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【摘要】  目的考察超濾法純化金銀花提取液的最佳條件。方法 采用超濾法（分子截留值5 000），采用高效液相色譜法測定綠原酸的含量，篩選超濾壓力、藥液流速、循環(huán)時間3個因素的最佳條件。結(jié)果 壓力控制在0.05～0.07 MPa，循環(huán)流速控制在2 d/s左右，循環(huán)時間控制在2 h內(nèi)，最終純化液干浸膏中綠原酸高達44.10 mg/g.。結(jié)論 本法是純化金銀花藥材及其制劑的一種快速有效的方法。

【關(guān)鍵詞】  超濾法；金銀花；綠原酸；純化條件

　　超濾法是20世紀60年代興起的一項膜分離新技術(shù)。國內(nèi)已有人將超濾法運用到金銀花的提取中，以超濾法與醇沉法相比較,實驗結(jié)果顯示70%醇沉法較超濾法得到的提取物多，但綠原酸得率低，超濾法較水提醇沉法能更有效地保留有效成分［1］。

　　綠原酸分子量為354.3，采用超濾(分子量截留值5 000)可以除去其中的多糖、蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)。本實驗對高速離心后的水提液進行超濾，用高效液相色譜法測定超濾液中綠原酸含量，以確定超濾程度，避免有效成分的損失。

　　1  儀器與試藥

　　中空纖維超濾膜實驗室小設備（北京旭邦膜設備有限責任公司）；RB��15蠕動泵（天津紡織工學院膜技術(shù)工程公司機械廠）；中空纖維超濾柱CLW��003（聚醚砜，50 mm×300 mm，pH值2～13，截留分子量5 000）（北京旭邦膜設備有限責任公司）；美國Agilent1100液相色譜儀系統(tǒng)；AL104型電子天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）。

　　綠原酸對照品（中國生物制品檢定所提供，批號110753－200212），甲醇、乙腈均為色譜純試劑，磷酸為分析純試劑，水為超純水。藥材購自江蘇省藥材公司，由中國藥科大學中藥學院生藥學鑒定室鑒定為忍冬科植物山銀花Lonicera confusa DC.的干燥花蕾或帶初開的花科。

　　2  實驗方法

　　2.1  綠原酸含量的測定

　　2.1.1  對照品溶液的制備  　　精密稱取在50 ℃真空干燥至恒重的綠原酸對照品5 mg，置10 mL棕色量瓶中，加體積分數(shù)為50%的甲醇溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻；精密量取1 mL，置10 mL棕色量瓶中，加體積分數(shù)為50%的甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得(每1 mL中含綠原酸50 μg)。因綠原酸受熱見光易分解，宜用棕色量瓶貯存并置4 ℃冰箱備用。

　　2.1.2  色譜條件  色譜柱YMC�睵ack ODS柱（250 mm×4.6 mm）；柱溫：25 ℃；流動相：乙腈��0.4%磷酸（體積比13∶87）；流速為1 mL/min；檢測波長：327 nm。

　　2.1.3  標準曲線的制備  精密吸取對照品溶液(50.10 μg/mL)1,5,10,20,40 μL分別注入液相色譜儀，以綠原酸對照品的量為橫坐標(x)，以綠原酸峰面積為縱坐標(y)，計算回歸方程為：y=158.69x + 2.1483，r=0.99998。結(jié)果表明綠原酸在0.0501～2.0040 μg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

　　2.1.4  樣品測定  精密吸取樣品溶液1 mL于10 mL量瓶中，相應溶劑定容，搖勻，采用隨行標準法。

　　2.1.5  供試品溶液的制備  提取液經(jīng)0.45 μm濾膜濾過，即可。

　　2.2  超濾儀的使用

　　2.2.1  初用時的前期處理

　　①將超濾組件內(nèi)的保護液放掉，儲液箱內(nèi)加入清洗水，水壓不超過0.15 MPa，進水通過超濾組件經(jīng)濃縮液口和超濾液口排出，不得小于10 min。

　　②采用質(zhì)量分數(shù)0.2%～0.5%的氫氧化鈉溶液循環(huán)清洗30 min。清洗時濃縮液口排液量應稍大于超濾液口的排液量。

　�、壅麴s水清洗超濾組件，至少40 min。

　2.2.2  運行  樣品（經(jīng)高速離心后）從料液槽中經(jīng)蠕動泵輸入中空纖維超濾柱，其中的大分子雜質(zhì)從濃縮液出口回到原樣品料液槽中，而小分子藥液則在壓力驅(qū)動下透過超濾膜，從中空纖維外腔的透過液出口流出。如此反復循環(huán)，直到達到分離和濃縮要求。超濾過程中，壓力通過調(diào)壓閥和蠕動泵的轉(zhuǎn)速來控制，流量通過蠕動泵的轉(zhuǎn)速調(diào)節(jié)鈕控制。超濾完畢，用蒸餾水等壓沖洗（關(guān)閉超濾液出口）數(shù)次，至達到要求。

