摘 要：目的:探討采用離子交換村脂對杜仲葉綠原酸Chlorogenic acid提取液進(jìn)行純化的工藝條件.方法:本實驗利用靜態(tài)吸附法,分別采用AmberliteFPA98CL、AmberlitP FPA958CL、強(qiáng)堿性苯乙烯離子交換樹脂(AMBERLITE FPA90C1)三類樹脂對杜仲葉綠原酸Chlorogenic acid粗提液進(jìn)行純化.結(jié)果:通過比較綠原酸Chlorogenic acid的提取率和樹脂吸附率篩選出最適合純化綠原酸Chlorogenic acid的工藝條件即采用羅門哈斯公司Amberlite FPA98CL樹脂在pH4條件下,與其它兩種樹脂相比,對綠原酸Chlorogenic acid的收率最高,能夠達(dá)到鮮葉綠原酸Chlorogenic acid的最大收牟為3.04%.結(jié)論:采用羅門哈斯公司Amberlite FPA98CL樹脂分離杜仲葉綠原酸Chlorogenic acid可到達(dá)收率較高,純度較好的分離效果.
關(guān)鍵詞：離子交換樹脂;杜仲葉;綠原酸Chlorogenic acid 長沙上禾生物 www.csnutilities.com
綠原酸Chlorogenic acid又名咖啡鞣酸，屬酚類化合物，是植物體在有氧呼吸過程中經(jīng)葬草酸途徑形成的一種苯丙素類物質(zhì)“1 綠原酸Chlorogenic acid(Chlorogenic acid)是我國傳統(tǒng)名貴中藥杜仲的主要活性成分其半水合物為針狀結(jié)晶，具有利膽、抗菌、抗病毒，降壓、增高白細(xì)胞及興奮中樞神經(jīng)系統(tǒng)等多種藥理作用，是保健品、食品、藥品、化妝品等重要原料[2 。近年的研究表明，杜仲葉中綠原酸Chlorogenic acid含量豐富，可達(dá)1％～5．5％。杜仲葉中綠原酸Chlorogenic acid的分離方法，目前常用的有萃取法、沉淀法和聚酰胺柱層析法等，這些方法多存在成本高、收率低、操作煩瑣、材料不易再生等缺點。近年來，離子交換樹脂吸附法用于中草藥中活性性成分的提取與純化取得取得很好的效果，日益受到人們的重視】。本試驗以杜仲葉為原料，采用水提法對杜仲葉綠原酸Chlorogenic acid進(jìn)行粗提，然后采用不同離子交換樹脂對杜仲葉綠原酸Chlorogenic acid的吸附性能進(jìn)行比較，旨在篩選出一種吸附性能和收率高的樹脂用于替代傳統(tǒng)綠原酸Chlorogenic acid提取方法。
1 材料
杜仲葉：采于重慶市榮昌縣直升鎮(zhèn)道觀村5組；綠原酸Chlorogenic acid對照品(長沙上禾生物科技有限公司 批號：l 10753—20041 3)；Amberlite FPA98CL樹脂、Amberlite FPA958CL樹脂均由北京大學(xué)生命科學(xué)院宋加賓教授提供{強(qiáng)堿性苯乙烯系陰離子交換樹脂(杭州爭光樹脂廠，批號：ZGA307)；Tu一1901型雙波束紫外可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司)、2004型恒溫水浴鍋(常州國華電器有限公司)、ESJ120-4型電子分析天平(沈陽龍騰電子有限公司)。
2 方法
2。1杜仲葉綠原酸Chlorogenic acid粗提液的制備粉碎新鮮杜仲葉后，按l：l2的料液比加入蒸餾水，在50℃恒溫水浴浸提3次，每次2h，合并3次浸提液，將浸提液減壓濃縮 1／2，再將濃縮液中加入1％殼聚糖絮凝，過濾，濾液用活性碳脫色，得到杜仲葉綠原酸Chlorogenic acid 粗提液。
2．2樹脂預(yù)處理及再生
將Amberlite FPA98CL樹脂、Amberlite FPA958CL樹脂、強(qiáng)堿性苯乙烯交換樹脂分別用蒸餾水水溶脹，然后用lmol／L的NaOH 溶．恣攪拌浸泡4h，蒸餾水洗至中性，然后用 0．~ Iol／L的HCl攪拌縵泡4h，用蒸餾水洗至中性待用。
2．樹脂靜態(tài)吸附實驗
準(zhǔn)確稱取預(yù)處理的Amberlite FPA98CL、 Ambeflite FPA958CL、苯乙烯離子交換樹脂各5 ，按1：1000~入粗提液于2000ml_~角瓶，在25℃的恒溫水浴振蕩器上振搖吸附8h，用 100目尼龍布過濾樹脂，一倍樹脂量的40％乙醇50℃下攪拌洗脫8h，洗脫液中經(jīng)甲醇重結(jié)晶得綠原酸Chlorogenic acid純品。計算出杜仲葉中綠原酸Chlorogenic acid收率(mg／Kg)。
