大黃為蓼科植物掌葉大黃(Rhrum palmatum L．)、唐古特大黃(Rheum tanguticum Maxim．ex Bal1) 或藥用大黃(Rheum officinale Bail1．)的干燥根及根莖【”。具有瀉下攻積、清熱瀉火、止血、解毒、活血化瘀之功效。大黃中的主要藥效成分為蒽醌類衍生物如 大黃素、大黃酚、蘆薈大黃素、大黃酸等[21。清胰Ⅱ號(hào)是由大黃、梔子、赤芍、丹皮等中藥研制的復(fù)方制劑。具有清熱涼血、理氣開郁、活血止痛、通理攻下的作用，用于治療急性胰腺炎已有三十多年的臨床經(jīng)驗(yàn) p]。 經(jīng)近上千多例急性胰腺炎，近上百例重癥急性胰腺炎(SPA)的治療、總結(jié)，收到較好的療效，SPA的治愈率顯著上升，達(dá)到國(guó)內(nèi)領(lǐng)先水平。
1
材料與方法
1．1 藥品試劑大黃素對(duì)照品(含量測(cè)定用，批號(hào)： 110756—200110中國(guó)藥品生物制品檢定所)，乙腈 (色譜純，上海星可生化有限公司)，乙醇(分析純，成都市科龍化工試劑廠)，冰醋酸(分析純，成都市科龍化工試劑廠)，甲醇(色譜純，上海星可生化有限公司)，高純水。
1．2 儀器美國(guó)Agilent 1100高效液相色譜儀，包括紫外檢測(cè)器和色譜工作站。Agilent Eclipse XDB C一18 (150x4．6mm，0．461xm)色譜柱。塞多利斯 BT125D電子天平(北京塞多利斯科學(xué)儀器有限公司)。
1．3 色譜條件色譜柱：Agilent Eclipse‘XDB C一18 (150~4．6mm，0．46lxm)。以乙腈一0．1％冰醋酸溶液(50： 50)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，流速1．0ml／min，柱溫為30℃，進(jìn)樣量20 l 。
1．4 溶液制備
1．4．1 對(duì)照品溶液的制備稱取大黃素標(biāo)準(zhǔn)品 0．6mg，置于25ml的容量瓶中，用甲醇溶解并定容至 25ml，配成0．024m~nl的大黃素標(biāo)準(zhǔn)液，置于4qC冰箱中保存。
1．4．2 清胰Ⅱ號(hào)供試品溶液的制備按照清胰Ⅱ號(hào)的配方稱取原料[5】，將原料放在煎煮鍋里進(jìn)行煎煮(大黃、芒硝除外)。煮前快速浸泡5min左右，放干水，次日加入適量的水煎煮20min后，將已浸洗的大黃放人鍋中，再酌加適量的水繼續(xù)煎煮10rain，藥液放出過濾，藥渣加入適量的水繼續(xù)煎煮，每次30分鐘。藥液過濾合并。將藥液進(jìn)行濃縮，用部分藥液將芒硝溶解，合并藥液，加入適量的苯甲酸鈉至藥液中，使至規(guī)定體積500 ml，使最后藥液中苯甲酸鈉的濃度為1．5％，攪拌均勻，備用。
1．4．3 清胰Ⅱ號(hào)對(duì)照品溶液的制備不加入大黃，按照清胰Ⅱ號(hào)供試品溶液的制備方法操作，其他步驟均相同，制得大黃的陰性對(duì)照品溶液，備用。
2 含量測(cè)定
2．1 測(cè)定波長(zhǎng)的選擇根據(jù)2005年版《中國(guó)藥典》第一部附錄V A的紫外可見分光光度法，掃描大黃素的最大吸收波長(zhǎng)，掃描范圍200 600nm，大黃素的最大吸收波長(zhǎng)為254nm，與大黃藥材含量測(cè)定項(xiàng)下的測(cè)定波長(zhǎng)相一致，確定大黃素的測(cè)定波長(zhǎng)為 254nm。結(jié)果見圖1。
2．2 系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn) 以乙腈一0．1％冰醋酸溶液 (50：50)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，流速1．0ml／ rain，柱溫為30cC，進(jìn)樣量20 l此條件下對(duì)照品、供試品在約12min時(shí)間均有一色譜峰，陰性對(duì)照品無干擾。見色譜圖2。
2-3 線性關(guān)系的考察采用大黃素標(biāo)準(zhǔn)品溶液制得一系列梯度溶液，其濃度分別為1．2IX 、2．4 ml、4．8IXg／ha、7．2IXg／ml、9．6 g／ml、12．0IXg，IIll。按 2．2色譜條件進(jìn)樣2O 1，測(cè)大黃素對(duì)照品的峰面積，將濃度與峰面積進(jìn)行線性回歸處理，得出回歸方程為：Y=72．638X+3 1．042，r=O．9999，大黃素對(duì)照品在 1．2 g／ml—l2．0 范圍內(nèi)樣品濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。
2．4 精密度試驗(yàn)精密吸取大黃素對(duì)照品溶液(濃度為4．8 ~Jm1)2o l，按上述色譜條件，重復(fù)進(jìn)樣6 次，每次20 l，測(cè)定對(duì)照品中大黃素峰面積值，計(jì)算峰面積值的RSD為1．12％。說明儀器精密度良好。 2．5 穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取大黃素供試品溶液 2O ，按上述色譜條件，每隔兩小時(shí)，測(cè)定供試品溶液中大黃素峰面積值，計(jì)算供試品大黃素峰面積值的RSD為1．72％。說明供試品在1Oh內(nèi)穩(wěn)定。
2．6 重復(fù)性試驗(yàn)取清胰Ⅱ號(hào)水提法提取液，稱取 10．OOg，共6份，置于25ml容量瓶中，用甲醇定容并超聲30raint~，按上述色譜條件進(jìn)行測(cè)定，測(cè)定結(jié)果經(jīng)數(shù)據(jù)處理，平均含量14．137}Lg，g，RSD為0．29％。
2．7 加樣回收率試驗(yàn)取本品(批號(hào))共9份，每份重約5．Oog，置于25ml容量瓶中，分別精密加入大黃素對(duì)照品溶液(7．2 g／m1)8ml、lOmt、12ml。余下的量用甲醇補(bǔ)足，然后超聲30min，冷卻后，吸取2O l，測(cè)定峰面積計(jì)算回收率。結(jié)果見表l。
2．8 大黃素含量測(cè)定按照前文所述的方法和條件測(cè)試六批樣品，并計(jì)算其含量。結(jié)果如表2。
3 討論
本次實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法對(duì)大黃素相關(guān)制劑清胰Ⅱ號(hào)湯劑中大黃素進(jìn)行含量測(cè)定，與其他方法相比，具有操作簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確性好，靈敏度高，重現(xiàn)性好的特點(diǎn)，在制訂大黃相關(guān)重要制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，可以使用大黃素含量作為指標(biāo)。
| 
HPLC法測(cè)定大黃相關(guān)制劑中大黃素的含量 