　　2.2.3  清洗  每次運行完畢后，應對整個超濾系統(tǒng)進行清洗：用質(zhì)量分數(shù)為0.2%～0.5%的NaOH溶液,浸泡2 h，循環(huán)清洗1 h;質(zhì)量分數(shù)為0.2%～0.5%的HCl溶液，浸泡2 h，循環(huán)清洗1 h;用純水清洗至排出液pH值為6～7。

　　洗滌過程中可正、反向交替洗滌，如果污染較嚴重則用質(zhì)量分數(shù)為0.1%的過氧化氫進行清洗。

　　2.3  超濾條件的確定

　　在超濾設備已經(jīng)確定的情況下，可調(diào)整的操作條件主要有操作壓力、溫度、時間、循環(huán)流速等［2］。

　　2.3.1  操作壓力的確定  當操作壓力較低時，膜阻可近似為常數(shù)，此時膜通量與膜兩側(cè)的壓力差成正比，壓力過低，通量過低，純化效率低。隨著操作壓力的增加，膜通量增加，純化效率提高。但當操作壓力過高時，由于膜的結(jié)構(gòu)比較疏松，這樣會使膜產(chǎn)生壓實或增厚，其通道變窄，膜阻增大，使溶質(zhì)對流遷移到膜表面的速度增大，從而部分地或完全地抵消了錯流流動的剪切力所產(chǎn)生的在膜表面沉淀的溶質(zhì)的遷移，膜通量下降。

　　通過實驗得出操作壓力對流速影響的曲線見圖1。從圖1可見，當操作壓力在0.05～0.07 MPa時，濃縮液的流速是最快的。

　　圖1  操作壓力對流速的影響（略）

　　Fig.1  The effect of operation pressure to flow rate

　　2.3.2  循環(huán)流速的確定  通常操作壓力及溫度一定時，超濾循環(huán)液流速對膜通量的影響十分顯著。低流速時，大分子物質(zhì)趨向于在膜表面沉積，從而增加了濃差極化及凝膠層的形成，此時濃差極化阻力以及凝膠層的阻力遠遠大于膜阻，膜通量主要受濃差極化及凝膠層的控制。

　　因此，為減少濃差極化及凝膠層的影響，在條件允許的情況下，應盡可能地提高循環(huán)流速。通過實驗，選取循環(huán)流速 2d/s或偏大一些，見圖2。

　　2.3.3  循環(huán)時間的確定  從圖3可看出，隨著時間的增多，超濾液不斷透過，濃縮液中大分子雜質(zhì)量也在不斷地提高，2 h之后，濃縮液流速下降迅速。所以為了提高純化效率，節(jié)約操作時間，延長設備使用壽命，超濾2 h即可。

　　圖2  超濾液流速的確定（略）

　　Fig.2  Determination of flow rate of ultrafitration

　　圖3  循環(huán)時間的確定（略）

　　Fig.3  Determination of circle time

　　3  結(jié)果與討論

　　3.1  本實驗選用分子量截留值為5 000的超濾膜，最終工藝定為超濾設備壓力控制在0.05～0.07 MPa，循環(huán)流速控制在2 d/s左右，將原藥材100 g，水煎煮后合并提取液，高速離心后，進行超濾，收集超濾液。濃縮干燥，測最終純化后提取物干膏得率為6.12%，其中綠原酸為44.10 mg/g。

　　3.2  文獻［3,4］報道超濾法較醇沉法更能有效地保留有效成分,并能提高口服液的穩(wěn)定性和澄明度。文獻報道中多選用分子量截留值為10 000的超濾膜,綠原酸得率為95.37%［1］。我們發(fā)現(xiàn)藥物中大部分有效成分分子量皆小于5 000,故采用5 000分子量的超濾膜,結(jié)果純化效果更佳，實驗過程中藥液雜質(zhì)少，透明度高，因此超濾儀器的清洗及超濾膜的再生也較10 000級超濾膜簡單快速,可大大縮短工藝的時間。最終產(chǎn)品得率高，符合工藝要求。

【參考文獻】

  　�。�1］劉振麗，張秋海，歐興長．超濾及醇沉對金銀花中綠原酸的影響［J］．中成藥，1996，18（2）：5.

　　［2］ 孟根達萊,劉栓娣,青格樂.醇沉工藝對中成藥質(zhì)量的影響［J］.中成藥,1996,18(3):516.

　�。�3］ 劉振麗,張秋海,歐興長.超濾與醇沉對中研Ｉ號沖劑有效成分影響的對比研究［Ｊ］.中草藥,1998,29(7):451.

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