出陽性反應。另一方面,根據(jù)目前不良反應情況分析,變態(tài)反應的發(fā)生與多種因素有關(guān),如機體狀態(tài)、過敏體質(zhì)等因素有關(guān),對于某一個藥,不是所有的人都會發(fā)生過敏反應,發(fā)生的嚴重程度也不一致。而目前仍缺乏有效地預測過敏性的試驗方法、缺乏反映過敏相關(guān)的各種免疫環(huán)節(jié)的試驗。再次,從綠原酸的結(jié)構(gòu)、存在形式、理化性質(zhì)分析,存在致敏的可能。綠原酸為次生代謝產(chǎn)物,有眾多異構(gòu)體存在,綠原酸多從植物中提取而來,在提取過程中可能有一些同類物質(zhì)或其他雜質(zhì),綠原酸本身又不穩(wěn)定,在提取、純化、貯存過程中可能會發(fā)生變化,因此對含綠原酸的中藥注射劑而言,難以肯定其無致敏性。 而且,從目前中藥注射劑不良反應發(fā)生的現(xiàn)狀分析,無法排除綠原酸無致敏性。因為在清熱解毒類藥物中變態(tài)反應發(fā)生率較高,這其中有很多含有綠原酸。在目前中藥注射劑的安全性受到關(guān)注的背景下,在缺乏研究的情況下應慎重對待。 綜上分析,目前沒有確切的證據(jù)說明或排除綠原酸是變應原(即具有致敏性) 。 5 需進一步明確的問題及建議 如前所述,目前無法排除綠原酸不是變應原,而中藥注射劑成分復雜,綠原酸本身穩(wěn)定性又較差,因此應用時可能帶來安全性擔憂。在這種情況下,建議加強綠原酸及相關(guān)中藥注射劑的研究,研究開發(fā)時應慎重考慮,對已上市的中藥注射劑也應繼續(xù)進行深入研究。 進一步加強對綠原酸的基礎研究。加強成分研究,如含量、異構(gòu)體、同系物/同類型物質(zhì)的研究,進行系統(tǒng)、深入的毒理學研究。 密切關(guān)注中藥注射劑尤其是含有綠原酸的中藥注射劑的安全性問題,加強研究。需加強立題時的考慮。中藥注射劑安全性問題是中藥注射劑開發(fā)時需首要關(guān)注的問題。此種劑型與傳統(tǒng)中藥的用藥方法有極大差異,已不再等同于傳統(tǒng)中藥,根據(jù)目前應用狀況分析注射劑的不良反應比口服制劑明顯增加,因此,中藥注射劑的立題應考慮全面,需定位于急重癥,根據(jù)研究結(jié)果,對風險2獲益進行充分權(quán)衡,考慮獲益是否能超過風險。 中藥注射劑應加強成分研究,在含綠原酸成分的情況下,因綠原酸本身的結(jié)構(gòu)、形成特點和理化性質(zhì),應對綠原酸的含量、其他的成分尤其是同類物質(zhì)進行研究,充分考慮可能帶來不良反應的因素。 加強毒理研究,進行毒理研究時應考慮全面,如急毒、長毒等常規(guī)毒理學研究應注意觀察仔細和全面,要加強與過敏反應相關(guān)的毒理學研究,尤其是對有可疑致敏者,應加強過敏反應試驗研究。由于常規(guī)的全身主動過敏試驗(ASA)和被動皮膚過敏試驗( PCA)有其局限性,因此除常規(guī)的過敏試驗外,建議進行與過敏反應相關(guān)的免疫因子、免疫過程等影響的研究。 加強對變態(tài)反應的研究,尤其是中藥注射劑,尋找合適、敏感的方法來研究致敏性及其發(fā)生機理,為注射劑的開發(fā)和臨床應用提供充分的信息。 [參考文獻] [ 1 ] 尉 芹,馬希漢. 綠原酸及其提取分離方法評述[ J ]. 中成藥,2001, 23 (2) : 135. 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