和厚樸酚自微乳給藥系統(tǒng)制備工藝響應(yīng)面法優(yōu)化及質(zhì)量評(píng)價(jià)研究 | 和厚樸酚自微乳給藥系統(tǒng)制備工藝響應(yīng)面法優(yōu)化及質(zhì)量評(píng)價(jià)研究 |
| 發(fā)布時(shí)間:2022-03-06 信息來源:admin 發(fā)布人:admin 點(diǎn)擊次數(shù):479 |
| 目的 優(yōu)化和厚樸酚自微乳給藥系統(tǒng)（HN-SMEDDS）制備工藝，并對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)。方法 采用擬三元相圖法篩選HN-SMEDDS的輔料。在此基礎(chǔ)上，以微乳粒徑大小為評(píng)價(jià)指標(biāo)，應(yīng)用星點(diǎn)設(shè)計(jì)-響應(yīng)面法優(yōu)化HN-SMEDDS處方。然后采用電導(dǎo)率法對(duì)最優(yōu)處方的HN-SMEDDS進(jìn)行結(jié)構(gòu)表征，并對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行體外評(píng)價(jià)。結(jié)果 優(yōu)化后HN-SMEDDS配方為聚山梨酯80 71.54%，PEG200 14.62%，花生油10.56%，蓖麻油3.28%；在該配方下，和厚樸酚載藥質(zhì)量濃度為60mg/mL，用純水將其稀釋3倍以上可形成水包油（O/W）微乳液，其平均粒徑為（16.83±0.35）nm，多分散系數(shù)（PDI）為0.189±0.021，Zeta電位為（−15.530±0.205）mV。HN-SMEDDS在5～400倍稀釋形成的微乳液穩(wěn)定性良好，分散介質(zhì)類型對(duì)其粒徑無顯著性影響，在−20 ℃或在室溫條件下貯存15 d仍可稀釋形成穩(wěn)定微乳液。該自微乳可顯著延長(zhǎng)和厚樸酚在人工胃液中的釋放時(shí)間和提高其在人工小腸液中的釋放度。結(jié)論 優(yōu)化的HN-SMEDDS制備工藝簡(jiǎn)單、微乳粒徑小、PDI小、穩(wěn)定性好、制備成本低、能有效提高和厚樸酚在水中的溶解度和在人工小腸液中的釋放度。 圖片 和厚樸酚（honokiol，HN）是一種具有抗炎[1-2]、抗菌[3]、保護(hù)神經(jīng)和心腦血管系統(tǒng)[4-5]等多種藥理作用的天然化合物，但其在水中的溶解度極低，限制了其在疾病防控中的應(yīng)用。有報(bào)道將和厚樸酚制備成脂質(zhì)體[6]、滴丸劑[7]、納米混懸劑[8]等劑型以提高其生物利用度，但這些劑型大多需要超聲或高壓等較高外界能量的輸入，且制備過程較為復(fù)雜，對(duì)制備條件要求較高。 自微乳給藥系統(tǒng)（self-microemusifyingdrug delivery system，SMEDDS）是近年來迅速發(fā)展起來的新型疏水性藥物給藥系統(tǒng)，其主要由油相、乳化劑、助乳化劑按一定配比復(fù)配而成[9-11]，在胃腸道蠕動(dòng)下自發(fā)乳化形成水包油（O/W）型乳液[12]，可增加難溶性藥物的溶解度、穩(wěn)定性、分布均一性以及其與胃腸道的接觸面積，有助于控制藥物釋放和吸收[13]，提高藥物生物利用度和降低生物應(yīng)激[10]。目前，也有研究報(bào)道將和厚樸酚制備成自微乳以提高其生物利用度[14-15]，但其處方仍有優(yōu)化提升的空間，通過處方優(yōu)化以期提高微乳載藥量，降低成本，減少生物刺激。