HPLC法測(cè)定傷科七味片中大黃素的含量 | HPLC法測(cè)定傷科七味片中大黃素的含量 |
| 發(fā)布時(shí)間:2011-09-18 信息來源:admin 發(fā)布人:admin 點(diǎn)擊次數(shù):2690 |
心腦聯(lián)通片是以細(xì)辛、燈盞、虎杖、野山楂、柿葉、刺五 加、葛根、丹參等為原藥材制成的純中藥制劑，具有活血化 瘀、通絡(luò)止痛的作用，用于瘀血閉阻引起的胸痹，眩暈，以及 冠心病心絞痛，腦動(dòng)脈硬化及高血脂癥見上述證候者。處方 中虎杖為主藥之一，大黃素為其主要有效成分，參照原標(biāo)準(zhǔn) 以大黃素為含量測(cè)定的指標(biāo)成分。該方法操作簡(jiǎn)便，結(jié)果準(zhǔn) 確，并進(jìn)行了系統(tǒng)的方法學(xué)考察。 關(guān)鍵詞：大黃素 心腦聯(lián)通片 大黃提取物 大黃 1 儀器與試藥 1．1 儀器 惠普有限公司；Agilent高效液相色譜儀；N2000色 譜工作站；Hypersil C18(100 mmx4．6 mm，5 ILL)色譜柱。 1．2 試藥 大黃素對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)： 110756—200211)，供含量測(cè)定用。心腦聯(lián)通片(湖南星劍制藥 有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：20040202、20040208、20040214；規(guī)格： 0．45g／片)。實(shí)驗(yàn)用甲醇為色譜純?cè)噭疄橹卣麴s水，其它試 劑均為分析純。 2 方法與結(jié)果 2．1 色譜條件 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，Hv— persil C，8(100 mmx4．6 mm，5 )色譜柱；甲醇一0．2％ 磷酸 溶液(75：25)為流動(dòng)相；進(jìn)樣量：10 ixL；檢測(cè)波長(zhǎng)為438 nm；柱 溫：40℃；流速：1 mL／min。理論塔板數(shù)按大黃素峰計(jì)算應(yīng)不 低于3000。 2．2 溶液制備 2．2．1對(duì)照品溶液的制備 精密稱取以五氧化二磷為干燥劑 減壓干燥12 h的大黃素對(duì)照品適量，加甲醇配制成每1 mL中 含52 g的溶液，即得。 2．2．2 供試品溶液配制中提取時(shí)間的選擇 取本品20片，去薄 膜衣，精密稱定，研細(xì)，取2琦各3份，精密稱定，置具塞三角瓶 中，精密加入甲醇20 mL，密塞，稱定重量，超聲處理(3oo KHz， 50 W)20 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖 勻，濾過，精密吸取續(xù)濾液10 mL，揮至近干，殘?jiān)?fl12．5 mol／L 硫酸溶液20 mL，分別加熱回流0．5、1、2 h，稍冷，加三氯甲烷 25 mL，繼續(xù)回流2 h，冷卻，移至分液漏斗中，用少量三氯甲 烷洗滌容器，并入分液漏斗中，分取_一氯甲烷層，酸液再用三 氯甲烷提取2次，每次10 mL，合并i氯甲烷液，蒸干，殘?jiān)?nbsp;三氯甲烷5 mL使溶解，轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，加甲醇至刻度， 搖勻，用微孔濾膜(0．45 m)濾過，取續(xù)濾液10 ，注入液相 色譜儀，測(cè)定含量，結(jié)果表明回流提取1 h，含量已經(jīng)提取完 全，因此選定提取1 h比較合適。(見表1 o 2．2．3供試品溶液的制備 精密稱取本品約2 g，精密稱定，置 具塞三角瓶中，精密加入甲醇20 mL，密塞，稱定重量，超聲處 理(3oo KHz，50 W)20 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密吸取續(xù)濾液10 mL，揮至近干，殘 渣加2．5 moYL硫酸溶液20 mL，加熱回流1 h，稍冷，加三氯甲 烷25 mL，繼續(xù)回流2 h，冷卻，移至分液漏斗中，用少量三氯 甲烷洗滌容器，并入分液漏斗中，分取三氯甲烷層，酸液再用 三氯甲烷提取2次，每次10 mL，合并三氯甲烷液，蒸干，殘?jiān)?nbsp;加三氯甲烷5 mL使溶解，轉(zhuǎn)移至25 mL量瓶中，加甲醇至刻 度，搖勻，用微孑L濾膜(0．