HPLC法測定復(fù)方膽通片中金銀花綠原酸的含量 | HPLC法測定復(fù)方膽通片中金銀花綠原酸的含量 |
| 發(fā)布時(shí)間:2011-12-26 信息來源:admin 發(fā)布人:admin 點(diǎn)擊次數(shù):2596 |
作者：靳國印 張世敏 白雪梅 田嘉銘 作者單位：(1. 河北北方學(xué)院中醫(yī)系, 河北 張家口 075000; 2. 河北北方學(xué)院實(shí)驗(yàn)中心, 河北 張家口 075000) 【關(guān)鍵詞】 綠原酸 金銀花提取物綠原酸 金銀花提取物 金銀花綠原酸 上禾生物綠原酸 復(fù)方膽通是臨床常用的治療急慢性膽囊炎，膽管炎，膽囊、膽管結(jié)石并感染，膽囊術(shù)后綜合征，膽道綜合性疾患等的中成藥。具有清熱利膽、解痙止痛的作用。由茵陳、膽通、溪黃草、穿心蓮、大黃組成。方中君藥茵陳主含6，7二甲氧基香豆素、綠原酸等成分[1]。本文建立了測定復(fù)方膽通片中茵陳的綠原酸含量的 HPLC法，為評價(jià)該制劑中茵陳的質(zhì)量指標(biāo)提供依據(jù)。 1 儀器與試藥 HP1100高效液相色譜儀(Aglient公司產(chǎn)品，包括在線脫氣機(jī)，四元泵，柱溫箱，VWD紫外檢測器，3D化學(xué)工作站)。分析天平1/100000(日本產(chǎn))。乙腈為色譜純，水為三蒸水;磷酸為分析純。綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品(中國藥品生物檢定所，批號：07532000111供含量測定用)。復(fù)方膽通片(廣東信宜市制藥廠生產(chǎn)，批號：040102 043102 040502)。 2 方法與條件 2.1 色譜條件 Hypersil BDS C18色譜柱(4.6mm×250mm,10μm),檢測波長327nm, 柱溫30℃，進(jìn)樣量20μl,流動相乙腈：0.4%的磷酸水溶液，梯度洗脫，程序見表1。色譜圖見圖1、2、3。表1 梯度洗脫情況 2.2 溶液的制備 2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取一定量的綠原酸對照品，用流動相乙腈：0.4%的磷酸水溶液=5∶95定容，制備成每毫升中含綠原酸1mg的標(biāo)準(zhǔn)液備用。 2.2.2 供試品溶液的制備 精密稱取1.000g樣品于10ml容量瓶中，用流動相乙腈：0.4%的磷酸水溶液=5∶95溶解并稀釋至刻度，超聲提取30min，取出，過0.45μm濾膜，放4℃冰箱備用。 2.2.3 陰性對照液的制備 按處方中藥味的比例，自配不含茵陳的群藥，按其工藝制成陰性對照，再按供試品溶液的制備方法制備并測定。結(jié)果陰性對照液在與綠原酸對照品相同保留時(shí)間處無色譜峰，故認(rèn)為無干擾。 2.3 線性關(guān)系考察 將綠原酸對照品溶液用流動相乙腈：0.4%的磷酸水溶液=5∶95稀釋，依次配制成0.5、0.25、0.125、0.0625、0.0313、0.0156mg·ml-1 的對照品溶液。分別精密吸取上述對照品溶液20μl注入液相色譜儀，測定峰面積積分值，以峰面積積分值(Y)為縱坐標(biāo)，含量(X)為橫坐標(biāo)作圖，得標(biāo)準(zhǔn)曲線�；貧w方程為Y=38.389X-28.043，r =0.99992,結(jié)果表明在0.1562～0.500 mg·ml-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。 2.4 精密度試驗(yàn) 取同一供試品溶液, 重復(fù)進(jìn)樣5次, 每次20μl，測定峰面積積分平均值為2500.20,計(jì)算RSD為 1.07%。 2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取待測樣品溶液,分別于0、1、3、5、8h進(jìn)樣20μl,結(jié)果表明供試品中綠原酸在8h內(nèi)穩(wěn)定, RSD1.08 %。 2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 精密稱取一定量的同批樣品5份,按2.2.2項(xiàng)下供試品溶液的制備方法制備及上述色譜條件測定,測得平均含量為0.4018 mg·g-1, 計(jì)算RSD2%(n=5)， 結(jié)果表明mg·g-1此法重復(fù)性良好。 2.7 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的同批樣品5份,精確加入綠原酸對照品,按正文供試品溶液的制備方法制備及上述色譜條件測定,結(jié)果見表2。表2 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果 2.8 樣品測定 取樣品溶液各20μl,以上述色譜條件,測定3批樣品,測其峰面積用回歸方程計(jì)算含量，結(jié)果見表3。表3 樣品含量測定結(jié)果 3 討論 3.1 提取液的選定 我們分別用甲醇、乙腈和不同比例的流動相提取，結(jié)果表明用初始流動相乙腈：0.4%的磷酸水溶液=5∶95提取最完全，故選用此提取液。 3.2 波長的選擇 經(jīng)紫外掃描，在280nm和327nm都有吸收，試驗(yàn)表明在327nm處綠原酸峰面積最大，分離度較好，且與參考文獻(xiàn)報(bào)道[2]一致，故選327nm。 3.3 色譜柱的選擇 我們分別用Hypersil BDS C18色譜柱(4.6mm×250mm,10μm)和YWG C18色譜柱(4.6mm×250mm,10μm)，結(jié)果顯示用Hypersil BDS C18色譜柱(4.6mm×250mm,10μm)綠原酸出峰時(shí)間適中，分離度較好，故選用此色譜柱。 3.4 含量的差別 從上述各表可以看出，雖是同一廠家的產(chǎn)品，但不同批號間含量的差別較大，可能與茵陳的產(chǎn)地、采收時(shí)間有關(guān)。所以，為控制中成藥復(fù)方膽通片的質(zhì)量，應(yīng)建立從原材料采購到工藝生產(chǎn)的一整套質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。 從以上實(shí)驗(yàn)看出， HPLC法測定復(fù)方膽通片中綠原酸的含量，精確度高，重復(fù)性好，在0.1562～0.500 mg·ml-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好.可作為復(fù)方膽通片中茵陳質(zhì)量指標(biāo)控制的一個(gè)方法。 2007年2月靳國印等：HPLC法測定復(fù)方膽通片中綠原酸的含量第1期2007年2月河北北方學(xué)院學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版)第1期 【參考文獻(xiàn)】 1 鄭漢臣，蔡少青. 藥用植物學(xué)與生藥學(xué)\[M\]. 北京：人民衛(wèi)生出版社, 2003.422 2 白雪梅，吳建翎，羅強(qiáng), 等. HPLC法測定四產(chǎn)地金銀花中綠原酸的含量\[J\]. 河北北方學(xué)院學(xué)報(bào), 2004，21(5):30 |