本實(shí)驗(yàn)首先通過最大溶解度測(cè)試和擬三元相圖法篩選和厚樸酚自微乳給藥系統(tǒng)（HN-SMEDDS）的輔料，再采用星點(diǎn)設(shè)計(jì)-響應(yīng)面法優(yōu)化HN-SMEDDS的處方，并對(duì)優(yōu)化后的處方進(jìn)行表征和體外質(zhì)量評(píng)價(jià)，為HN-SMEDDS的開發(fā)及生產(chǎn)應(yīng)用提供科學(xué)參考。 1 儀器、試劑與材料 1.1 儀器 LC-2030C型高效液相色譜儀，日本島津公司；ZEN3690型馬爾文激光粒度分析儀，馬爾文儀器有限公司；DDS-11C型電導(dǎo)率儀，上海浦春計(jì)量?jī)x器有限公司。 1.2 試劑與材料 對(duì)照品和厚樸酚，西安綠如泉生物科技有限公司，批號(hào)190912，質(zhì)量分?jǐn)?shù)≥98%；蓖麻油、聚乙二醇200、400（PEG200、PEG400），上海源葉生物科技有限公司；玉米油、菜籽油、大豆油、魚油、花生油，嘉里糧油有限公司；乙腈（色譜純）、Cremophor EL、Laborsol，上海麥克林生化科技有限公司；1,2-丙二醇、甲醇、聚山梨酯80（Tween-80，T80）、甘油，西隴科學(xué)股份有限公司；勞瑞坦低泡FT1379（FT1379）、椰油酸二乙醇酰胺6501（CD6501）、烷基酚基聚氧乙烯醚OP-10（OP-10）、TO6異構(gòu)十三碳醇聚氧乙烯醚（TO6）、TO9異構(gòu)十三碳醇聚氧乙烯醚（TO9）、TO3異構(gòu)十三碳醇聚氧乙烯醚（TO3）、烷基糖苷0810（AG0810）、異構(gòu)十碳醇聚氧乙烯醚1007（IDPE1007）、辛基苯基聚氧乙烯醚（曲拉通X-100）、月桂醇聚氧乙烯聚氧丙烯醚（LEP-10），山東優(yōu)索化工科技有限公司；人工胃液、人工小腸液，廣州檢測(cè)科技有限公司。 2 方法與結(jié)果 2.1 和厚樸酚含量測(cè)定方法的建立 2.1.1 對(duì)照品溶液的配制 用甲醇超聲溶解6.5 mg 和厚樸酚并定容至10 mL，制成650 μg/mL和厚樸酚對(duì)照品儲(chǔ)備液。 2.1.2 HN-SMEDDS供試品溶液的配制 精密吸取優(yōu)化后的HN-SMEDDS 1 mL用純水稀釋100倍制成微乳液，2400r/min離心10 min，取100 μL上清液，加入900 μL甲醇，超聲10 min破乳，過0.45 μm微孔濾膜，得HN-SMEDDS供試品溶液。 2.1.3 色譜條件 色譜柱為Agilent 5 TC-C18柱（250 mm×4.6 mm）；流動(dòng)相為乙腈-純水（70∶30）；檢測(cè)波長(zhǎng)220 nm；檢測(cè)時(shí)間為10 min；柱溫30 ℃；進(jìn)樣量10 μL；體積流量1.0 mL/min；理論塔板數(shù)按和厚樸酚峰計(jì)算不低于5500。和厚樸酚對(duì)照品色譜圖見圖1-A，HN-SMEDDS樣品色譜圖見圖1-B。 圖片 2.1.4 線性關(guān)系考察 分別精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液適量，用甲醇逐步稀釋成650.00、325.00、162.50、81.25、40.63、20.31、2.03、0.20 μg/mL的和厚樸酚對(duì)照品溶液，在“2.1.3”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)樣檢測(cè)各個(gè)對(duì)照品溶液，以和厚樸酚質(zhì)量濃度（X）對(duì)其峰面積（Y）作線性回歸曲線，得線性回歸方程Y＝5×107 X－250 873，R2＝0.999 2，線性范圍為0.20～650.00 μg/mL。 