高效液相法測定平喘貼中苦杏仁苷的含量 | 高效液相法測定平喘貼中苦杏仁苷的含量 |
| 發(fā)布時(shí)間:2011-03-25 信息來源:admin 發(fā)布人:admin 點(diǎn)擊次數(shù):2408 |
作者：陳求芳,李華,周毅生 【摘要】 目的建立測定平喘貼中苦杏仁苷含量的 方法。方法 采用高效液相色譜法，用Inertsil ODS-3 C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，以甲醇-1‰磷酸(體積比21∶79)為流動(dòng)相；流速為1.0 mL·min-1，檢測波長為210 nm。結(jié)果 在0.12～1.2 μg范圍內(nèi)，峰面積與進(jìn)樣量的線性關(guān)系良好（r=0.9998），加樣回收率為97.32％，RSD為1.07％。結(jié)論該法簡便、可靠、準(zhǔn)確，結(jié)果滿意。 【關(guān)鍵詞】 HPLC；平喘貼；苦杏仁苷；含量測定 平喘貼是以麻黃、杏仁等中藥制成的外用制劑，具有宣肺散寒平喘、清熱化痰止咳之功效，用于治療 止咳平喘等癥�？嘈尤受帐强嘈尤手械闹饕行С煞郑�1，2］。本文采用反相高效液相色譜法測定平喘貼中苦杏仁苷的含量，結(jié)果表明該法簡便、準(zhǔn)確、靈敏，可作為苦杏仁藥材及其制劑的質(zhì)量監(jiān)控方法。 1 儀器與試藥
Agilent-1100高效液相色譜儀，VWD檢測器及其配套色譜工作站；苦杏仁苷對照品由 中國藥品生物制品檢定所提供，批號：820-200201；平喘貼由湖北中醫(yī)學(xué)院 分析 測試中心提供，所用蒸餾水為重蒸水；其他試劑均為分析純。 2 方法與結(jié)果 2.1 色譜條件
色譜柱：Inertsil ODS-3 C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流動(dòng)相：甲醇-1‰磷酸(體積比21∶79)，流速：1.0 mL·min-1，柱溫：30 ℃，檢測波長：210 nm。 2.2 對照品溶液的制備
精密稱取在105 ℃干燥至恒重的苦杏仁苷對照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.12 mg的對照品溶液。 2.3 供試品溶液的制備 刮取貼膏1.0 g，精密稱定，置燒瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定重量，回流提取1 h，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液2 mL，置中性氧化鋁柱（100～200目，2 g，內(nèi)徑1 cm）上，用體積分?jǐn)?shù)為50%的甲醇洗脫，收集洗脫液約9 mL，置10 mL容量瓶中，加磷酸1滴，用體積分?jǐn)?shù)為50%的甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm）濾過，取續(xù)濾液，即得。 2.4 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 分別精密吸取對照品溶液6 μL，供試品溶液5 μL，注入液相色譜儀中測定。結(jié)果苦杏仁苷在20 min內(nèi)出峰，而且與前后的峰均有較好的分離， 理論 板數(shù)在3 000以上。見圖1。 按照本品制劑中的工藝制得除去苦杏仁的空白制劑，與供試品溶液色譜和苦杏仁對照品色譜比較，結(jié)果表明陰性樣品無干擾。 1.苦杏仁苷 A.對照品 B.樣品 C.空白陰性對照 圖1 苦杏仁苷對照品（A）、供試品（B）和空白陰性對照（C）的色譜圖（略） Fig.1 Chromatograms of amygdaloside (A)，sample and negative control without amygdaloside (C) 2.5 線性關(guān)系考察
