淫羊藿提取物的制備方法 | 淫羊藿提取物的制備方法 |
| 發(fā)布時間:2021-12-31 信息來源:admin 發(fā)布人:admin 點擊次數(shù):554 |
淫羊藿又名仙靈脾、剛前，是小檗科淫羊藿屬EpimediumLinn.植物，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為中品，具有補腎陽、強筋骨、祛風濕的功效，在我國具有悠久的藥用歷史。中國是淫羊藿的地理分布中心，有40個淫羊藿品種，目前形成藥材商品的主要種類有15種，這其中又以7種淫羊藿應用最廣，為箭葉淫羊藿E.sagittatum(Sieb.etZucc.)Maxim.、淫羊藿E.brevicornumMaxim.、粗毛淫羊藿E.acuminatumFranch.、朝鮮淫羊藿E.koreanumNakai、柔毛淫羊藿E.pubescensMaxim.、黔嶺淫羊藿E.leptorrhizumStearn、巫山淫羊藿E.wushanenseT.S.Ying。在《中國藥典》2010年版中收錄了箭葉淫羊藿、朝鮮淫羊藿、柔毛淫羊藿、淫羊藿共4個品種。貴州省是我國淫羊藿品種最多、產(chǎn)藏量最大的地區(qū)之一，其分布的淫羊藿屬植物有17種2變種，其中，粗毛淫羊藿、黔嶺淫羊藿、巫山淫羊藿等分布廣且產(chǎn)藏量豐富，在《貴州中藥材、民族藥材質(zhì)量標準》2003年版中收錄了粗毛淫羊藿、黔嶺淫羊藿、天平山淫羊藿E.myrianthumStearn等5個品種藥用。淫羊藿亦是苗族習用藥材之一，在《苗族醫(yī)藥學》、《中國苗族藥物彩色圖集》等苗藥著作中均有收載，苗藥名有“銳雞都”（貴州松桃）、“加俄西”（貴州黔東南）、“彎歐”（黔南）、“毛公堵”（貴州畢節(jié)）。自1935年至今，國內(nèi)外學者已對淫羊藿展開了較為全面的化學成分研究，分離得到以黃酮為主，包括木脂素類、酚苷類、生物堿類、色酮類等上百種化學成分，臨床上常用來治療骨質(zhì)疏松、股骨頭壞死、性功能障礙等疾病。 化學成分[1] 1. 黃酮類 淫羊藿總黃酮有促進免疫調(diào)節(jié)、抗骨質(zhì)疏松、抗心肌缺氧、改善心臟血液流變性、促進雄性生殖系統(tǒng)和生殖內(nèi)分泌功能、抗炎、抗腫瘤、抗衰老等作用，是淫羊藿中的主要成分，根據(jù)是否具有異戊烯基取代可將其分為2類，最具特征性的異戊烯基取代成分為8-異戊烯基取代黃酮醇及其糖苷，淫羊藿苷為其代表性成分，具有降低動脈粥樣硬化患者血栓形成幾率及調(diào)血脂、促進雌性激素體內(nèi)生物合成、保護受損神經(jīng)元及恢復記憶力等藥理活性。淫羊藿素能夠抑制腫瘤細胞分化；淫羊藿苷、淫羊藿素、朝藿定A～C都可顯示出一定的雌激素活性。此外從朝鮮淫羊藿中分離得到銀杏雙黃酮、異銀杏雙黃酮、白果素3個雙黃酮類化合物；從心葉淫羊藿中分離得到2種酮類化合物：1，3，5，8-四羥基酮和1-羥基-3，4，5-三甲氧基酮；Li等從巫山淫羊藿中分離得到甘草查耳酮A和甘草查耳酮B2種查耳酮類化合物。淫羊藿中所含黃酮成分及其結(jié)構(gòu)見圖。 2. 木脂素 研究顯示，淫羊藿中的木脂素類成分對大鼠骨肉瘤細胞UMR106的增殖及堿性磷酸酶具有一定的促進作用。近年來，不斷有木脂素類成分從淫羊藿屬植物中被發(fā)現(xiàn)，從箭葉淫羊藿中分離得到4種木脂素icarisideE6、icarisideE7、icariolA1、icariolA2。