2.1.5 精密度試驗(yàn) 分別將和厚樸酚對(duì)照品儲(chǔ)備液稀釋至0.20、81.25、650.00 μg/mL，在“2.1.3”項(xiàng)色譜條件下，每個(gè)樣品分別連續(xù)進(jìn)樣6次，結(jié)果顯示和厚樸酚峰面積的RSD分別為0.16%、0.02%、0.12%，表明該檢測(cè)方法精密度良好。 2.1.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 按“2.1.2”項(xiàng)方法制備HN-SMEDDS供試品溶液，分別于制備后0、1、2、4、8、12、24 h取樣，在“2.1.3”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)行HPLC分析，和厚樸酚峰面積的RSD為0.26%，表明該檢測(cè)方法穩(wěn)定性良好。 2.1.7 重復(fù)性試驗(yàn) 按“2.1.2”項(xiàng)方法平行制備6份HN-SMEDDS供試品溶液，在“2.1.3”項(xiàng)色譜條件下測(cè)定峰面積，計(jì)算和厚樸酚質(zhì)量濃度，結(jié)果顯示和厚樸酚質(zhì)量濃度的RSD為0.76%，表明該方法重復(fù)性良好。 2.1.8 加樣回收率試驗(yàn) 精密量取已測(cè)定和厚樸酚含量的同一HN-SMEDDS供試品溶液9份，各1 mL，按對(duì)照品溶液中和厚樸酚與供試品溶液中和厚樸酚的質(zhì)量比為0.8∶1.0、1.0∶1.0、1.2∶1.0混合，每個(gè)比值下平行制備3份，在“2.1.3”項(xiàng)色譜條件下進(jìn)行HPLC分析，計(jì)算各樣品中和厚樸酚的加樣回收率。結(jié)果顯示，3個(gè)比值樣液中和厚樸酚的平均加樣回收率為（101.58±1.28）%，RSD為1.26%。 2.2 HN-SMEDDS輔料篩選 2.2.1 和厚樸酚在不同輔料中的溶解度測(cè)定 考察和厚樸酚在各供篩選自微乳輔料（乳化劑、助乳化劑、油相）中的最大溶解度。在供篩選輔料（表1）中加入過量的和厚樸酚，置于37 ℃、180 r/min搖床中震蕩24 h，以10 000 r/min離心（離心半徑為8.40 cm）15 min，取上層液體1 mL，加入2 mL甲醇，超聲10 min，用甲醇定容至10 mL，過0.45 μm微孔濾膜，按“2.1.3”項(xiàng)方法測(cè)定和厚樸酚質(zhì)量濃度，每個(gè)樣品平行測(cè)3次。結(jié)果（表1）顯示，在所考察的乳化劑中，T80對(duì)和厚樸酚溶解度最高，除AG0810和IDPE1007外，所選乳化劑對(duì)和厚樸酚溶解度均大于50 mg/mL；在所考察的助乳化劑中，1,2-丙二醇、PEG200和PEG400對(duì)和厚樸酚的溶解度均較高，對(duì)和厚樸酚溶解度影響無顯著差異，甘油對(duì)和厚樸酚的溶解度最低；在所考察的油相輔料中，蓖麻油和花生油對(duì)和厚樸酚的溶解度最高，其次是玉米油和菜籽油，大豆油最低。 圖片 2.2.2 乳化劑的篩選 采用擬三元相圖法，以和厚樸酚溶解度最高的蓖麻油為油相、PEG400為助乳化劑，對(duì)和厚樸酚溶解度＞50 mg/mL的乳化劑進(jìn)行篩選，將其按4∶1與助乳化劑復(fù)配成混合乳化劑（S/CoS），然后分別與油相按1∶9、2∶8、3∶7、4∶6、5∶5、6∶4、7∶3、8∶2、9∶1在錐形瓶中進(jìn)行混合，25 ℃、400 r/min磁力攪拌，逐滴加入純水，可觀察到體系由清變濁，攪拌均勻后變清，直到形成渾濁液體。記錄靜置2 h后體系不再變澄清時(shí)的加水量，同時(shí)觀察靜置12 h后油水分離情況。