HPLC法測定清熱祛濕沖劑中綠原酸的含量 | HPLC法測定清熱祛濕沖劑中綠原酸的含量 |
| 發(fā)布時(shí)間:2011-12-26 信息來源:admin 發(fā)布人:admin 點(diǎn)擊次數(shù):2386 |
| 【摘要】 目的：建立HPLC法測定清熱祛濕沖劑中綠原酸的含量。方法：Diamonsil C18柱(5μm，4.6mm×250mm);流動(dòng)相：乙腈-0.4%磷酸水溶液(15：85);流速：1.0ml/min，檢測波長為327nm。結(jié)果：綠原酸的線性范圍為11.9μg/ml ～ 95.2μg/ml，r =1.0000。樣品平均回收率為97.53%，RSD為2.07%。結(jié)論：本法簡單、快速、結(jié)果準(zhǔn)確，可作為該制劑的質(zhì)量控制方法。
【關(guān)鍵詞】 HPLC法;綠原酸;清熱祛濕沖劑,上禾生物，金銀花綠原酸，金銀花提取物 Determination of Clorogenic acid Contents in Heat-clearing andDewetting Medicinal Granules by HPLCWang GeHenan Pharmaceutical Technical School(Kaifeng)(475003) Abstract：Objective：To establish HPLC means to detect the contents of Clorogenic acid in heat-clearing and dewetting medicinal granules.Methods：A C18柱column was used(5μm，4.6mm×250mm);The mobile phase：acetiontrile-0.4% aqueous solution of phosphoric acid(15：85);Velocity of flow：1.0 ml/min，wave length detected：327nm。Results：Linear range of clorogenic acid is 11.9μg/ml ～ 95.2μg/ml，r =1.0000.The average sample coefficient of recovery is 97.53%，RSD is 2.07%。Conclusion： This method is simple，rapid and accurate，which can be used as the quality controlling means of thismedicinal granules. Key words：Means of HPLC;Clorogenic acid;heat-clearing and dewetting medicinal granules 清熱祛濕沖劑由黨參、茵陳、野菊花等7味中藥材組成。功能清熱祛濕、益氣生津，用于暑濕病邪引起的四肢疲倦、食欲不振、身熱口干。方中茵陳和野菊花都含有綠原酸，但標(biāo)準(zhǔn)中無含量測定方法，不利于制劑的質(zhì)量控制。為更好的控制產(chǎn)品質(zhì)量，保證產(chǎn)品的療效，選用高效液相色譜法對方中綠原酸的含量測定進(jìn)行了研究，建立了分離效果好，簡便可行的含量測定方法，用于本制劑的質(zhì)量控制。 1 儀器與試藥 1.1 儀器 高效液相色譜儀(DIONEX);電子分析天平(JA1003);紫外可見分光光度計(jì)(TU-1800)，超聲波清洗器(KS-1500)。 1.2 試藥 綠原酸對照品(中國藥品生物檢定所，批號(hào)：110753-200212);清熱祛濕沖劑(自制批號(hào)：050115，050118，050121)，對比樣品：廣東眾生藥業(yè)股份有限公司;甲醇、乙睛為色譜純，水為重蒸餾水，其他試劑均為分析純。 2 方法與結(jié)果 2.1 色譜條件[1～2] 色譜柱;Diamonsil C18 柱(5μm，4.6mm×250mm);流動(dòng)相：乙腈-0.4%磷酸水溶液(15：85);流速：1.0ml/min，檢測波長為327nm;柱溫：室溫;進(jìn)樣量為20μl。 2.2 檢測波長的選擇 精密稱取綠原酸對照品適量，加50%的甲醇溶解并稀釋制成每1ml含5μg的溶液，照紫外分光光度法于200nm～700nm的波長范圍內(nèi)掃描，結(jié)果在327nm的波長處有最大吸收，故確定檢測波長為327 nm。 2.3 供試品溶液的制備 2.3.1 對照品溶液的制備 精密稱取綠原酸對照品適量，加50%的甲醇溶解并稀釋制成每1ml含40μg的溶液，作為對照品溶液。 