Wang等[25]首次從箭葉淫羊藿中分離鑒定得到6種黃酮木脂素類化合物hydnocarpin、5″-methoxyhydnocarpin、hydnocarpinD、5′-methoxyhydnocarpin-D、5′，5″-dimethoxyhydnocarpin-D及l(fā)ignan(+)-dihydro-dehydrodiconiferylalcoho l-4-O-β-D-glucopyranoside。從心葉淫羊藿中分離得到(7R，8S，8′R)-4，4′，8′，9-四羥基-3，3′-二甲氧基-7，9′-單環(huán)氧木脂素和(7R，8S)-4，9-二羥基-3，3′-二甲氧基-7，8-二氫苯并呋喃-1′-丙醇基新木脂素-9′-O-α-L-鼠李糖苷。從朝鮮淫羊藿中分離出柏木苷C、柏木苷A、(+)-南燭木樹脂酚、(+)-異落葉松樹脂醇。心葉淫羊藿[69]和朝鮮淫羊藿[49]中均含有(+)-環(huán)橄欖樹脂素從朝鮮淫羊藿中分離得到(+)-cycloolivilformaldehydecondensate、(−)-olivilmonoacetate、(−)-(7R，8S)-dihydrodehydro-diconiferylalcohol。 3. 多糖 淫羊藿多糖安全可靠，現(xiàn)代研究表明其具有刺激細胞免疫應答、激活胸腺免疫功能的作用，是重要的免疫刺激劑，并通過增強機體免疫功能延緩機體衰老。此外，淫羊藿多糖還具有一定的抗病毒、促進個體激素分泌、促進核酸和蛋白質(zhì)代謝及血小板凝聚作用。從淫羊藿多糖部位分離純化得到10個組分，相對分子質(zhì)量為122～656679，質(zhì)量分數(shù)最高的組分達到97.97%，相對分子質(zhì)量70374，由α-半乳糖醛酸組成。通過柱前衍生化高效液相色譜法分析1個淫羊藿多糖的組成為甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖（摩爾比0.60∶0.74∶1.00∶0.29∶2.29∶1.43）。從淫羊藿中分離得到2個雜多糖成分，1個由鼠李糖、葡萄糖構(gòu)成，1個由果糖、葡萄糖，以及1個不確定糖。 4. 生物堿 目前在淫羊藿中共分離得到3種生物堿。1957年，日本學者首次從淫羊藿屬植物中分離得到木蘭花堿，后續(xù)研究表明國內(nèi)淫羊藿中也含有木蘭花堿，在淫羊藿主要藥用品種中，以朝鮮淫羊藿中木蘭花堿的量最高，粗毛淫羊藿和天平山淫羊藿次之，量一般高于0.07%。從朝鮮淫羊藿中分離得到淫羊藿堿A；從朝鮮淫羊藿中分離得到生物堿epimediphine，并證實該生物堿具有較強的乙酰膽堿酯酶抑制作用。 5. 苯酚 苷淫羊藿中含有icariphenol、毛柳苷、4-hydroxy-2-prenylpheno-1-O-β-D-glucopyranoside。從朝鮮淫羊藿中分離得到icarisideA5；從黔嶺淫羊藿中分離得到thalictoside。 6. 揮發(fā)油 采用傳統(tǒng)的水蒸氣蒸餾法從巫山淫羊藿中提取到36種揮發(fā)油成分，主要為羧酸類、酮類、醇類、炔類。從柔毛淫羊藿和朝鮮淫羊藿中分別得到66和38個揮發(fā)油成分，其中，二者共有成分為28個，以長鏈脂肪酸、不飽和醇及烴類居多。用超臨界流體萃取法從箭葉淫羊藿中提取得到43個揮發(fā)油成分。采用加速溶劑萃取法從朝鮮淫羊藿中提取鑒定出揮發(fā)油成分共91種。 7. 微量元素 淫羊藿中無機元素的量豐富，從四川產(chǎn)8種淫羊藿中均可測得16種無機元素，以Ca、K、Mg等6種元素的平均量最高；炮制會引起淫羊藿中無機元素量的變化，如羊脂炙法炮制朝鮮淫羊藿后可增強微量元素的溶出量，其中與腎功能有密切關(guān)系的Ca、Mn、Fe、Mg、Zn等微量元素的量明顯增加。也有研究顯示，多種炮制手段均會使巫山淫羊藿中Fe的量有所降低，因此，炮制對淫羊藿中無機元素的量到底有何影響還有待進一步的研究。 8. 