每個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，以3次實(shí)驗(yàn)的平均值繪制擬三元相圖[16]，使用Origin 2018（Origin Lab，USA）積分功能計(jì)算成乳區(qū)面積占擬三元相圖總面積的百分比（S值），并使用SPSS 20.0（IBM，USA）對(duì)S值進(jìn)行多重比較分析。結(jié)果顯示AG0810在用水滴定過程中一直為渾濁狀態(tài)，成乳區(qū)面積為0；TO3和LEP-10所制備的初乳在靜置12 h后出現(xiàn)油水分離現(xiàn)象，均與蓖麻油無法形成穩(wěn)定微乳；而CD6501雖可成乳，但混合攪拌過程中產(chǎn)生大量泡沫，不適于微乳制備。其余乳化劑均可形成穩(wěn)定微乳，其 擬三相圖（圖2）的S值按大小排序依次為ST80＞ S曲拉通X-100＞SOP-10＞SFT1379，T80作為乳化劑所得S值均顯著高于與其它供篩乳化劑，選擇T80作為HN-SMEDDS的乳化劑進(jìn)行下一步研究。 圖片 2.2.3 助乳化劑種類、油相種類及乳化劑T80在S/CoS中占比的單因素考察 以蓖麻油和T80作為初始油相和乳化劑，以擬三元相圖的S值為指標(biāo)（計(jì)算方法如“2.2.2”項(xiàng)），分別采用單因素法篩選和優(yōu)化HN-SMEDDS的助乳化劑、油相及乳化劑T80在S/CoS中的占比，結(jié)果如表2～4所示。4種助乳化劑的S值按大小排序依次為SPEG200＞S1,2-丙二醇＞SPEG400＞SLaborsol，PEG200作為助乳化劑所得S值顯著大于其它助乳化劑，因此，選擇PEG200為助乳化劑進(jìn)一步對(duì)油相進(jìn)行篩選；4種油相的S值按大小排序依次為S蓖麻油＞S花生油＞S玉米油＞S菜籽油，油相為蓖麻油和花生油時(shí)均有較大成乳區(qū)域，且蓖麻油作為油相所得S值顯著大于其它供篩油相，因此，選擇蓖麻油為油相進(jìn)一步考察乳化劑在S/CoS中占比對(duì)S值的影響；T80在S/CoS中比例＜50%時(shí)，乳化劑與助乳化劑會(huì)出現(xiàn)兩相分離情況，不能形成單相區(qū)，其成乳區(qū)面積為0；隨著乳化劑比例增加，S值逐漸增大，當(dāng)乳化劑占比增加達(dá)85%以上時(shí)，S值無顯著性差異。 圖片 圖片 2.2.4 花生油與蓖麻油比值優(yōu)化 由于蓖麻油黏度大、流動(dòng)性差，導(dǎo)致乳化時(shí)間較長(zhǎng)，雖然花生油作為油相時(shí)的S值小于蓖麻油，但其黏度較小，流動(dòng)性較大，乳化性能較好。綜合二者性能，將采用二者作為混合油相。固定T80-PEG200（4∶1）為S/CoS，考察花生油在混合油相中占比分別為25%、50%、75%、80%、85%、90%時(shí)成乳區(qū)大小，按“2.2.2”項(xiàng)方法繪制擬三元相圖并計(jì)算S值。結(jié)果顯示其S值分別為（24.69±0.99）%、（25.25±0.27）%、 （27.19±0.26）%、（31.30±0.42）%、（25.41±0.19）%、（23.35±0.36）%，隨著花生油比例的增加，S值先增大后減小，當(dāng)花生油占比達(dá)80%時(shí)S值達(dá)到最大值（31.30±0.42）%，顯著高于其他組。 