45 m)濾過，取續(xù)濾液，即得。 2．2．4 陰性溶液的制備 按處方配比稱取除虎杖以外的其他 藥材適量，按制備工藝制成缺虎杖的陰性樣品，同法制備缺 虎杖的陰性樣品溶液。 2．3 專屬性試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液5 tzL、供試品溶液和陰 性對(duì)照溶液各10 L，注入液相色譜儀，記錄色譜圖(見圖1_3)。 結(jié)果表明：供試品色譜圖中，呈現(xiàn)與對(duì)照品相同保留時(shí)問的色譜 峰，而缺虎杖陰性溶液色譜中無此峰，說明陰性樣品無干擾。 2．4線性關(guān)系考察 精密吸取濃度為52 p,g／mL的大黃素對(duì)照 品溶液2、4、6、8、10 p．L注入高效液相色譜儀，測(cè)定。以峰面積 積分值為縱坐標(biāo)，以大黃素進(jìn)樣量( g)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲 線。其回歸方程為：Y=lO05．99X一1415．5，r=O．9999，結(jié)果表明： 大黃素對(duì)照品在104—520ng范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。 2．5 精密度試驗(yàn) 精密吸取同—供試品溶液，(批號(hào)：20040202) 10 ，按含量測(cè)定方法，連續(xù)測(cè)定6次，測(cè)定其峰面積積分 值，平均值為395028．77，RSD％為1．1％(n=6)，表明本方法精 密度較好。 2．6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液(批號(hào)： 20040202)，25 oC室溫放置，分別于0、4、8、12、16 h進(jìn)樣，每次10 L，記錄色譜圖，測(cè)定其峰面積積分值平均值為313690．86， RSD％為0．91％，表明供試品溶液在16 h內(nèi)基本穩(wěn)定。 2．7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一供試品(批號(hào)20040202)6份，照供 試品溶液的制備方法制成供試品溶液，進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果 平均含量為0．75 mg／g，RSD％=I．13％ (n=61，結(jié)果表明本方法 重復(fù)性較好。 2．8 加樣回收率試驗(yàn) 取已測(cè)知大黃素含量的心腦聯(lián)通片 (批號(hào)：20040202。含量為0．7536 mg／g)1．0 mg，精密稱定，共取6 份，分別精密加入大黃素對(duì)照品溶液(濃度為0．77 mg／mL)1 mL，蒸干，精密加入甲醇20 mL，稱定重量，超聲處理20 min， 放冷，稱定重量，加甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾 液，按含量測(cè)定方法測(cè)定。按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算供試品中 大黃素的量，計(jì)算回收率。(見表2)。 2．9 樣品舍量測(cè)定 分別取10批樣品，照上述含量測(cè)定方法 分別測(cè)定并計(jì)算大黃素含量，參照原標(biāo)準(zhǔn)中含量限度及10批 樣品的平均含量為0．41 mr,／片，按75％折算，規(guī)定本品含量測(cè) 定限度暫訂為不得少于0．3 mg／片。(見表3) 3 討 論 回流時(shí)間比較試驗(yàn)中，對(duì)回流時(shí)間進(jìn)行了考察，在0．5—2 h進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果回流時(shí)間1 h測(cè)定值已經(jīng)趨向最大。由于靈仙 跌打片成份復(fù)雜，故本品采用先用酸水解，再用i氯甲烷回 流提取的方法對(duì)樣品進(jìn)行處理，結(jié)果樣品分離效果好，陰性無干擾。 從以上方法學(xué)考察試驗(yàn)結(jié)果可知，本品大黃素的含量測(cè) 定方法簡(jiǎn)單方便，準(zhǔn)確，靈敏度高，重復(fù)性好，能夠準(zhǔn)確測(cè)定 樣品中大黃素的含量，可用于心腦聯(lián)通片的質(zhì)量控制。 |
