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中華鱉(Trionyx sinensis)具有很高的營(yíng)養(yǎng)和滋補(bǔ)價(jià)值。2O世紀(jì)80年代以來(lái)，不斷擴(kuò)大的市場(chǎng)需求刺激了養(yǎng)鱉業(yè)的迅猛發(fā)展。人工控溫、高密度集約化的養(yǎng)殖方式改變了鱉的自然生活習(xí)性，導(dǎo)致其抗病能力減弱。與“野生鱉”(仿生鱉或池塘鱉)相比，溫室鱉的肌肉品質(zhì)發(fā)生了諸多變化。如肌肉膽固醇含量升高，蛋白質(zhì)、風(fēng)味氨基酸、必需氨基酸、肌肉感官色度，裙邊的食用黏度、總膠原蛋白和可溶性膠原蛋白含量降低，肝臟質(zhì)量和四肢脂肪沉積增加等。]。野生鱉品質(zhì)雖好，但因其生長(zhǎng)緩慢，價(jià)格昂貴。有鑒于此，能否通過(guò)營(yíng)養(yǎng)途徑提高“野生鱉”的生長(zhǎng)性能并進(jìn)一步改善其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，值得深入研究。

中草藥是我國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)數(shù)千年證明的中華瑰寶，具有天然、高效、毒副作用小，資源豐富等特點(diǎn)，同時(shí)兼具藥用和營(yíng)養(yǎng)雙重作用。綠原酸(chloro— genic acid，CGA)是許多中草藥如杜仲、金銀花和茵陳等的主要有效成分之一，具有清除自由基、抗菌消炎、抗病毒、降糖、降脂、保肝利膽等多種功效。已有研究表明，杜仲能增強(qiáng)機(jī)體免疫力和抗氧化能力，改善動(dòng)物生產(chǎn)性能_4。作為杜仲主要藥效成分之一的綠原酸，在中華鱉上的研究與應(yīng)用迄今未見(jiàn)報(bào)道。本試驗(yàn)擬探討自然溫度條件下綠原酸對(duì)人工養(yǎng)殖中華鱉增重率、裙邊比和體脂比，裙邊和肌肉膠原蛋白含量，肌肉水分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪和膽固醇含量，以及血漿超氧化物歧化酶(superoxide dis． mutase，SOD)、過(guò)氧化氫酶(catalase，cAT)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(glutathione peroxidase，GSH．Px) 的影響，為利用營(yíng)養(yǎng)調(diào)控手段增強(qiáng)中華鱉抗氧化能力并提高其生產(chǎn)性能，促進(jìn)中華鱉的健康養(yǎng)殖提供依據(jù)。

1 材料和方法

1．1 試驗(yàn)動(dòng)物與日糧

試驗(yàn)鱉購(gòu)于四川省瀘州市西南化工研究設(shè)計(jì)院生物技術(shù)研究所。購(gòu)回的中華鱉飼養(yǎng)于容積為 60 cm×45 cm×45 cm 玻璃缸中，每缸隨機(jī)投放4 只，水深15 cm，自然水溫(15~29℃)。每天16：00 定時(shí)排污，排污后喂食。飼糧選用四川通威集團(tuán)生產(chǎn)的181甲魚(yú)配合飼糧(表1)。用溫水將飼糧揉和成團(tuán)，揉搓成1～2 cm 的長(zhǎng)條，以2％投食率定量投喂在缸中水泥食臺(tái)上。在此條件下馴養(yǎng)2周后開(kāi)始試驗(yàn)，試驗(yàn)時(shí)間為60 d。

1．2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

選擇平均體重為(140．78±24．18)g的健康中華鱉160只，隨機(jī)分成5組(A組～E組)，每組32 只，設(shè)4個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)8只(將8只鱉隨機(jī)分投放于2個(gè)玻璃缸中，每缸4只)。在基礎(chǔ)飼糧中分別添加0(A組)、100(B組)、200(C組)、400(D組)和 800 mg／kg(E組)綠原酸。飼喂60 d后將各組鱉稱重，計(jì)算增重率。斷頭取血，0．5％肝素鈉抗凝， 2 000 r／min離心10 min制備血漿，測(cè)定血漿SOD、 CAT和GSH—Px。剪下裙邊，解剖取四肢脂肪體和四肢腿部肌肉，分別測(cè)定裙邊比、體脂比，裙邊和肌肉膠原蛋白含量，肌肉水分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪和膽固醇含量。

1．3 主要試劑

綠原酸(產(chǎn)品純度98％)購(gòu)于成都農(nóng)興生物科技有限公司；GSH—Px、SOD、CAT、羥脯氨酸和膽固醇檢測(cè)試劑盒購(gòu)于南京建成生物工程研究所。