2.3 星點(diǎn)設(shè)計(jì)-響應(yīng)面法優(yōu)化SMEDDS制備工藝及最優(yōu)處方的驗(yàn)證 以乳化劑T80在S/CoS中占比（X1）、花生油在油相中占比（X2）、混合乳化劑在自微乳中占比（X3）為考察因素，參考單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果以及文獻(xiàn)報(bào)道[12]，進(jìn)行星點(diǎn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果如表5所示，按表5的設(shè)計(jì)和“2.2.2”項(xiàng)方法制備自微乳并稀釋100倍制成微乳液，用馬爾文激光粒度分析儀測(cè)定其粒徑（25 ℃）。以微乳粒徑的倒數(shù)為響應(yīng)值（Y，表5），用DesignExpert 10.0.7.0（Stat-Ease公司）進(jìn)行響應(yīng)面分析（表6），其多元2次回歸模型為 Y＝0.046 13＋0.00482 X1－0.00530 X2＋0.01597 X3－0.00192 X1X2＋0.003 78 X1X3－0.00386 X2X3－0.010 06 X12－0.00223 X22－0.00870 X32，相關(guān)系數(shù)（R2）為0.914 6，模型顯著性水平P＜0.01，表明模型顯著可靠；各因素對(duì)粒徑的影響為混合乳化劑自微乳中占比（X3）＞花生油在油相中的占比（X2）＞乳化劑在S/CoS中的占比（X1）。 圖片 圖片 根據(jù)模型繪制響應(yīng)面圖（圖3），直觀反映各因素對(duì)響應(yīng)值及其之間交互作用的影響。圖3顯示X1、X2和X3任意兩因素之間響應(yīng)面圖均為凸面圖，表明微乳粒徑最小出現(xiàn)的本試驗(yàn)考察范圍內(nèi)，3個(gè)響應(yīng)面圖中的等高線，基本都呈正圓形，表明3個(gè)因素之間交互作用不顯著，通過擬合模型計(jì)算響應(yīng)值極值，得到理論上的最佳處方比例為X1＝0.618、X2＝−0.748、X3＝0.589，即最優(yōu)SMEDDS處方組成為T80 71.37%，PEG200 14.52%，花生油10.76%，蓖麻油3.34%。模型預(yù)測(cè)的微乳平均粒徑為17.14 nm。以最優(yōu)處方平行配制3份SMEDDS，稀釋100倍后進(jìn)行粒徑與電位測(cè)試，結(jié)果（表7）顯示，其平均粒徑為（16.86±0.33）nm，多分散系數(shù)（PDI）為0.208±0.032，Zeta電位為（−11.70±0.16）mV，與預(yù)測(cè)的平均粒徑的偏差為−1.70%，表明模型預(yù)測(cè)準(zhǔn)確可靠。 圖片 圖片 2.4 載藥質(zhì)量濃度對(duì)SMEDDS質(zhì)量影響研究 2.4.1 最大載藥質(zhì)量濃度的測(cè)定 取優(yōu)化后的5 mL SMEDDS，在磁力攪拌下加入過量和厚樸酚制成HN-SMEDDS，按“2.1.2”項(xiàng)方法制備HN-SMEDDS供試品溶液，在“2.1.3”項(xiàng)色譜條件下測(cè)定溶液中和厚樸酚質(zhì)量濃度，計(jì)算獲得該HN-SMEDDS最大載藥質(zhì)量濃度為（1.26±0.01）mg/mL（n＝3）。同時(shí)測(cè)定和厚樸酚在純水、人工胃液、人工小腸液中的溶解度，分別為（0.12±0.00）、（0.14±0.00）、 （0.14±0.00）mg/mL（n＝3）。和厚樸酚在SMEDDS中的溶解度較水中提高了10.5倍。 2.4.2 載藥質(zhì)量濃度對(duì)SMEDDS平均粒徑的影響 在優(yōu)化后的SMEDDS加入和厚樸酚，制成載藥質(zhì)量濃度分別為20、40、60、80、100、120 mg/mL的HN-SMEDDS，用純水稀釋100倍成乳，結(jié)果（表8）顯示，當(dāng)載藥質(zhì)量濃度在0～60 mg/mL時(shí)，乳劑平均粒徑在（15.530±0.139）～（17.600±0.119）nm，相差很��；當(dāng)載藥質(zhì)量濃度為80 mg/mL時(shí)，SMEDDS平均粒徑為（119.100±0.779）nm，超出了微乳的定義范圍（＜100 nm）。