分別精密吸取“2.2”項(xiàng)下制備的對照品溶液1，4，6，8，10 μL，進(jìn)樣測定，以峰面積（A）為縱坐標(biāo)，對苦杏仁苷含量（m）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為：A=1323.276 m-9.71，r=0.9998，結(jié)果表明苦杏仁苷在0.12～1.2 μg的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。 2.6 精密度試驗(yàn)
精密吸取“2.2”項(xiàng)下制備對照品溶液6 μL，進(jìn)樣測定5次，測定峰面積，結(jié)果RSD=0.71%（n=5），表明精密度較好。 2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)
分別精密吸取同一份供試品溶液5 μL，于0、3、6、9、24 h進(jìn)樣，測定其苦杏仁苷峰面積積分值，RSD=1.16 %(ｎ＝5)，表明樣品在24 h內(nèi)穩(wěn)定。 2.8 重復(fù)性試驗(yàn)
取同一批樣品，精密稱定5份，按“2.3”項(xiàng) 方法 制備，進(jìn)樣測定。結(jié)果平均含量為9.488 mg·g-1，RSD=1.15%(n=5)，表明方法重現(xiàn)性較好。 2.9 加樣回收試驗(yàn)
取已知含量的樣品約0.3 g，精密稱定，分別精密加入苦杏仁苷對照品溶液（1.0 mg·mL-1）3 mL，依法制備，測定并計(jì)算 回收率，平均回收率為97.32％，RSD=1.07％，結(jié)果見表1。 表1 苦杏仁苷加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（略） Tab.1 Recovery of assay(n=5) 2.10 樣品測定
精密稱取5批樣品，分別按“2.3”項(xiàng)方法制備，測定，結(jié)果見表2。 5批樣品平均含量為13.293 mg/張�？紤]到實(shí)驗(yàn)室樣品的制備與工廠大規(guī)模生產(chǎn)的差異、藥材產(chǎn)地、采收季節(jié)的差異，故把平均含量下浮20%，則含量限度可暫定為：本品含苦杏仁苷應(yīng)不得低于10.6 mg/張。 表2 樣品測定結(jié)果（略） Tab.2 Determination of the sample 3 討論 3.1 供試品制備方法的考察 分別精密吸取2 mL甲醇溶液置1.5、2、2.5、3 g中性氧化鋁柱上，用體積分?jǐn)?shù)為50%的甲醇洗脫，收集10 mL洗脫液，加磷酸1滴，測定，結(jié)果顯示2 g的氧化鋁效果最佳。分別精密吸取2 mL甲醇溶液置2 g中性氧化鋁柱，用體積分?jǐn)?shù)為50%的甲醇洗脫，分別收集5、10、15、20、25 mL洗脫液，加磷酸1滴，測定，結(jié)果表明洗脫液10 mL基本洗脫完全。并且考察不同提取時(shí)間，提取方法對苦杏仁苷含量的 影響 。結(jié)果采用回流提取1 h效果較好。 3.2 流動(dòng)相選擇 曾以不同比例的甲醇-水、乙腈-水、甲醇-乙腈-水作為流動(dòng)相，結(jié)果發(fā)現(xiàn)流動(dòng)相中加入乙腈峰形變差，而苦杏仁苷的龍膽雙糖部分有較多的醇羥基，可加入H3PO4起離子抑制作用，甲醇-1‰磷酸溶液體系中苦杏仁苷與相鄰峰達(dá)到基線分離，保留時(shí)間適宜，故選擇其作為流動(dòng)相。 3.3 柱溫選擇 曾考察柱溫為25 ℃、30 ℃，結(jié)果發(fā)現(xiàn)柱溫30 ℃時(shí)，苦杏仁苷和干擾成分可達(dá)到基線分離。復(fù)方中其他成分對苦杏仁苷測定無干擾。 【 參考 文獻(xiàn) 】 �。�1］ 楊書斌，劉青，孫立立，等.HPLC測定苦杏仁飲片中苦杏仁苷的含量［J］.中成藥，2006，28（10）：1452-1454. �。�2］ 鐘文，唐新，謝培德，等.HPLC測定止帶消糜栓中苦杏仁苷的含量［J］.中成藥，2006，28（5）：766-767. 杜仲提取物 綠原酸 金銀花提取物 苦杏仁苷 枇杷葉提取物-熊果酸 大花紫薇提取物-科羅索酸 上禾生物 專注植提 精于高純 基于您對天然產(chǎn)物需求持續(xù)創(chuàng)新 |
