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方法名稱：

 復方扶芳藤合劑－黃芪甲苷的測定－薄層掃描法

應用范圍：

本方法采用薄層掃描法測定復方扶芳藤合劑中黃芪甲苷的含量。

    本方法適用于復方扶芳藤合劑中黃芪甲苷含量的測定。

方法原理：

供試品用氯仿振搖提取，分取上層溶液，用水飽和的正丁醇振搖提取，合并提取液，用氨試液提取，分取正丁醇液，蒸干，殘渣加乙醇溶解，通過D₁₀₁型大孔吸附樹脂柱，用水洗脫，再用乙醇 洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣用甲醇溶解，制成供試液，點樣、展開，以10%硫酸乙醇溶液顯色，用薄層掃描儀進行掃描，于波長λs=530nm， λ_R=700nm測量黃芪甲苷（C₄₁H₆₈O₁₄）吸收度積分值，計算其含量。

試劑：

1. 氯仿

2 .氨水

3 .甲醇

4 .正丁醇

5 .乙醇

6 .硫酸 10％硫酸乙醇溶液

儀器設備：

1  儀器

1.1索氏提取器

1.2薄層掃描儀

1.3涂布器 

應能使吸附劑在玻璃板上手工或自動涂成一層符合厚度要求的均勻薄層。

1.4點樣器 

一般采用微升毛細管或與之相應的點樣器材。

1.5展開室 

可用適合薄層板大小的專用玻璃缸，底部平底或雙槽，蓋子須密閉。

2  材料

2.1玻板 

用10cm×10cm、10cm×15cm、20cm×10cm或20cm×20cm的規(guī)格，要求光滑、平整，洗凈后不附水珠，晾干。

2.2吸附劑 

硅膠G，其顆粒大小一般要求直徑為10～40μm。

2.3羧甲基纖維素鈉

2.4 D101型大孔吸附樹脂

試樣制備：

1. 對照品溶液的制備

精密稱取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇制成每 1mL含 1mg的溶液，作為對照品溶液。

2. 供試品溶液的制備

取供試品 75mL，混勻，精密量取 20mL，用氯仿振搖提取 2次，每次 30mL，分取上層溶液，用水飽和的正丁醇振搖提取 5次，第一次 30mL，其余每次 20mL，合并正丁醇提取液，用氨試液提取 2次 （100mL、 80mL），分取正丁醇液，蒸干，殘渣加 10%乙醇 5mL使溶解，通過D₁₀₁型大孔吸附樹脂柱（內徑 1.5cm，長 12cm），用水50mL洗脫，棄去洗脫液，再用 40%乙醇 30mL洗脫，棄去洗脫液，繼用70%乙醇50mL洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣用甲醇溶解并轉移至2mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。

注：“精密量取”系指量取體積的準確度應符合國家標準中對該體積移液管的精度要求。

操作步驟：

1. 薄層板制備 

將吸附劑1份和0.2％羧甲基纖維素鈉水溶液3份在研缽中向一方向研磨混合，去除表面的氣泡后，倒入涂布器中，在玻板上平穩(wěn)地移動涂布器進行涂布（厚度為0.25～0.5mm）取下涂好薄層的玻板，于室溫下，置水平臺上晾干，在反射光及透射光下檢視，表面應均勻，平整，無麻點、無氣泡、無破損及污染，于110℃烘30分鐘，冷卻后立即使用或置干燥箱中備用，或用商品預制板。

2. 點樣 

精密吸取供試品溶液 4μL、對照品溶液2μL與6μL，分別交叉點于同一以0.1%羧甲基纖維素鈉溶液為黏合劑的硅膠G薄層板上，如用點樣器點樣到薄層板上，一般為圓點，點樣基線距底邊1.0～1.5cm，樣點直徑一般不大于2mm，點間距離可視斑點擴散情況以不影響檢出為宜。點樣時必須注意勿損傷薄層表面。

3. 展開 

將點好樣品的薄層板放入展開缸的展開劑中，以〔正丁醇－醋酸乙酯－水（4：1：5）的上層溶液〕－甲醇（10：1）為展開劑，置氨蒸氣飽和的展開缸內，展開，展距16cm以上，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在 100℃加熱約 7分鐘，至斑點顯色清晰，取出。

4. 含量測定

在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，選擇反射方式，采用吸收法，進行掃描，波長：λs=530nm， λ_R=700nm， 測量供試品吸收度積分值與對照品吸收度積分值，計算。

用外標法測定時，若對照品各數據點在校正曲線上呈一通過原點的直線時，可用一點法校正，如不通過原點通常宜采用二點法校正，必要時用多點法校正。

參考文獻：

中華人民共和國藥典，國家藥典委員會編、化學工業(yè)出版社，2005年版，一部p.530