超臨界CO2萃取技術(shù)在高純度熊果酸提取中的應(yīng)用 | 超臨界CO2萃取技術(shù)在高純度熊果酸提取中的應(yīng)用 |
| 發(fā)布時(shí)間:2011-06-11 信息來(lái)源:admin 發(fā)布人:admin 點(diǎn)擊次數(shù):2672 |
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【關(guān)鍵詞】超臨界流體萃取 CO2萃取技術(shù) 酸提取高效液相色譜法 純度 成分提取 溶解能力 臨界溫度 【摘 要】超臨界流體萃�。⊿FE）技術(shù)是利用流體在臨界點(diǎn)附近所具有的特殊溶解能力而進(jìn)行有效成分提取的新技術(shù)。CO2的超臨界溫度接近室溫，超臨界壓力低，無(wú)色、無(wú)味、無(wú)毒、不燃燒爆炸、對(duì)大部分物質(zhì)不反應(yīng)，價(jià)格低廉、易制得，是極好的超臨界流體萃取溶劑。天然植物中熊果酸的測(cè)定方法主要有兩種，即薄層分析和高效液相色譜法，而提取方法卻有多種，,其中制約熊果酸批量生產(chǎn)的難題是分離提純. 超臨界流體萃�。⊿FE）技術(shù)是利用流體在臨界點(diǎn)附近所具有的特殊溶解能力而進(jìn)行有效成分提取的新技術(shù)。CO2的超臨界溫度接近室溫，超臨界壓力低，無(wú)色、無(wú)味、無(wú)毒、不燃燒爆炸、對(duì)大部分物質(zhì)不反應(yīng)，價(jià)格低廉、易制得，是極好的超臨界流體萃取溶劑。天然植物中熊果酸的測(cè)定方法主要有兩種，即薄層分析和高效液相色譜法，而提取方法卻有多種，其中制約熊果酸批量生產(chǎn)的難題是分離提純。近年來(lái)，我們采用 超臨界CO。萃取技術(shù)結(jié)合生物發(fā)酵法從越桔葉渣中提取熊果酸，效果滿(mǎn)意�，F(xiàn)報(bào)告如下。 材料設(shè)備：① 材料：提取原料為我公司從越桔葉中提取熊果苷后的廢渣。其粒徑大小依生產(chǎn)要求而定；熊果酸標(biāo)準(zhǔn)品 由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供；其余試劑均為分析純；聚酰胺柱層析材料為實(shí)驗(yàn)室用；酵母菌種由襄樊市中心(三甲)醫(yī)院提供，經(jīng)襄樊市藥檢所確定；CO 、乙醇由襄樊市采購(gòu)，純度 分別>99％和99．5％。② 儀器設(shè)備：高壓液相色譜儀(大連依 利特公司)，由P200Ⅱ高壓恒流泵、UV200Ⅱ紫外可變波長(zhǎng)檢測(cè) 器及Echrom 98色譜工作臺(tái)等部件組成；全套實(shí)驗(yàn)用設(shè)備由杭州華黎泵業(yè)有限公司提供，主要包括l L的萃取釜(工作條件：室溫～8O C，壓力2O～50 mPa)，0．5 L分離器(工作條件：室溫～ 8O C，壓力20~30 mPa)，換熱器。降壓閥，加壓泵等。 試驗(yàn)方法及結(jié)果；① 樣品的生物發(fā)酵：干燥的越桔葉粉碎至4o～80目，以水作溶媒提取水溶性成分，濾干水分后趁 濕進(jìn)入發(fā)酵房(池)，用37 C搖瓶培養(yǎng)過(guò)夜的釀酒酵母菌液按 1％的比例進(jìn)行接種，采用38℃ 的發(fā)酵溫度發(fā)酵48 h(是在以 3O、38、45的發(fā)酵溫度分別發(fā)酵24、48、72 h的試驗(yàn)基礎(chǔ)上確 定的最佳發(fā)酵溫度和時(shí)間)，立即以90‘C的高溫烘干12 h備 用。②樣品的萃取條件：由于影響萃取物的技術(shù)參數(shù)較多，我們主要選取了萃取溫度(40、50、60、70 C)、壓力(25、30、35、 38 mPa)、時(shí)間(1、2、3、4 h)三因素，各因素選擇了四個(gè)水平．