1．4 測(cè)定指標(biāo)與方法

增重率(％)=(試驗(yàn)?zāi)┲匾辉囼?yàn)初重)X 100／試驗(yàn)初重；體脂比(％)=四肢脂肪體重×100／體重；裙邊比(％)=裙邊重X 100／體重。肌肉水分含量的測(cè)定：采用105℃烘干失重法測(cè)定n。 ；粗脂肪含量的測(cè)定：索氏抽提法_】。 ；粗蛋白質(zhì)含量的測(cè)定：采用凱氏定氮法口。；GSH．Px、SOD、 CAT、羥脯氨酸和膽固醇檢測(cè)按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。GSH．Px單位為活力單位，其定義為0．1 mL血漿在37 ℃ 反應(yīng)5 rain使反應(yīng)液中GSH 降低 1~mol／mL為1個(gè)活力單位。

1．5 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)結(jié)果用“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，采用SPSS 13．0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析和統(tǒng)計(jì)，先對(duì)數(shù)據(jù)作單因素方差分析(ANOVA)，若組間差異顯著，再用Dun． can氏多重比較，P<0．05表示差異顯著，P<0．01 表示差異極顯著。

2 結(jié)果與分析

2．1 綠原酸對(duì)中華鱉生產(chǎn)性能的影響

由表3可知，在飼糧中添加綠原酸對(duì)中華鱉的生長(zhǎng)具有明顯的促進(jìn)作用，其中c組的增重率顯著高于對(duì)照組(A組)(P<0．05)，各試驗(yàn)組(B組～E 組)問(wèn)無(wú)顯著差異(P>0．05)。各試驗(yàn)組之間或各試驗(yàn)組與對(duì)照組之間的裙邊比、體脂比、肌肉水分和肌肉粗脂肪含量無(wú)顯著差異(P>0．05)，但裙邊比有增大的趨勢(shì)。各試驗(yàn)組裙邊膠原蛋白含量均顯著高于對(duì)照組(P<0．05)，C組、D組和E組與對(duì)照組達(dá)到極顯著差異水平(P<0．01)。對(duì)于肌肉膠原蛋白含量，c組和D組顯著高于對(duì)照組(P<0．05)，但B 組和E組與對(duì)照組無(wú)明顯差異(P>0．05)。D組肌肉粗蛋白質(zhì)含量顯著高于對(duì)照組(P<0．05)。C組和 D組肌肉膽固醇含量均顯著低于對(duì)照組(_P<0．05)。

2．2 綠原酸對(duì)中華鱉抗氧化能力的影響由表4可知，C組和D組GSH．Px活性顯著或極顯著高于對(duì)照組(Pc<0．05，P。<0．01)，B組和 E組與對(duì)組照無(wú)明顯差異(P>0．05)。B組和C組 SOD活性極顯著高于對(duì)照組(P0．05)。對(duì)CAT活性，僅c組極顯著高于對(duì)照組(P<0．01)，B組、D 組和E組與對(duì)照組無(wú)顯著差異(P>0．05)�？傮w上看，中華鱉血漿幾種抗氧化酶(GSH．Px、SOD和CAT)的活性都呈現(xiàn)出隨綠原酸添加劑量的增加而先升高后降低的規(guī)律，但添加高劑量的綠原酸(800 mg／kg)進(jìn)行為期60 d的試驗(yàn)(E組)后，這幾種抗氧化酶的活性仍高于對(duì)照組(P>0．05)

3 討論

目前，大部分報(bào)道集中于杜仲及其提取物對(duì)動(dòng)物生產(chǎn)性能的影響。添加4％ 杜仲葉粉、0．15％ 杜仲純粉可顯著提高草魚(yú)的增重率(P< 0．05) ；添加0．15％杜仲葉提取物顯著提高了異育銀鯽對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化率(P<0．05)，并促進(jìn)其生長(zhǎng)(P> 0．05)l7 ；添加4％或6％ 杜仲葉粉可顯著促進(jìn)鯉魚(yú)的生長(zhǎng)(P<0．05)_g ；添加1 500 mg／kg杜仲提取物對(duì)奧尼魚(yú)生長(zhǎng)也有顯著的促進(jìn)作用(P< 0．05)l】 。而有關(guān)綠原酸對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物生產(chǎn)性能的影響還未見(jiàn)報(bào)道。因試驗(yàn)期間水溫較低(15～29℃)，雖投喂人工配合飼糧，中華鱉的生長(zhǎng)速度也遠(yuǎn)低于人工控溫養(yǎng)殖的水平口。但各試驗(yàn)組的增重率均高于對(duì)照組(P>0．05)，其中C組的增重率與對(duì)照組達(dá)到了顯著差異的水平(P<0．05)，證實(shí)綠原酸 對(duì)中華鱉具有明顯地促生長(zhǎng)作用。綠原酸促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)的作用機(jī)理可能是：1)綠原酸具有腎上腺素類似功能，可提高中樞神經(jīng)系統(tǒng)的興奮性以及胃腸道括約肌的收縮功能，促進(jìn)動(dòng)物對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收和利用；2)綠原酸具有廣譜抗菌作用，使動(dòng)物機(jī)體較好地抵御病原微生物的侵襲，保持良好的機(jī)能狀態(tài)，有利于生長(zhǎng)；3)綠原酸可能具有誘食作用 ；4)綠原酸可能誘導(dǎo)肝細(xì)胞產(chǎn)生IGF—I，促進(jìn)腺體細(xì)胞的生長(zhǎng)，增加生長(zhǎng)激素分泌|1引。這些推測(cè)尚需試驗(yàn)論證。