三種樹脂的對綠原酸Chlorogenic acid的吸咐率依下式計算[8】．
Co為吸附前溶液的濃度(mg／m1)；C 為吸附后溶液的濃度(mg／m1)；V 為吸附前溶液的體積(m1，lV．吸附后溶液的體積(m1)；W 為樹脂重量(g)。
2．4數(shù)據(jù)處理
應(yīng)用SPSS1 l軟件對三種樹脂杜仲葉綠原酸Chlorogenic acid提取率和{}寸脂吸附率進(jìn)行顯著性t檢驗，比較組間差異性。
3 結(jié)果
3．1三種樹脂對杜仲葉提取液綠原酸Chlorogenic acid吸附容量結(jié)果見：表l所示，三種樹脂對杜仲葉中 綠原酸Chlorogenic acid吸附容量(綠原酸Chlorogenic acidmg／g樹脂)Amberl FPA98CL型樹脂、Amberlite FPA958cL型樹脂吸的附容量接近差異不顯著，而苯乙烯離子交換樹脂吸附低容量，不能用于杜仲葉中綠原酸Chlorogenic acid的提取。
3．2 三種樹脂對杜仲葉提取液綠原酸Chlorogenic acid提取盔采用三種樹脂吸附后，杜仲葉綠原酸Chlorogenic acid的提取率(綠原酸Chlorogenic acidmg／lOOg杜仲葉)相差較大，結(jié)果如表2所示，采用AmberHte FPA98CL型樹脂的綠原酸Chlorogenic acid收率最高，與其余兩種樹脂比較差異顯著。
3．3 Amberl ite FPA98CL樹脂吸附的最適條件為適應(yīng)工業(yè)化的生產(chǎn)，我們采用靜態(tài)吸附方法，而樹脂的用量是最大影響因素之一。本試驗采用不同類型的樹脂下進(jìn)行吸附實驗，結(jié)果表明．在pH值為 4，樹脂用量2．34g／100m1吸附效果最好。
4 分析與討論
大孔吸附樹脂具有吸附量大 選擇性好、易解吸、易再生、成本低、效率高，特別適用水溶性化合物的提取分離等優(yōu)點，國內(nèi)外學(xué)者已廣泛將其用于生物堿、皂甙、黃酮、多糖等的提取，取得了顯著的效果【9】。本試驗利用大孔吸附樹脂分離杜仲葉綠原酸Chlorogenic acid，其工藝較簡單、成本低。產(chǎn)率高．
從試驗的結(jié)果看出，Amberlite FPA08CL 和Amberlite FPA958CL樹脂都對綠原酸Chlorogenic acid具有較強(qiáng)的吸附作用，而苯乙烯系陰離子交換樹脂則吸附效果較差，但從收率來講Amberlite FPA98CL樹脂收率又遠(yuǎn)高于Amberlite FPA958CL樹脂，這和Amberlite FPA98CL樹脂特性有關(guān)，它除有離子交換作用外還具有分子篩功能，既能有效的和綠原酸Chlorogenic acid進(jìn)行吸附，又能快速的洗脫而脫吸附。
Amberlite FPA98CL樹脂對綠原酸Chlorogenic acid最適吸附pH值為4。綠原酸Chlorogenic acid作為多羥基酚酸，在酸性條件下易被吸附。因為在酸性條件下，綠原酸Chlorogenic acid以分子形式存在，樹脂對其吸附作用增強(qiáng)；在強(qiáng)酸條件下，以內(nèi)酯形式存在的綠原酸Chlorogenic acid容易水解；在堿性條件下，以離子形式存在的綠原酸Chlorogenic acid則不易被吸附。樹脂吸附法用于杜仲葉中綠原酸Chlorogenic acid提取是一種操作簡便、節(jié)約有機(jī)溶劑，較高收率的提取方法，羅門哈斯公司Amberlite FPA98CL在DH4條件下，樹脂用量2．34g／ 100ml，能夠達(dá)到鮮葉最大3．04％的收率。
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[9]李萍.大孔吸附樹脂在中草藥有效成分研究中的應(yīng)用[J].天津藥學(xué),2002,14(3):9-11.
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離子交換樹脂純化杜仲葉綠原酸條件的篩選（杜仲提取物） 