其他 淫羊藿中還含有色原酮、菲、蒽醌、鞣質(zhì)、倍半萜、甾醇等成分。從箭葉淫羊藿中分離得到6-去氧甲基茵陳色原酮、6-去氧甲基-7-甲基茵陳色原酮、6-去氧甲基-4′-甲基-8-異戊烯基茵陳色原酮、6-去氧甲基-7-異戊烯基茵陳色原酮、綠原酸、香豆酸、大黃素、1，5-二羥基-3-甲氧基-7-甲基蒽醌。從朝鮮淫羊藿中分離得到菲類成分epimedoicarisosideA（icarisideA1）、淫羊藿苷A7，倍半萜類化合物淫羊藿次苷F、淫羊藿次苷C1，麥芽酚；淫羊藿中還含有胡蘿卜苷、β-谷甾醇、肌醇、6，22-二羥基何柏烷等化學成分。 應用[2-3] 1. 淫羊藿提取物抗抑郁作用。MDA為脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物，廣泛作為自由基損傷標志之一，在臨床上也常觀察到抑郁癥患者體內(nèi)MDA水平過高，而經(jīng)過一些抗抑郁藥物治療后可顯著減低其MDA水平。淫羊藿提取物可逆轉(zhuǎn)抑郁動物模型中MDA水平的升高，表明淫羊藿提取物有可能因減弱自由基對神經(jīng)組織損傷程度而改善抑郁絕望行為。利血平可耗竭中樞單胺類神經(jīng)遞質(zhì)引起抑郁。一部分抗抑郁藥如單胺氧化酶抑制劑和三環(huán)類抗抑郁藥等均對利血平所引起的耗竭具有抗抑郁作用。研究發(fā)現(xiàn)淫羊藿提取物在利血平拮抗模型下，未能逆轉(zhuǎn)利血平所致小鼠體溫的下降，推測其對小鼠絕望行為的改善并非突觸前單胺神經(jīng)遞質(zhì)攝取抑制的急性藥理效應。研究還觀察到淫羊藿提取物抑制腦組織中MAO活性呈倒“U”型量效關(guān)系，與其行為實驗結(jié)果不同的是其50mg/kg劑量組的抑制作用較小，提示淫羊藿提取物有可能存在另一作用途徑，即通過調(diào)節(jié)突觸后單胺類神經(jīng)遞質(zhì)受體敏感性而達到抗抑郁的目的，后續(xù)的相關(guān)研究正在進行中。 2. 淫羊藿提取物對去卵巢大鼠骨轉(zhuǎn)換率增強的抑制作用。有實驗研究淫羊藿提取物對去卵巢大鼠骨轉(zhuǎn)換的影響。取3月齡SD大鼠手術(shù)切除雙側(cè)卵巢，1個月后ig給予陽性藥17β-雌二醇(2mg/kg)以及淫羊藿提取物混懸液(110mg/kg)，連續(xù)給藥3個月。采用全自動生化分析儀測定血清中鈣(s-Ca)、磷(s-P)的量和堿性磷酸酶(ALP)的活性及尿中鈣(u-Ca)、磷(u-P)和肌酐(Cr)的量。利用ELISA試劑盒測定尿脫氧吡啶酚(DPD)的量。取脛骨近端制成不脫鈣骨切片進行骨組織形態(tài)計量學分析。結(jié)果與假手術(shù)組相比，去卵巢大鼠s-Ca、s-P沒有變化，ALP活性增強，u-Ca排出顯著升高，尿中DPD與Cr的比值(DPD/Cr)顯著增加，子宮萎縮。骨小梁面積百分比降低，骨小梁間隙增加。ig給予雌二醇或淫羊藿提取物3個月，血清ALP活性降低，u-Ca排出量減少，尿中DPD/Cr降低，骨小梁增加，且骨小梁間隙減小。雌二醇組大鼠子宮增生，淫羊藿組大鼠子宮與模型組相比沒有變化。結(jié)論淫羊藿提取物能夠顯著抑制由于雌激素缺乏引發(fā)的骨轉(zhuǎn)換增強，調(diào)整骨形成和骨吸收的關(guān)系，對遏制去卵巢造成的骨質(zhì)疏松有一定的作用，且長期服用對子宮沒有刺激作用。 3. 淫羊藿提取物干預阿爾茨海默病。研究證明，淫羊藿可提高實驗動物的學習記憶能力。采用Morris水迷宮進行定位航行和空間探索試驗，發(fā)現(xiàn)經(jīng)淫羊藿治療的AD鼠在定位航行試驗中逃避潛伏期縮短，穿越平臺次數(shù)明顯增加、平臺象限停留時間延長，且平臺象限的游泳距離占總游泳距離的·4406·中國老年學雜志2017年9月第37卷百分比增大，說明AD鼠經(jīng)過淫羊藿藥物干預后學習記憶能力得到了明顯改善。