為此確定該處方HN- SMEDDS的載藥質(zhì)量濃度為60 mg/mL。 圖片 2.4.3 載藥質(zhì)量濃度對(duì)HN-SMEDDS與其稀釋成乳后外觀的影響研究 不同載藥質(zhì)量濃度的HN- SMEDDS外觀（圖4-A）顯示，HN-SMEDDS呈橙色油狀物，隨著載藥質(zhì)量濃度增加，顏色逐漸加深。用純水在400 r/min攪拌下稀釋100倍制成微乳液，其外觀（圖4-B）轉(zhuǎn)變?yōu)榈{(lán)色乳光溶液，隨著載藥質(zhì)量濃度增加，濁度增加。 圖片 2.5 HN-SMEDDS結(jié)構(gòu)表征 采用電導(dǎo)率法[17]考察水相對(duì)HN-SMEDDS結(jié)構(gòu)的影響。取優(yōu)化的HN-SMEDDS 10 mL，400 r/min攪拌條件下逐滴加入純水，記錄其電導(dǎo)率。結(jié)果顯示（圖5）該體系的電導(dǎo)率隨著純水加入量的增加，水相占比0～65%階段，電導(dǎo)率持續(xù)上升，形成油包水（W/O）型微乳，主要由分散于油相中的水分子相互碰撞導(dǎo)電[18]；水相占比65%～75%階段，電導(dǎo)率趨于平穩(wěn)，液體發(fā)生黏性碰撞，油水兩相互相交錯(cuò)，微乳由W/O型轉(zhuǎn)變成雙連續(xù)型[19]。水相占比＞75%階段，由于導(dǎo)電油滴被逐漸稀釋而導(dǎo)致導(dǎo)電率迅速下降，微乳由雙連續(xù)型轉(zhuǎn)變成O/W型[20]。故在稀釋成乳時(shí)，水相占比大于75%時(shí)方可形成O/W型微乳。 圖片 2.6 HN-SMEDDS質(zhì)量體外評(píng)價(jià) 2.6.1 優(yōu)化的HN-SMEDDS粒徑、Zeta電位及包封率 優(yōu)化的HN-SMEDDS用純水稀釋100倍制成微乳，測(cè)定其平均粒徑和Zeta電位。測(cè)得其平均粒徑為（16.83±0.35）nm（n＝3），PDI為0.189±0.021（n＝3），Zeta電位為（−15.530±0.205）mV（n＝3）。 取優(yōu)化后的空白SMEDDS 10 mL，加入0.6 g和厚樸酚，用磁力攪拌器攪拌直至和厚樸酚溶解，取1 mL上述液體加入2 mL甲醇，超聲10 min，轉(zhuǎn)移到10 mL量瓶中，冷卻至室溫后加甲醇稀釋至刻度，搖勻，過0.45 μm微孔濾膜，在“2.1.3”項(xiàng)色譜條件下測(cè)定和厚樸酚質(zhì)量濃度并計(jì)算其質(zhì)量（W1）；另取1 mL HN-SMEDD，按“2.1.2”項(xiàng)方法制備HN- SMEDDS供試品溶液，在“2.1.3”項(xiàng)色譜條件下測(cè)定和厚樸酚質(zhì)量濃度并計(jì)算其質(zhì)量（W2）。根據(jù)公式計(jì)算包封率。經(jīng)計(jì)算，HN-SMEDDS包封率為（99.720±0.001）%（n＝3）。結(jié)果顯示該自微乳包封率良好。 包封率＝W2/W1 W1為HN-SMEDDS中和厚樸酚的質(zhì)量，W2為微乳液經(jīng)高速離心后和厚樸酚的質(zhì)量 2.6.2 稀釋度對(duì)成乳的影響 優(yōu)化的HN-SMEDDS用純水分別稀釋5、10、20、50、100、200、400倍，觀察其外觀，測(cè)定其粒徑，并觀察其室溫放置24 h后有無沉淀或相分離。