已有研究表明，杜仲或其提取物對(duì)養(yǎng)殖魚(yú)類肌肉的品質(zhì)有明顯影響。添加1％杜仲皮、1％杜仲汁均可顯著地降低異育銀鯽肌肉的失水率(P< 0．05)，提高羥脯氨酸含量(P杜仲皮<0．01，P杜仲汁< 0．05) ；添加0．15％ 杜仲葉提取物顯著提高了異育銀鯽肌肉粗蛋白質(zhì)含量(P<0．05)，并有降低異育銀鯽肌肉中粗脂肪含量的趨勢(shì)(P>0．05)E73；在鯉魚(yú)飼糧中添加6％ 的杜仲葉粉可提高肌肉中粗蛋白質(zhì)含量24．1％ ，降低粗脂肪含量16．7％ (P< 0．05)。。；添加0．15％杜仲葉提取物，可顯著提高草魚(yú)肌肉粗蛋白質(zhì)含量(P<0．05)，添加4％杜仲葉粉、0．10％和0．15％杜仲葉提取物均可提高草魚(yú)肌肉膠原蛋白含量(P<0．05)l6]。據(jù)本試驗(yàn)，在飼糧中添加200和400 mg／kg綠原酸，極顯著或顯著提高了裙邊和肌肉膠原蛋白含量(P裙邊< 0．01， P肌肉<0．05)，添加400 mg／kg綠原酸顯著提高了肌肉粗蛋白質(zhì)含量(P<0．05)，與上述報(bào)道一致。各試驗(yàn)組體脂比和肌肉粗脂肪含量與對(duì)照組均無(wú)顯著性差異(P>0．05)，說(shuō)明綠原酸對(duì)中華鱉體的脂肪沉積無(wú)明顯影響。

動(dòng)物機(jī)體內(nèi)存在一套完整有力的抗氧化系統(tǒng)，其中包括酶類和非酶類清除機(jī)制。酶類系統(tǒng)主要包括GSH—Px、SOD和CAT等。對(duì)超氧陰離子自由基、羥自由基、過(guò)氧化氫等的清除主要由SOD、 CAT、GSH—Px等酶促系統(tǒng)的活性增強(qiáng)來(lái)完成。

SOD能夠歧化超氧陰離子自由基形成過(guò)氧化氫，過(guò)氧化氫通過(guò)GSH．Px和CAT分解成水和氧氣，避免活性氧對(duì)細(xì)胞的傷害。GSH—Px還能使不飽和脂肪酸氧化產(chǎn)生ROOH 轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的醇，從而阻止過(guò)氧化物對(duì)細(xì)胞的損害。綠原酸是一種有效的酚型抗氧化劑，能有效清除啟動(dòng)脂質(zhì)過(guò)氧化的引發(fā)劑，從而起到抑制脂質(zhì)過(guò)氧化的作用l1引。據(jù)本試驗(yàn)，在飼糧中添加200 mg／kg綠原酸顯著地增強(qiáng)了GsH— Px、SOD 和CAT 的活性(PGsH < 0．05，PsoD< 0．01，PcAT<0．01)，添加400 mg／kg綠原酸也顯著提高了GSH．Px和SoD 的活性(PGsHn< 0．01， P oD綠原酸可通過(guò)提高抗氧化酶活性來(lái)抑制脂質(zhì)過(guò)氧化作用，從而增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化能力。也有研究發(fā)現(xiàn)，1％杜仲葉、1％杜仲汁可顯著提高異育銀鯽血清SOD活性(P<0．05)；4％杜仲葉粉、0．15％杜仲純粉、0．10％或0．15％杜仲葉提取物顯著提高了草魚(yú)血清s0D 活性(P< 0．05) 。杜仲或其提取物的抗氧化作用可能與其富含綠原酸密切相關(guān)。

4 結(jié)論

① 添加200 mg／kg綠原酸能顯著促進(jìn)中華鱉的生長(zhǎng)。

② 添加200、400 mg／kg綠原酸能顯著提高中華鱉裙邊和肌肉膠原蛋白的含量，并顯著降低肌肉膽固醇水平。

③ 添加200、400 mg／kg綠原酸能顯著提高中華鱉的抗氧化能力。

④ 添加200~400 mg／kg綠原酸能增強(qiáng)中華鱉的抗氧化能力并改善其生產(chǎn)性能。 

杜仲提取物   綠原酸  金銀花提取物  苦杏仁苷  枇杷葉提取物-熊果酸    大花紫薇提取物-科羅索酸

  淫羊藿苷  二氫楊梅素  獐牙菜苦苷

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