酶法水解黃芪皂苷糖基制備黃芪甲苷 | 酶法水解黃芪皂苷糖基制備黃芪甲苷 |
| 發(fā)布時間:2021-12-09 信息來源:admin 發(fā)布人:admin 點擊次數(shù):1024 |
| 酶法水解黃芪皂苷糖基制備黃芪甲苷： a.黑曲霉菌(Aspegillusniger)在含5％麥芽水浸出物、1％產(chǎn)酶誘導(dǎo)物--黃芪水浸出物的培養(yǎng)基中，在溫度28～30℃條件下攪拌通風(fēng)培養(yǎng)50～100小時，離心除菌得上清液(含酶混合液)，在上清液中用60～75％飽和度的硫酸銨沉淀酶蛋白、收集蛋白，溶于1/10發(fā)酵液體積的常用的醋酸緩沖液(0.02M，pH5.0)、或者磷酸緩沖液、Tris緩沖液中，透析除去硫酸銨，離心除渣，即為酶液； b.用50毫升上述酶液、3克黃芪皂苷和100毫升醋酸緩沖液(0.02M，pH5.0)混合均勻，在溫度20～55℃條件下反應(yīng)6～24小時，再加入1/3體積的正丁醇萃取皂甙三次，減壓蒸干，得到黃芪皂苷粗品。用硅膠柱分離方法(文獻(xiàn)3)得到0.5～0.8克的黃芪甲苷，黃芪甲苷的轉(zhuǎn)化率達(dá)到60～90％，比從原3克黃芪皂苷中直接提取黃芪甲苷提高了6倍。上述酶液DEAE-Cellulose離子交換樹脂柱方法和BioRed蛋白制備色譜儀(文獻(xiàn)5)分離提純黃芪甲苷酶蛋白，用SDS電泳方法測定分子量，酶的分子量為5.0萬。
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