結(jié)果顯示，稀釋倍數(shù)對(duì)該微乳平均粒徑無顯著影響，平均粒徑穩(wěn)定在（16.160±0.096）nm左右，在放置24 h后依然呈澄清透明淡藍(lán)乳光狀態(tài)，穩(wěn)定性良好。 2.6.3 分散介質(zhì)對(duì)粒徑的影響 分別以純水、過濾海水、pH 6.8的PBS緩沖液，人工胃液、人工小腸液為分散介質(zhì)，將優(yōu)化的HN-SMEDDS稀釋20倍，測(cè)定其微乳粒徑。結(jié)果顯示所考察的分散介質(zhì)對(duì)微乳的平均粒徑?jīng)]有顯著性影響，平均粒徑均在16.29～17.12 nm，PDI＜0.310，該處方在不同分散介質(zhì)中的穩(wěn)定性良好。 2.6.4 凍融、貯存穩(wěn)定性 優(yōu)化的HN-SMEDDS，在−20 ℃條件下冷凍24 h，再在37 ℃水浴解凍24 h，如此反復(fù)凍融3次，用純水釋20倍，測(cè)得其平均粒徑為（14.580±0.105）nm（n＝3），PDI為 0.263±0.080（n＝3），Zeta電位為（−14.860±0.188）mV（n＝3），反復(fù)凍融對(duì)其質(zhì)量無顯著影響。優(yōu)化的HN-SMEDDS分別于4、25 ℃條件下保存15 d，每隔5 d取樣測(cè)定其平均粒徑，結(jié)果顯示自微乳在4、25 ℃條件下儲(chǔ)存15 d的平均粒徑分別為14.84～15.87 nm和14.58～18.78 nm，2種條件下貯存15 d后粒徑均無顯著性變化，最大粒徑均小于20 nm，表明自微乳15 d儲(chǔ)存穩(wěn)定性良好。 2.6.5 體外釋放度研究 采用透析袋擴(kuò)散法[21]測(cè)定HN-SMEDDS與和厚樸酚混懸液在人工胃液和人工小腸液中的釋放行為。分別將優(yōu)化的HN- SMEDDS用人工胃液和人工小腸液稀釋10倍制成HN-SMEDDS-人工胃液、HN-SMEDDS-人工小腸液，同時(shí)稱取適量和厚樸酚與人工胃液和人工小腸液分別混合，制備成6 mg/mL的和厚樸酚混懸液-人工胃液、和厚樸酚混懸液-人工小腸液，備用，取上述4種溶液13 mL分別裝于截留相對(duì)分子質(zhì)量為12 000～14 000的透析袋中，分別置于150 mL人工胃液和人工小腸液環(huán)境中，（37.0±0.5）℃、100 r/min磁力攪拌，在0.5、1、2、4、6、12、24、36、48、60、72 h分別取樣0.5 mL，每次取樣后補(bǔ)足等溫等量的溶出介質(zhì)。樣品加入0.5 mL甲醇，超聲，過0.45 μm微孔濾膜，按“2.1.3”項(xiàng)色譜條件測(cè)定和厚樸酚溶出量并繪制累積釋放曲線，結(jié)果（圖6）顯示，和厚樸酚混懸液在人工胃液和人工小腸液中初期釋放量大于微乳液，在12 h內(nèi)即達(dá)到飽和。而HN-SMEDDS在人工胃液和人工小腸液中釋放速度緩慢，累積釋放量均大于混懸液，并且在人工小腸液中有更高的釋放量。與和厚樸酚混懸液相比，HN- SMEDDS延長(zhǎng)了和厚樸酚在人工胃液中的釋放時(shí)間，且在人工小腸液中有更高的釋放度。 圖片 3 討論 將難溶性藥物制成自微乳可有效增加藥物的溶解度，是提高難溶性藥物生物利用度的有效方式[22]。自微乳制備的關(guān)鍵在于輔料的選擇及其配比的優(yōu)化，選擇對(duì)機(jī)體刺激小的輔料可促進(jìn)藥物吸收的同時(shí)減小藥物對(duì)機(jī)體的損傷，有研究表明聚氧乙烯氫化蓖麻油（CrEL）對(duì)血腦屏障的透過力顯著高于T80[23-24]，其有助于和厚樸酚進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)揮其神經(jīng)活性功效[25]，目前報(bào)道的HN-SMEDDS均以CrEL作為乳化劑[14-15]，和厚樸酚作為治療非神經(jīng)性疾病藥物時(shí)，以T80作為HN-SMEDDS的乳化劑或?qū)ι矬w產(chǎn)生更小的應(yīng)激反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)提供一種新的HN-SMEDDS處方，為HN-SMEDDS的制備提供了另一種可能。 