采用迷津法和避暗法進行觀察，發(fā)現(xiàn)經(jīng)淫羊藿處理的東莨菪堿及乙醇致學習記憶障礙鼠進入暗室的潛伏期明顯延長，錯誤反應次數(shù)減少，累加電擊時間縮短，小鼠逃避傷害刺激的反應速度加快。研究淫羊藿苷對AD鼠膽堿能神經(jīng)系統(tǒng)活性的影響，證明給予淫羊藿苷干預后，大鼠海馬內(nèi)乙酰膽堿(Ach)酯酶(AChE)表達下降、活性降低，Ach轉(zhuǎn)移酶(ChAT)表達上升，皮質(zhì)Ach、ChAT含量增加及M-膽堿能受體結(jié)合力上升，從而促進AD鼠腦內(nèi)膽堿能神經(jīng)功能恢復。淫羊藿苷對AChE的抑制作用表現(xiàn)為混合型可逆抑制，抑制常數(shù)KI和KIS分別為2.67×10－8mol/L和4.43×10－8mol/L。 淫羊藿苷主要通過氫鍵作用和分子間作用力結(jié)合于AChE的外周陰離子位點，對AChE催化水解碘化硫代Ach的反應具有抑制作用。單胺類神經(jīng)遞質(zhì)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中調(diào)節(jié)神經(jīng)生理功能的重要物質(zhì)，與學習記憶能力密切相關(guān)。氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)含量的改變與神經(jīng)退行性變、腦損傷相關(guān)。淫羊藿能明顯提高老齡動物下丘腦中去甲腎上腺素(NE)、多巴胺(DA)、5-羥色胺(5-HT)含量，降低腦組織和全血中膽堿酯酶活性，表明淫羊藿可通過調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)遞質(zhì)水平，改善老齡動物的學習記憶行為。實驗證明，淫羊藿可部分逆轉(zhuǎn)海馬和皮質(zhì)的單胺類神經(jīng)遞質(zhì)改變。淫羊藿苷顯著降低快速老化(SAMP)10小鼠大腦皮層內(nèi)氨基酸類神經(jīng)遞質(zhì)，如谷氨酰胺(Gln)、天冬氨酸(Asp)、γ-基丁酸(GABA)含量、升高NE、5-HT、DA的含量，調(diào)節(jié)興奮性氨基酸類及抑制性氨基酸類神神經(jīng)遞質(zhì)的代謝平衡，改善SAMP10模型鼠學習記憶的作用。 制備[5] 一種淫羊藿提取物的制備工藝，包括以下步驟： a：將淫羊藿葉子經(jīng)過清洗，粉碎過10‑20目，加入70‑80%的乙醇加熱回流提取2‑4次，每次提取2‑3小時，過濾提取液，用50‑60%的乙醇洗滌濾渣1‑3次； b：合并步驟a中的提取液和濾渣液，減壓濃縮至密度1.5‑2，得到粗提取液； c：將步驟b中所得粗提取液用大孔網(wǎng)狀吸附樹脂進行吸附，再用50‑60%的乙醇對大孔網(wǎng)狀吸附樹脂進行洗脫，洗脫次數(shù)為3‑5次； d：將步驟b中所得個階段洗脫業(yè)合并，過濾，取上部清夜，減壓濃縮至密度1‑1.2，靜置，結(jié)晶，得淫羊藿提取物淫羊藿苷。 主要參考資料 [1] 淫羊藿的化學成分及質(zhì)量控制研究進展 [2] 羊藿提取物抗抑郁作用研究 [3] 淫羊藿提取物對去卵巢大鼠骨轉(zhuǎn)換率增強的抑制作用 [4] 淫羊藿提取物抗抑郁作用研究 [5] CN201310173011.5一種淫羊藿提取物的制備工藝
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