山茱萸為山茱萸科植物山茱萸(Col7t11~offici,d~Sieb．et Zucc)的干燥成熟果肉，具有補(bǔ)益肝腎、澀精固脫的功能。用于眩暈耳鳴、腰膝酸痛、陽(yáng)痿遺精、遺尿尿頻、崩漏帶下、大汗虛脫、內(nèi)熱消渴等癥_l1�！吨袊�(guó)藥典>200o版一部以薄層掃描法測(cè)定熊果酸含量作為山茱萸的含量測(cè)定指標(biāo)，由于薄層掃描法難以較精確地定量．故2005年版藥典“山茱萸”中含量測(cè)定改以高效液相法測(cè)定馬錢苷含量為指標(biāo)。但有學(xué)者指出，馬錢苷與山茱萸的功能主治并無(wú)相關(guān)性。熊果酸為五環(huán)三萜類有機(jī)酸，具有較好的抗腫瘤活性，對(duì)6種不同的癌細(xì)胞具有顯著的細(xì)胞毒作用[21。熊果酸含量的測(cè)定方法，除薄層掃描法外，還有高效液相法p1和衍生化氣相色譜 等。熊果酸 分子中僅存著一個(gè)雙鍵，只在紫外波長(zhǎng)210 nm處有末端吸收．采用HPLC法進(jìn)行檢測(cè)時(shí)．受流動(dòng)相影響較大，基線不夠理想，檢測(cè)靈敏度較低。而ELSD的檢測(cè)不依賴于樣品的光學(xué)特性。所以對(duì)于無(wú)發(fā)色團(tuán)或熒光基團(tuán)的樣品較UV檢測(cè)器及示差檢測(cè)器有獨(dú)特的優(yōu)越性�？紤]以上因素�，F(xiàn)試用高效液相色譜一蒸發(fā)光散射檢測(cè)(HPLC—ELSD)法對(duì)山茱萸的熊果酸含量進(jìn)行測(cè)定。
1儀器與試藥
Agilentl100高效液相儀(Alltech 2000 ELSD檢測(cè)器、 Agilentl100色譜工作站)；Thermo超純水儀；山茱萸(產(chǎn)地：浙江)；熊果酸(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110742—20051 6)；甲醇(天津四友，色譜純)；水為超純水；其他試劑為分析純。
2方法與結(jié)果
2．1色譜條件
色譜柱為SHMADZU VP-ODS(4．6 mmx250．0 mm，5 m)，柱溫30℃ ．流動(dòng)相為甲醇：0．1％冰醋酸溶液(80：20)．流速為 1．0 ml／min，ELSD檢測(cè)器漂移管溫度為120℃ ，氮?dú)饬魉贋?2．0 ml／min。在此條件下，山茱萸中熊果酸的色譜圖如圖1、2。
2．2對(duì)照品溶液的制備
取熊果酸對(duì)照品適量，精密稱定，用甲醇溶解，制得濃度為1．047 mgCml對(duì)照品貯備液，待用。
2．3供試品溶液的制備
取山茱萸藥材打粉，過(guò)2號(hào)篩，取粗粉約0．5 g，精密稱定，置于10 ml容量瓶中，加適量甲醇超聲30 rain，放冷后定容，過(guò)0．45 I．Lm微孔濾膜，即得。
2．4線性關(guān)系的考察
取對(duì)照品儲(chǔ)備液適量。依次稀釋成10．48、20．96、31．44、 41．92、52．40、104．80~g／ml的溶液。分別吸取上述不同濃度對(duì)照品溶液10 l，注入色譜儀，按色譜測(cè)定條件測(cè)得峰面積，以進(jìn)樣量( g)的自然對(duì)數(shù)OnX)為橫坐標(biāo)，以峰面積的自然對(duì)數(shù)(1nY)為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，回歸方程為lnY=1．551 1X lnX+0．756 4(r=O．999 6)，表明熊果酸峰進(jìn)樣量在0．104 8～ 1．048 0 Ixg范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。
2．5穩(wěn)定性試驗(yàn)
取供試品溶液，分別在0、2、46 8 12、24 h后進(jìn)樣，每次 l0 ，測(cè)定峰面積值。RSD值為0．78％，表明供試品溶液在 24 h內(nèi)穩(wěn)定
2．6精密度試驗(yàn)
吸取41．88 咖l的標(biāo)準(zhǔn)品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，每次10 l，測(cè)各次峰面積。RSD值為0．47％。
2．7重復(fù)性試驗(yàn)
取同一批藥材，精密稱取5份，按上述供試品溶液方法處理。測(cè)定樣品中熊果酸的平均含量為0．14％ ，RSD值為】I48％ 。
2．8回收率試驗(yàn)
取已知含量的山茱萸藥材適量，精密稱定9份，分別加入上述對(duì)照品貯備溶液0．5 rIll，按上述供試品溶液的方法制備溶液，依次進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率。熊果酸的平均回收率為 99-4％ ．RSD值為O．45％，見(jiàn)表1。
2．9樣品測(cè)定
取山茱萸藥材供試品溶液在上述色譜條件下進(jìn)樣，用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算熊果酸的含量，測(cè)得藥材中熊果酸平均含量為 0．14％。
3討論
試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)以ELsD檢測(cè)圖雜峰少．基線平穩(wěn)，熊果酸 的響應(yīng)值大；而熊果酸的最大吸收波長(zhǎng)210 nm下使用UV 檢測(cè)器較難平衡，基線漂移．甲醇在此波長(zhǎng)下有吸收，使得基線噪音大，故采用ELsD檢測(cè)。
試驗(yàn)初設(shè)流動(dòng)相為甲醇：水(80：20)，試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)此條件下熊果酸拖尾現(xiàn)象嚴(yán)重，在水中加入0．1％的冰醋酸可有效改善拖尾現(xiàn)象，得到滿意的峰形，因此采用了甲醇：0．1％冰醋酸(80：20)為流動(dòng)相。
熊果酸廣泛存在于中藥材中，如女貞子、夏枯草、馬鞭草、山茱萸、山楂、木瓜、梔子、苦丁茶等，許多中藥都以熊果酸作為活性指標(biāo)和目標(biāo)成分進(jìn)行含量控制，此方法可作為廣泛的測(cè)定中藥材中熊果酸含量的參考方法。
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HPLC-ELSD法測(cè)定山茱萸中熊果酸的含量 