以熊果酸的萃取率為考察指標(biāo)，按I 。(3‘)正交表進(jìn)行正交實(shí) 驗(yàn)，探討其最佳反應(yīng)條件。結(jié)果影響熊果酸提取率的主要因素 依次為：萃取壓力>萃取溫度>萃取時(shí)問(wèn)。通過(guò)方差分析確定 的最佳工藝條件為B A C。，即以萃取壓力35 mPa、萃取溫度 50‘C、萃取時(shí)問(wèn)3 h為最佳 經(jīng)過(guò)對(duì)粒徑、夾帶劑、溶劑CO：的流速、操作連續(xù)性等技術(shù)指標(biāo)的多次實(shí)際操作，結(jié)果發(fā)現(xiàn)采用 4O～80目粒徑的原料以流速0．5 ml／min的95％ 乙醇為夾帶 劑、以CO 流速0．5 ml／min提取3 h，即可達(dá)到最好的萃取效 果。⑧ 樣品測(cè)定：采收樣品1 ml與熊果酸對(duì)照品(配成含熊 果酸1 ug／ml的甲醇溶液)1 ml點(diǎn)于同一硅膠G薄板上，以 環(huán)己烷一氯仿一醋酸乙酯(15：5；8)為展開(kāi)劑展開(kāi)，取出晾干，噴以1O％硫酸乙醇溶液，105℃烘烤10 min，顯現(xiàn)相同的 紫紅色斑點(diǎn)。色譜條件：Hydersir BDSC18色譜柱(5 m，200× 4．6 mm)，流動(dòng)相甲醇：水(90：10)。磷酸鹽調(diào)pH值3．5，流速0．5 ml／min，檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm，進(jìn)樣量5 l，柱溫室溫。采 收樣品0．5 ml，用甲醇溶于250 ml容量瓶中，過(guò)0．45 m濾膜，與熊果酸對(duì)照品(配成含熊果酸2．0~g／ml的甲醇溶液) 以上述條件進(jìn)行分析，以峰面積外標(biāo)法定量，結(jié)果重復(fù)操作3 次，熊果酸的平均含量為95．7％。 討論；熊果酸又名烏索酸、烏蘇酸，為五環(huán)三萜類(lèi)化合物， 熔點(diǎn)264～267 C，其分子中含有一COOH、一OH兩極性基團(tuán)，在超臨界CO 中的溶解度變小。該實(shí)驗(yàn)中以較高的萃取溫度 (5O℃)、壓力(35 mPa)即可提高超臨界CO 萃取熊果酸的效 率。超臨界CO 萃取的熊果酸雖然效率高，但成品含量并不能 達(dá)到要求的純度。而采用聚酰胺柱層析，收集75％乙醇洗脫 的部分液體后精制，即可得到純度>95 的熊果酸。采用發(fā)酵 法對(duì)越桔葉渣進(jìn)行生物發(fā)酵，可使結(jié)合的熊果酸衍生物水解 后成為游離的熊果酸，產(chǎn)品收率比單獨(dú)超臨界萃取提高8％． 純度>95 ；發(fā)酵后立即高溫烘干可殺滅酵母菌種，避免微生物的污染。 綜上所述，用超臨界CO 萃取柱分離技術(shù)從發(fā)酵的越桔 葉渣中提取高純度熊果酸的工藝流程中，超臨界是通過(guò)控制溫度和壓力實(shí)現(xiàn)的，COz作為提取溶劑無(wú)毒、無(wú)味、不燃、不腐 且可循環(huán)使用；乙醇提取物及用含量一定的乙醇作夾帶劑、洗脫劑，甲醇作流動(dòng)相，用量小且易于回收，對(duì)環(huán)境不構(gòu)成污染： 利用廢棄的越桔葉渣，經(jīng)生物發(fā)酵、高溫滅菌后提取熊果酸，可達(dá)到廢物利用，且廢料中不含可傳染病菌及有毒的溶劑成 分；再次提取脂溶性成分后的越桔葉渣為粗纖維，可作農(nóng)家肥原料，有利于土壤疏松。 杜仲提取物 綠原酸 金銀花提取物 苦杏仁苷 枇杷葉提取物-熊果酸 大花紫薇提取物-科羅索酸 淫羊藿苷 二氫楊梅素 獐牙菜苦苷 楊梅素 10-羥基喜樹(shù)堿 7-乙基-10羥基喜樹(shù)堿 上禾生物 專(zhuān)注植提 精于高純 基于您對(duì)天然產(chǎn)物需求持續(xù)創(chuàng)新 |