粒徑大小是衡量自微乳質(zhì)量的重要評(píng)價(jià)指標(biāo)，粒徑越小，則微乳比表面積越大，藥物溶出與機(jī)體對(duì)藥物的吸收速率也越大[22]。在同等載藥質(zhì)量濃度下，本實(shí)驗(yàn)優(yōu)化的HN-SMEDDS處方微乳粒徑均比目前所報(bào)道的要小[14-15]，Zeta電位絕對(duì)值是現(xiàn)有報(bào)道[13]的7.6倍，微乳穩(wěn)定性更強(qiáng)。在自微乳體系中，加入藥物的量須在最大載藥質(zhì)量濃度以下，否則部分藥物在稀釋成乳后不能完全被包封，仍然以原藥形式懸浮于溶劑中。經(jīng)測(cè)定，本實(shí)驗(yàn)處方最大載藥質(zhì)量濃度約為120 mg/mL，但在載藥質(zhì)量濃度到達(dá)80 mg/mL時(shí)，微乳的粒徑突然增大，部分微球不能完全將和厚樸酚包裹，從而引起了液滴聚集，粒徑增大[16]，故最終選擇和厚樸酚的載藥質(zhì)量濃度為60 mg/mL。在該載藥質(zhì)量濃度以下，HN-SMEDDS稀釋成乳后的粒徑均小于20 nm，且稀釋倍數(shù)在10～400倍不會(huì)影響其粒徑大小，后續(xù)可根據(jù)需要在該稀釋范圍內(nèi)使用。 自微乳基質(zhì)膨脹、材料降解和溶質(zhì)擴(kuò)散是微乳釋放難溶性藥物的關(guān)鍵，當(dāng)自微乳核心中的聚合物鏈與藥物之間的相互作用更強(qiáng)時(shí)，藥物釋放緩慢[21]。本研究結(jié)果顯示和厚樸酚混懸液在5 h內(nèi)的體外溶出量均高于HN-SMEDDS，而達(dá)到平衡狀態(tài)時(shí)微乳的累積釋放量遠(yuǎn)高于混懸液。此外，HN-SMEDDS在人工胃液中的體外釋放量遠(yuǎn)低于在人工小腸液中的釋放量，提示HN-SMEDDS可以耐受酸性條件和體液稀釋，穩(wěn)定地將藥物固定在乳劑內(nèi)部，從而產(chǎn)生穩(wěn)定和持續(xù)的釋放[26]，待該乳劑進(jìn)入小腸部位中可快速?gòu)氐揍尫藕秃駱惴�，可使和厚樸酚得到充分吸收�?br /> 由于處方篩選的輔料不同，本研究?jī)?yōu)選的HN-SMEDDS組成不同于已有報(bào)道[14-15]，性能表征結(jié)果顯示，本研究的處方載藥質(zhì)量濃度更高、粒徑更小、穩(wěn)定性更好，有利于提高藥物在人工腸液中的釋放度。所述HN-SMEDDS原料易得，制備工藝簡(jiǎn)單，成本更優(yōu)，為HN-SMEDDS開發(fā)及其產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用提供科學(xué)參考依據(jù)。 利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突 參考文獻(xiàn)（略） 來 源：李桂華，趙子晨，蔣滿意，王世鋒，孫 云，張冬冬，李建龍，郭偉良，周永燦．和厚樸酚自微乳給藥系統(tǒng)制備工藝響應(yīng)面法優(yōu)化及質(zhì)量評(píng)價(jià)研究 [J]. 中草藥, 2022, 53(2): 362-371 .
免 責(zé) 申 明： |