2.3.2 樣品溶液的制備 取供試品(批號(hào)：050115)約5g，精密稱定，置50ml量瓶中，加50%的甲醇適量超聲溶解10min，放冷，加50%的甲醇至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液。 2.3.3 陰性樣品溶液的制備 照處方比例制備野菊花、茵陳之外的空白樣品，照2.3.2項(xiàng)下操作，制備陰性供試液。以上三種溶液按上述色譜條件進(jìn)樣，測定。結(jié)果綠原酸峰與其它組分峰分離度良好，陰性對照無干擾。 2.4 線性與范圍 精密稱取綠原酸對照品11.9mg，加50%的甲醇溶解并稀釋至100ml，搖勻，作為貯備液;分別精密量取貯備液1ml、2ml、4ml、6ml、8ml至10ml容量瓶中，加50%的甲醇稀釋至刻度，搖勻，作為供試液，在上述色譜條件下測定峰面積，并以進(jìn)樣濃度(C)為橫坐標(biāo)，峰面積積分值(A)為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為A=763.41C-1369.4(r =1.0000)。結(jié)果表明綠原酸濃度在11.9μg/ml ～ 95.2μg/ml的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。 2.5 精密度試驗(yàn) 取上述試驗(yàn)中濃度47.6 μg/ml的供試溶液，在上述色譜條件下測定，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，結(jié)果RSD為0.39%，n=6，這表明試驗(yàn)的精密度良好。 2.6 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn) 取重現(xiàn)性試驗(yàn)項(xiàng)下的樣品(050115)溶液，按上述色譜條件分別于0h、1h、3h、5h、8h進(jìn)樣，記錄峰面積，RSD為0.84%。試驗(yàn)結(jié)果表明，樣品溶液在8h內(nèi)進(jìn)樣是穩(wěn)定的。 2.7 重現(xiàn)性試驗(yàn) 稱取樣品(批號(hào)：050115)約5g，各6份，精密稱定，按供試品溶液的制備方法制備，在上述色譜條件下測定綠原酸含量，平均含量為5.525mg/袋，RSD為0.32%。試驗(yàn)結(jié)果表明，樣品含量測定方法的重現(xiàn)性良好。 2.8 加樣回收試驗(yàn) 分別稱取已知含量的樣品(050115)6份，精密稱定，和精密加入一定量的綠原酸，分別按2.3.2項(xiàng)下方法制備供試液，在上述色譜條件下測定綠原酸含量，結(jié)果平均回收率為97.53%，RSD為2.07%。 2.9 樣品的含量測定 分別精密吸取對照品溶液與樣品供試品溶液各20μl，按上述色譜條件進(jìn)樣，測定峰面積，并用外標(biāo)法計(jì)算綠原酸含量，結(jié)果見表1。表1 含量測定結(jié)果試驗(yàn)結(jié)果表明，本品與已上市產(chǎn)品綠原酸含量無明顯差異。 3 討論 3.1 樣品處理方法的選擇 本品處方中野菊花、茵陳含量較大，我們參考文獻(xiàn)[3]方法，以它們的共同有效成分綠原酸為指標(biāo)，采用50%的甲醇為溶劑，控制產(chǎn)品質(zhì)量。本試驗(yàn)比較了超聲溶解10min、20min、30min綠原酸的提取率，結(jié)果測定結(jié)果表明超聲處理10min、20min、30min，對其含量無明顯影響，因此我們選擇超聲處理10min。 3.2 本試驗(yàn)方法的優(yōu)點(diǎn) 本試驗(yàn)方法經(jīng)過精密度、穩(wěn)定性、重現(xiàn)性、加樣回收等相關(guān)指標(biāo)考察，表明該方法操作簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可作為清熱祛濕沖劑的含量測定方法。
【參考文獻(xiàn)】 [1] 姜麗霞.HPLC法測定野菊花中綠原酸的含量[J].中國藥品標(biāo)準(zhǔn)，2003，4(6)：54-56. [2] 劉影.茵陳藥材中綠原酸的含量測定[J].西北藥學(xué)雜志，2006，21(5)：207-209. [3] 袁學(xué)勤.HPLC法測定野菊花中綠原酸的含量[J].中成藥，2005，4(27)：493-494.
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