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大黃素(emodin)為蓼科植物掌葉大黃Rheum palmatum L．和虎杖Polygonum cuspidatum Sieb．et Zuce．的有效成分之一，在正品大黃和虎杖的游離蒽醌衍生物中占的比例較大，其化學名為1，3，8一三羥基一6甲基蒽醌(1，3，8一trihydroxy一6一methy lanthraquinone)，分子量為270．23。大黃素對消化系統(tǒng)、泌尿系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)等具有廣泛的藥理作用，同時還有抗腫瘤、抗病毒等作用 J。本實驗室所研究的抗病毒藥物正是以大黃素為主要組成成分 J，并且前期毒性試驗結(jié)果顯示不同提取工藝得到的提取物的生理毒性不同 J，為了動物實驗結(jié)果的穩(wěn)定可靠，本文對大黃素的提取工藝進行研究，選擇其最佳的提取工藝，并建立質(zhì)量標準，為進一步實驗提供科學的依據(jù)。
1 儀器與材料
1．1 藥材
虎杖飲片購于湖北省藥材公司，經(jīng)湖北中醫(yī)學院陳科力教授鑒定為蓼科植物虎杖Polygonum c 一 pidatum Sieb．et Zuce．的干燥根
1．2 儀器試劑
p680高效液相色譜儀(德國戴安)，UVD170U 檢測器(德國戴安)，HKZJZ一830171 BAF高效液相數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)(戴安變色龍)，BP一21lD型十萬分之一分析天平(Mettler Toledo公司)，大黃素標準品 (中國藥品生物制品檢定所批號110756—200110) 色譜純乙腈(安捷倫公司)，水為超純水，其他試劑為分析純
1．3 色譜條件
色譜柱：ZORBA×SB—C18(安捷倫公司)，流動相：乙腈一0．1％磷酸(80：20) 柱溫：40~C；流速：1．0 ml·min～；檢測波長： 254 llm；靈敏度：0．08 AUFS
2 方法與結(jié)果
2．1 標準曲線的繪制
2．1．1標準品溶液的制備精密稱取大黃素標準品 4．3 mg于50 mL量瓶中，加入適量甲醇超聲溶解并定容至刻度，配成0．086 g·L 的對照品溶液。
2．1．2標準曲線的制備精密量取大黃素標準品溶液 0．2 mL、0．3 mL、0．4 mL、0．5 mL、0．6 mL于2 mL容量瓶中，甲醇定容至刻度，配成0．0086 g·L～、 0．0129 g ·L～ 、0．0172 g ·L～ 、0．0215 g ·L～ 、 0．0258 g·L 5種濃度，按照上述色譜條件，分別進樣20 測定。以峰面積為縱坐標，進樣濃度為橫坐標繪制標準曲線，見表1和圖1，回歸方程為Y=49．61 X一2056．05(r=0．9986)，結(jié)果表明大黃素在0．0086 g · L～～0。0258 g·L 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。
2．2 正交買驗
2．2．1正交設(shè)計方案分別稱取粉碎過20目篩后的干燥虎杖藥材50 g 9份，以乙醇體積分數(shù)、乙醇用量、提取次數(shù)、提取時間為四因素，各取三水平做正交試驗(見表2)，每組試驗均進行提取，趁熱濾過，回收乙醇至無醇味，加水至500 mL，靜置過夜，過濾，再加水至500 mL，靜置2 h，過濾，以pH=4的80％乙醇：丙酮(1：1)混合溶液500 mL溶解，40度超聲30 min，然后過濾，濾液回收，干燥物以體積分數(shù)95％乙醇溶解，有黃色沉淀析出，離心，干燥，精密稱取一定量定容，測定大黃素量，以大黃素的含量為考察指標，確定最佳提取工藝。
2．2．2正交實驗結(jié)果
正交實驗結(jié)果見表3、4 直觀分析表中極差值大小顯示，各因素作用主次為A>C>B>D，方差分析結(jié)果表明：A因素的影響具有顯著性意義，B 與B ，D 與D 差別不大，考慮生產(chǎn)成本與縮短生產(chǎn)周期，取B 、D 。因此，優(yōu)選最佳組合為A B C D 。即體積分數(shù)85％乙醇提取3次，每次8倍量溶劑，提取1．5 h。
2．2．3驗證實驗分別稱取粉碎過20目篩后的干燥虎杖藥材50 g 3份，按照上述正交實驗的優(yōu)選條件，體積分數(shù)85％乙醇提取3次，每次8倍量溶劑，提取1．5 h，測定大黃素的含量，結(jié)果見表5，說明該工藝穩(wěn)定。
2．3 樣品的含量測定
取干燥粉碎過20目篩后的虎杖藥材50g，體積分數(shù)85％乙醇回流提取3次，每次8倍量乙醇，每次提取1．5 h�；厥找掖己蟮媒�，加水至500 mL，靜置過夜，過濾，再加水至500 mL，靜置2 h，過濾，以pH=4的體積分數(shù)80％ 乙醇：丙酮(1：1)混合溶液500 mL溶解，40度超聲30 min，然后過濾，濾液回收，干燥物以體積分數(shù)95％乙醇溶解，過濾，沉淀干燥，精密稱取一定量干燥提取物，用甲醇超聲溶解定容至10 mL容量瓶中，0．45 m濾膜過濾，續(xù)濾液按色譜條件，進樣20 L，測定大黃素的峰面積，用外標法代人線性回歸方程，計算虎杖藥材中大黃素 的質(zhì)量分數(shù)，結(jié)果見圖2、3和表6。由表6可知，本品中大黃素的平均質(zhì)量分數(shù)為11．49％ ，平均純度為71．9％ ，故規(guī)定每克虎杖藥材中大黃素的含量不得低于10．00％ ，提取物的純度不低于70％ 。
3 討論
本實驗室長期進行大黃素的提取純化工藝的研究，現(xiàn)在已經(jīng)可以得到比較純的化合物。在前期的細胞實驗中所用的大黃素均為本實驗室提取純化的，質(zhì)量分數(shù)可達95％ 以上，這種純度進行細胞實驗非常合適，但是在動物實驗中發(fā)現(xiàn)其毒性較大。改變提取工藝后，純度降低到70％，但是動物毒性大大降低，而療效卻沒有改變，所以對大黃素提取工藝進行改進是非常必要的。
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提取純化大黃素的工藝研究 
